β-arrestin和受体羧基末端在阿片受体介导的erk mapk信号通路中的作用

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1、上海医科大学硕士学位论文β-arrestin和受体羧基末端在阿片受体介导的ERKMAPK信号通路中的作用姓名：裘豪群申请学位级别：硕士专业：神经生物学指导教师：马兰20000501p-arrest-n和受体羧基末端在阿片受体介导的ERKMAPK～信号通路中的作用摘要阿片受焦是一类具有七次跨膜结构的G蛋白偶联的受体，主要分为6、u、K三种亚型，可以介导多种细胞反应。目前已知三种亚型阿片受体均能介导激活丝裂原蛋白激酶(MAPK)。我们在本课题中研究了与阿片受体内吞密切相关的B—arrestin蛋白和受体磷酸化在阿片受体介导的MA

2、PK信号通路中的作用。在人胚胎肾(HEK293)细胞中瞬时转染表达野生型6阿片受体(DOR)和K阿片受体(KOR)，特异的DOR激动剂DPDPE以及KOR激动剂U69593可以以时间和浓度依赖的方式激活ERKl／2MAPK。激动剂前处理可以诱导MAPK信号通路的脱敏。过量表达B—arrcstin1以郧-arrestin显性抑制性(dominantnegative)突变体B1V53D、B2v54D(可以抑制受体内吞)不影响阿片受体介导的ERKl／2的激活，暗示受体内吞和B—arrestin在阿片受体介导激活ERKl／2中不起重

3、要作用。缺失包含有磷酸化位点的羧基末端的DOR突变体(DOR—T)或缺失羧基末端的KOR突变体(KOR-T)同样可以介导MAPK的激活和脱敏。而且与野生型受体相同，两种受体突变体介导ERKl／2激活依赖于激动剂浓度和刺激时间，在激动剂浓度为l洲或刺激时间为3分钟时，ERKl／2磷酸化水平达到高峰，约为基础水平的4倍，激动剂预处理5分钟即可使ERKl／2磷酸化明显减弱，预处理30分钟可使ERKl／2磷酸化减弱至基础水平。这些结果暗示在HEK293细胞中阿片受体羧基末端和受体磷酸化不影响受体介导ERKl／2的激活。Rolesof

4、[3-arrestinandC-terminalofreceptorsinactivationofERKMAPKmediatedbyopioidreceptorsAbstraetOpioidreceptorsaremembersoftheGprotein—coupledreceptors(GPCR)familyandclassifiedintoatleastthreesubtypes，u，6，andKopioidreceptor．Activationofopioidreceptorscouldleadtoactivation

5、ofmitogen—activatedproteinkinase(MAPK)．Inpresentstudy,weexaminedthepossiblerolesof13-arrestinandC-terminusofopioidreceptorintheactivationofMAPKmediatedbyopioidreceptor,usingthe6andKopioidreceptortransientlytransfectedinHEK293cellsRSamodel．Thespecific6orKopioidrecep

6、toragonist，DPDPEorU69593，stimulatedthephosphorylationofERKMAPK(p42andp44isoforms)inatime-anddose-dependentmanner．Maximalactivation(about4foldsofbasal)wasachievedafter3-minexposureofcellsto1山ⅥDPDPEor1gMU69593．PretreatingwithagonistcouldleadtothedesensitizationofMAPK

7、．TruncatingtheintracellularC—terminusof6orKopioidreceptordidn’taffecttheefficacyandpotencybywhichtheagonistsstimulateMAPKactivation．Pretreatingthecellsexpressingthetruncated6orKopioidreceptorwithagonistscouldalsoinduceMAPKdesensitization．Thesimilar～L心Kactivationwas

8、detectedafteragoniststreatmentofcellsoverexpressing13-arrestin，ordominantnegative13-arrestin1(plV53D)and[3-arrestin2(132V54D)whichcaninhibitthein