磷酸肌酸对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的实验研究

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0O0QOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯3研究论文磷酸肌酸对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的实验研究前言⋯⋯⋯IoO00⋯⋯⋯⋯⋯00O00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6日lJ百⋯“”“””一““”“‘““”“一““”””⋯⋯⋯．6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9附图OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOQ⋯QOO⋯“⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯0OQ0⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00600⋯28综述磷酸肌酸对心脑缺血再灌注损伤的保护机制及其应用于对离体肝脏保护的展⋯OO0O00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致{射·····⋯·OO0⋯·······⋯········⋯⋯⋯⋯⋯···⋯⋯⋯··⋯⋯⋯··“41个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯00OQOO⋯⋯⋯42中文摘要磷酸肌酸对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用的实验研究摘要目的：在目前各移植中心，由于存在着供肝无法短时间内移植入受体，其中包括供体的运输时间、移植患者

3、因某些因素未充分完成术前准备、手术当中因多次手术摘除病肝困难等多种因素。因此，延长供肝保存时限，减少肝脏组织缺血损伤，降低供肝血流开放后的缺血再灌注损伤，成为亟待解决的问题。探讨不同浓度磷酸肌酸对冷保存的离体大鼠肝脏保护作用，并探讨其相关机理，进而为临床应用提供有效的依据。方法：选用Wister系雄性大鼠40只，普通级。将40只大鼠按随机数字表法分为对照组(单纯UW液灌注肝脏)10只；低剂量组A(以UW液为基液加入CP，浓度为lg／lOOml灌注肝脏)10只；中剂量组B(以UW液为基液加入CP，浓度为29／lOOml灌注肝脏)10只；高剂量组C(以UW液为

4、基液加入CP，浓度为39／lOOml灌注肝脏)10只。用大鼠肝脏单纯冷保存离体灌注模型，大鼠术前12h禁食、不禁水，称重，术前30min经左下肢肌注肝素(100U／lOOg)，10％水合氯醛以O．3ml／lOOg经腹腔麻醉，麻醉满意后，取腹部“十”字形切口进入腹腔，分离腹主动脉，经腹主动脉插管，灌注4℃HCA(离体肾保存用枸橼酸盐嘌呤溶液)液20ml，游离门静脉，经门静脉插管，对照组灌注单纯4"CUW液，实验组分别根据组别灌注以4℃UW液为基液的不同浓度CP，行供肝原位低压重力灌洗(灌洗量20m1)，同时打开流出道即剪开大鼠心脏，灌注同时冲洗肝脏内残余血液

5、，至肝脏颜色变淡呈均匀土黄色，分离左右三角韧带及镰状韧带，结扎左膈静脉，结扎并离断肝动脉、下腔静脉、门静脉、胆道，防止灌注液流失。完整切取肝脏，实验组置于与灌注肝脏所用的相同浓度含CP的4。C的Uw液中，对照组为4。C单纯Uw液保存。实验组应用含高、中、低三种不同磷酸肌酸剂量的UW液灌注并低温保存肝脏，对照组应用单纯UW液灌注并低温保存肝脏，测定不同时间点保存液中谷丙转氨酶(ALT)及乳酸脱氢酶(LDH)活性、肝脏组织中丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、肝细胞凋亡指数(apoptosisindex，AI)、NF—KB阳性表达率，观察脏组织学

6、变化。中文摘要结果：实验组不同剂量在冷保存12h后，ALT及LDH均低于对照组；18h后丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)各实验组均低于对照组，终点24h各组之间无明显差别；肝细胞凋亡指数(AI)及NF—KB阳性表达率实验组在冷保存12h及18h均低于对照组，终点24h各组之间无明显差别；组织学变化光镜示：部分肝小叶原有结构消失，出现排列紊乱，部分正常肝脏细胞出现空泡，甚至有变性产生。在肝脏中央静脉区域有一定程度的血液淤积，在肝血窦区域也存在同样问题。而这些变化和保存时间长短有着直接联系，随着冷保存时间的延长，改变逐渐加重。高、中、低剂量组的变化

7、较对照组减轻，各剂量之间无差别。高剂量实验组在经过24h冷保存后，肝组织中MDA含量以及保存液中ALT含量均高于对照组及中、低剂量组。结论：本实验表明，CP对离体肝脏冷保存有较好的保护作用，其保护移植肝脏的机制可能与减轻能量代谢障碍，降低氧自由基损伤两个方面作用有关，从而减轻细胞膜脂质过氧化损伤，稳定细胞膜，减轻再灌流时的肝脏损伤。尤其对于经过12h冷保持后的肝脏具有有效的保护作用，但无法延长最终即24h冷保存后肝脏的质量。因此CP在肝移植供肝保存中可能有较好的应用前景，但在临床肝移植中应用添加CP的灌注液国内外迄今还未见报道，还有待于进一步研究。另外关于

8、灌注液中加入CP的量即药物浓度有待进一步研究。肌酸关键词：大鼠肝脏