靶向muc1嵌合抗原受体修饰的jurkat t细胞杀伤肝癌细胞的研究

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3、l嵌合抗原受体修饰的JurkatT细胞杀伤肝癌细胞的研究中文摘要嵌合抗原受体(chimericantigenreceptor，CAR)由--个scFv(singlechainvariablefragment)单链抗体可变区片段(由抗体VH氨基酸序列和VL区氨基酸序列经Linker连接而成)，通过铰链结构与源于TCR复合体或者IgE高亲和受体的跨膜和胞内信号结构域(源CD3[dTcsRIN免疫受体酪氨酸活化基序、源自CD28／4．1BB／OX40／ICOS／DAPl0／LCK共刺激信号分子胞内结构域)连接构

4、成。经CAR遗传修饰的T细胞(简称CAR．T)，能够高效识别和杀伤由于MHC分子或抗原加工相关蛋白酶体低表达、逃逸TCR介导免疫反应的肿瘤细胞。MUCl(Mucinl，黏蛋白1)是一种大分子跨膜糖蛋白，广泛高表达于乳腺癌、卵巢癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌等恶性肿瘤，它的胞外区主要由20个氨基酸(PDT附狐PGSTAPPAHGVTSA)的核心重复序列组成，是MUCl蛋白糖基化修饰位点，且相对于正常细胞，肿瘤细胞表面MUCl具有不同的糖基化结构。过表达和糖基化异常都使MUCl成为各种免疫治疗的理想

5、靶点。本课题中我们以MUCl作为免疫靶点，分别构建第一代与第三代靶向MUCl的CAR基因表达框(MUC1．CAR和G3MUC1．CAR)，并将其装入慢病毒载体，利用获得的重组慢病毒感染Jurkat细胞，通过CCK．8法、ELISA法、乳酸脱氢酶释放实验，分别检测在MUCl抗原存在条件下，CAR．T细胞的增殖、IL．2分泌量、杀伤作用。实验中我们成功构建两种靶向MUCl嵌合抗原受体表达框、重组慢病毒、JurkatCAR．T细胞株。两种经MUCl嵌合抗原受体修饰的JurkatCAR-T细胞均能特异识别MUCl

6、分子，杀伤MUCl高表达的肝癌细胞QGY-7701，而对MUCl低表达的正常肝细胞L02基本不杀伤；相对于第一代CAR，第三代CAR修饰的JurkatT细胞接触MUCl分子后，其增殖速度、IL．2分泌量和杀伤效率均显著优于第一代MUCl修饰细胞(MUCl．CAR)。本课题研究结果表明：靶向MUCl的JurkatCAR．T细胞能特异杀伤MUCl高表达的肝癌细胞，为应用MUCl．CAR修饰的患者原代T细胞用于肝癌过继性免疫万方数据中文摘要靶向MUCl嵌合抗原受体修饰的JurkatT细胞杀伤肝癌细胞的研究细胞治

7、疗的研究提供了可靠实验依据。关键词：嵌合抗原受体；MUCl；JurkatTcell；肝癌细胞作者：马宜冬II指导教师：钱其军(教授)万方数据—Th—ekillingeffectofMUC1chimericantigenrecepto卜engineeredJurkatTcellsonhepatocellularcarcinomaAbstractThekillingeffectofMUC1chimericantigenreceptoI．-engineeredJurkatTcellsonhepatocellul

8、ar●CarClnomaAbstractChimericantigenreceptors(CARs)usuallyconsistofanantigenbindingmoietyofamonoclonalantibody,anextracelluarhinge，atransmembraneregionandthesignalingendomainderivedfromITAMofCD3[．JFccRl7andcostimulat