胰岛素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的研究

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1、隶I初大◆璺万方数据硕士学位论文胰岛素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的研究万方数据flIItllII]JIPIIll111]IllllIllI]IDfY2782372TheE仃ectofInsulinontheOxidativeDamageinHumanRetinalPigmentEpithelialCellsAThesisSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofMasterofMedicineBYShiGuangmingSupervisedbyPr

2、of．LUANJieDepartmentofOphthalmology，SchoolofMedicine，SoutheastUniversity20142万方数据东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：刨日期

3、：p一．r口．1，∥东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布(包括刊登)论文的全部或部分内容。论文的公布(包括刊登)授权东南大学研究生院办理。研究生签名：蕊堋导师签名：也兰日期：!哆哆2乎．万方数据摘要胰岛素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响研究生：施光明导师：栾洁教授东南大学医学院【目的】探讨正

4、常及高浓度葡萄糖(11i曲glucose)条件下，．胰岛素(insulin)对人视网膜色素上皮细胞(culturedhumanretinalpigmentepithelialcells一19，ARPE一19)细胞生长、活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成、线粒体DNA氧化损伤标记物8．羟基鸟嘌呤(8．hydroxy一2’-deoxyguanosine，8-OHdG)及DNA氧化损伤修复标记物8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(human8-oxoguanineDNAglycosylasel，h

5、OGGI)表达的影响。【方法】体外培养人视网膜色素上皮细胞(culturedhumanretinalpigmentepithelialcells．19，ARPE．19)，分别置于5．6mmol／L葡萄糖(正常葡萄糖组)及30mmol／L葡萄糖(高糖组)条件下培养，以不同浓度胰岛素(oU几、10唧L、101u／L、102U／L、103U／L、104U／L)分别予以干预，各组培养12d,时、24d,时、48d"时，以噻唑蓝(MTT)比色法检测视网膜色数上皮细胞增生活力；ARPE．19细胞置于5．6mmol／L葡萄糖及

6、30mmol／L葡萄糖条件下培养，以103肌，104u／L胰岛素分别予以干预，干预12d'时、24d"时、48d'时，以2’，7’．二氯荧光素二乙酸酯(2’，7’-dichlorofluorescin-diacetate，DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)的产生情况，以免疫细胞化学(immunocytochemistry，icc)方法检测细胞内8一OHdG的表达量，以蛋白免疫印迹法(WesternBlot)检测胞浆00hOGGl的表达量。【结果】1、MTT法显

7、示：不同浓度(oU／L、100U／L、101U／L、102U／L、103U／L、104肌)胰岛素干预体外培养的人视网膜色素上皮细胞，正常浓度葡萄糖组及高浓度葡萄糖组的RPE细胞的增殖活力差别无统计学意义(P>0．05)。万方数据东南大学硕士学位论文2、DCFH—DA法：在正常浓度葡萄糖组，在各观察时间点，胰岛素浓度103U／L、104U／L干预组的ROS表达量与空白对照组相比，ROS表达量增高，差异有统计学意义(P<0．05)；在12小时胰岛素浓度104U／L干预组的ROS表达量与胰岛素浓度103U／L干预组相比

8、增高，差异有统计学意义(P<0．05)；细胞内ROS的表达量随103U／L、104帆胰岛素作用时间的延长呈增加的趋势，差异具有统计学意义(P