凡纳滨对虾(litopenaeus vannamei)血蓝蛋白免疫作用的初步研究

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1、谨以此论文献给我的父母、导师和所有关心帮助过我的朋友们！-------------杨留冰凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）血蓝蛋白免疫作用的初步研究学位论文答辩日期：指导教师签字：答辩委员会成员签字：独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日---------------

2、------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事项：1、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。（保密的学位论文在

3、解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)血蓝蛋白免疫作用的初步研究凡纳滨对虾（Litopenaeusvannamei）血蓝蛋白免疫作用的初步研究摘要本文研究了注射磷脂酰丝氨酸（PS）和病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要内容包括：①注射磷脂酰丝氨酸对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响；②注射哈维氏弧菌和金黄色葡萄球菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要研究结果如下：1注射PS对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响结果表明：注射0.25,0.5,

4、1μgPS对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、p75和p77亚基、mRNA表达以及血细胞总数（THC）、血细胞酚氧化酶原（pro-PO）、血浆酚氧化酶（PO）、血蓝蛋白酚氧化酶（Hd-PO）以及抗菌和溶菌活力影响显著（P<0.05）,而对照组无显著变化。血蓝蛋白含量在6h内略有下降，6~36h内呈峰值变化，24h时达到最大值；血蓝蛋白亚基p75、p77和基因表达在0~36h内呈峰值变化，12h时达到最大值。THC和pro-PO活力在0~12h内处于下降趋势，并在12h处达到最低值；PO活力在48h内呈峰值变化，于12h处达到最高值；Hd-PO活性在36h内呈峰值变化，12h时达到最大值。抗菌

5、和溶菌活力分别在36h和48h之内呈峰值变化，并分别于12h和24h处达到最高值。由此说明，PS能够激活凡纳滨对虾血蓝蛋白的酚氧化酶活性，引起一系列免疫指标的变化，表现出明显的时间剂量效应，在短时间内引起血蓝蛋白含量下降，随后机体启动血蓝蛋白的合成机制，证实PS是凡纳滨对虾血蓝蛋白发挥酚氧化酶活性的激活因子，同时PS还是对虾体内的一种免疫刺激物质，为对虾血蓝蛋白免疫活性的研究奠定了理论基础。2注射哈维氏弧菌和金黄色葡萄球菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响56结果表明，哈维氏弧菌（Vibroharveyi）（×10cells/mL,×10cells/mL）和高6浓度组（×

6、10cells/mL）金黄色葡萄球菌（Staphyloccocusaureus）对血蓝蛋白含量、p75和p77亚基、mRNA表达以及血浆PO、Hd-PO以及抗菌和溶菌活力影I凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)血蓝蛋白免疫作用的初步研究响显著（P<0.05）,而对照组则无显著变化。在48h之内：血蓝蛋白含量呈波动趋势，12h降为最低值，24h达最大；血蓝蛋白p75、p77亚基和mRNA表达呈峰值变化，其中p75、p77亚基表达于24h达峰值，mRNA表达于12h处达峰值。血浆PO和Hd-PO活力在24h处达最高值；抗菌和溶菌活力分别在12h和24h达最大值。5低浓度

7、组金黄色葡萄球菌（×10cells/mL）对血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性影响不显著，对血浆抗菌和溶菌活力影响显著（P<0.05）。其中，48h之内抗菌活力在12h达到最大值，而溶菌活力在24h处达到最大值。所有处理组中血细胞抗菌肽penaedin1/2表达不显著。结果说明，对虾在病原菌哈维氏弧菌入侵下启动了血蓝蛋白的合成，诱导血蓝蛋白基因的表达，新合成的血蓝蛋白主要执行酚氧化酶（Hd-PO）等免疫功能，参与免疫防御，进一步提升血淋巴中pro-PO激活系统的免疫调节作用；