oatp1b1及cyp2c9基因多态性对氟伐他汀转运代谢影响的分子机制研究

《oatp1b1及cyp2c9基因多态性对氟伐他汀转运代谢影响的分子机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)iⅧ书签字日期：≯／多年石月2，日，学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论

2、文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名(手写)：c多￥甫导师签名。手轨妨签字目期：≯哆年6月2，日签字日期：加哆年衫月2／日摘要背景：氟伐他汀是第一个全化学合成的降胆固醇药物，是3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶A(HMG—CoA)J丕原酶抑制剂，适用于原发性高胆固醇及原

3、发性混合型血脂异常等疾病。CYP2C9为氟伐他汀体内代谢的主要亚酶，OATPlBl则是氟伐他汀进入肝细胞的转运体。研究显示CYSt．C9和OATPlBl的遗传变异均直接影响其生理功能，那么此遗传变异是否造成氟伐他汀的代谢转运的变化，从而引起氟伐他汀疗效和副作用的改变，确实令人关注。故有必要围绕CYP2C9及OATPlBl基因多态性对氟伐他汀的代谢转运影响展开系统研究，为氟伐他汀的合理应用提供理论与实验依据。目的：本课题拟通过构建野生型及突变型CYP2C9重组酶，研究CYP2C9基因多态性对氟伐他汀代谢的影响；同时通过构建OATPlBI*5、奎1a和"15重组质粒模型

4、，研究OATPlBl基因多态性对氟伐他汀转运的影响。综合分析CYP2C9及OATPlBl基因多态性对氟伐他汀基于转运代谢影响可能引起的临床疗效的改变。更好的服务于临床个体化治疗。方法：1、摸索和建立氟伐他汀重组酶的生物样本处理和HPLC检测方法。2、建立氟伐他汀在重组酶中的孵育方法。3、氟伐他汀在不同基因型CYP2C9重组酶中体外酶促动力学分析。实验分为空白对照组、CYP2C9·l、CYP2C9"3重组酶组，通过温孵时间、重组酶浓度、底物浓度三个方面来考察氟伐他汀在野生型和突变体重组酶的代谢动力学特征。采用建立的HPLC法测定重组酶体系中氟伐他汀及其代谢产物的量，比

5、较氟伐他汀在CYP2C9野生型与突变体之间的代谢动力学性质，并采用米氏方程比较氟伐他汀在野生型和突变体重组酶的代谢动力学参数V。一K。、ClinI等。4、建立氟伐他汀HEK293T细胞的生物样本处理和LC—MS检测方法。lJ摘要5、系统展开HEK293T、OATPlBI*5、*la和"15细胞的培养、传代及MTT试验。6、氟伐他汀在表达OATPlBl+5、OATPlBI‘la及枣15的HEK293T细胞中吸收转运实验分中为空白对照组、OATPlBI*la、OATPlBI*5与OATPIBI*15质粒组，通过按不同时问点考察对摄取过程的影响；通过按不同酶浓度点考察对摄

6、取过程的影响：通过每组分别加入系列浓度的氟伐他汀，考察底物浓度对摄取过程的影响。采用建立的LC—MS法测定HEK293T细胞样本中氟伐他汀浓度，考察三种不同基因型质粒模型中氟伐他汀的摄取动力学过程及其动力学参数(Km、Vm戤、CLi。。值)，分析两个突变位点对氟伐他汀转运的影响。7、数据统计分析。统计分析采用SPSS12．0软件进行数据处理，所有数据均以平均数士标准差(mean+SD)表示，P<0．05为具有显著性差异，P>0．05为无显著性差异，P<0．0l为具有极显著性差异。结果：l、建立的HPLC检测方法完全能够符合重组酶样品的分析测试的要求，具有高灵敏度。定

7、量下限为0．5uM。2、建立的氟伐他汀在CYP2C9重组酶中的孵育方法以及样品处理方法完全能够符合本课题的要求。此方法在多次实验中成功验证，已稳定建立。3、CYP2C9*1酶促动力学参数Km、V。ax及CLinI值分别为8．96士0．76uM、11．2士2．1lpmol／min／pmol、1．25：突变型CYP2C9奉3酶促动力学参数Km、Vm积及CLi。t值分别为1。91+0。32uM、0。81士0。02pmol／min／pmolP450、0．42，通过比较野生型CYP2C9*1和突变型CYP2C943重组酶的酶促动力学参数Km、Vm“及CLint值，统计分析