1型鸭甲肝病毒vp3蛋白间接elisa方法的建立及其b细胞表位鉴定

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1、．＾Ｖ．，．知翁；＊．一＇．：．分类号Ｓ８５８．３２户学号Ｓ２０１２３５３４，．．－－：？＾又在＾－－：．＼．二。＊．‘、．．＊－＞．、－－．．－＇＇一＇瓜一－？．＇Ａ－＇．－、／’，？；＇、四川巧业大学＼－’－■＂一占、知？人：；＾硕±学位论文．．？／／１型鸭甲肝病毒ＶＰ３蛋白间接化ＩＳＡ方法的＾＇Ｖ＜建立及其８细胞表位鉴定？＊？－－ｗ．、－ｒ。Ｖ一、’、＂＇＇．系－、．Ｖ．广如、．Ｘ左友林告，＇．？Ａ－？＾－

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3、０１５年６月一一＇－＞■、．．■．＜？？，．－Ｙ－－卢？＇、｜：．．．：．‘＇Ｎ：Ｖ．：＞．一‘＇＂＊？＇＊．．！Ｃ＼＼３’．一占＇．．占－，．Ｖ￥乂论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并。与我表示了谢意。

4、研究生签名；关于论文使用授权的声明：本人完全了解四川农业大学有关保留，学校有权保留并向国、使用学位论文的规定即家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可｜＾采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密□本论文保密，在解密后适用本授权。。＿年。＂（请在政上□内划Ｖ）研究生签名：ｆ年？＾月ｆ如导师签名：月心日狂四川农业大学硕±学位论文中文摘要一鸭甲型肝炎病毒（ｄｕｃｋｈｅｐａｔｉｔｉｓＡｖｉｒｕ

5、ｓ，ＤＨＡＶ）是种无囊膜的单股正链ＲＮＡ病毒，基因组ＲＮＡ编码结构蛋白和非结构蛋白。其中，结构蛋白对病毒的组装和致病性有重要作用。ＶＰ３蛋白是主要的结构蛋白，位于衣壳表面相对保守，是病毒粒子抗原性的主要决定－因子，存在着众多抗原表位，可诱导机体产生免疫应答。１型鸭甲肝病毒（ＤＨＡＶ１）是分ＡＶ－布最广，ＤＨＡＶ１的Ｗ３进行原核表达和纯化，、危害最大的ＤＨ本研究对并制备兔抗ＶＰ３多克隆抗体，通过鸡歴中和试验探究ＶＰ３多抗血清的中和活性；通过间接ＥＬＩＳＡ对ＶＰ３上可能存在的Ｂ抗原表位进行鉴定；建立基于ＶＰ３的检测ＤＨＡＶ抗体的间接ＥＵＳＡ方法。ＡＶ－

6、１．ＤＨ１ＶＰ３的原核表达、纯化及鉴定－ＰＣＲ得到了预期大小的ＶＰ３片殷将目的片段Ｔ－Ａ－Ｔｓ通过ＲＴ先后克隆至ＰＭＤ１９ｉｍｌｅ（ｐ）ＧＥＸ＾４Ｔ－ｌ－－和亚克隆至ｐ，分别构建了重组Ｔ质粒ＰＭＤ１９ＶＰ３和重组表达质粒ＰＧＥＸＶＰ３。°－ＶＰＢＬ２１（Ｄ投组蛋白约ｋＤ。ＰＧＥＸ３转化）后表达的重５０ｔＵ〇．２ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ、３７Ｃ诱导８ｈ表达量最大，且始终包涵体形式表达。采用切胶纯化获得的重组蛋白纯度高。ＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＶ－表明重组蛋白可被兔抗ＤＨＡ１抗体识别，具有良好的反应原性。２－Ｂ．ＤＨＡＶ１ＶＰ３的抗血清中和活性分析及细

7、胞表位鉴定利用纯化的ＶＰ３重组蛋白乳剂免疫雄兔，经五免后琼脂扩散银验的效价均达到１：化。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证明兔抗血清可与ＶＰ３蛋白特异性结合。鸡胚中和成验表明ＶＰ３抗血清的中和＇５＾２ＶＰ３序列效价为。运用生物信息学软件综合分析的柔初性、表面可及性、亲水性和抗■生３一ＶＰ３蛋原，预测出四条Ｂ细胞表位多肤送公司合成。Ｗ制备的ＶＰ抗，１多克隆抗体作白作抗原进行间接ＥＵＳＡ，确定了表位肋的最佳稀释度为：１２８０１，然后明亥浓度稀释的表位＇狀作抗原进行间接ＥＬＩＳＡ鉴