1型鸭甲肝病毒vp2和vp4蛋白原核表达及间接elisa检测方法的建立

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2、Ｐ４蛋白原挺林－－：＾＇、表达及间接ＥＬＩＳＡ检测方法的建立＾早■－■．如．—，．；；—？曹莖莖，，一－／．．、，＇＇＼．．＇、－＇‘、＼Ｖ’、？々－，，－Ｊ：？＞，八Ｖ．－？一－Ａ．－．、，指导教师．汪铭书教授ｉ＼＼：￣￣－一Ｎ知Ｖ；户＇心－ｒ程安春教授．Ｍ、＇＊—．交．－／？－／‘＊－？－：，，＞，＼＾－．、．？‘．警，、学科专业预防兽医学＾二．／，＞－研巧方向．禽病学

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4、‘．，—＊、．、．：、、、论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研％工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中。与我作了明确的说明并表示了谢意。＞／；＾研究生签名確营董１户年（月少日关于论文使用授权的声明目本人完全了解四川农业大学有关保留，、使用学位论文的规定Ｐ：学校有权

5、保留并ｌ向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可ｉｌ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。□本论文保密，在年解密后适用本授权。＿＿■ｆ户次ｌ研究生签名；霉臺霉？ｉ年ｔ月日导师签名：年月日＾四川农业大学硕丄学位论文中文摘要鸭甲肝炎病毒（ＤｕｃｋＨ巧ａｔｉｔｉｓＶｉｍｓ，ＤＨＡＶ）能引起维鸭爆发鸭病毒性肝炎，其具有发病急、病程短、传播迅速、病死率高等

6、特点，临床上主要表现为食欲减退，、神经症状、突然死亡和肝脏肿大出血又称歪脖病。目前几乎遍布世界各个给养鸭业带来了较大的经济损失ＤＨＡＶＤＨＡＶ－１、养鸭国家和地区。可分为，ＤＨＡＶ－２和ＤＨＡＶ－３Ｈ个基因型ＤＨＡＶ－１ＶＰ２、ＶＰ４。本研究主要针对的基因分别进行了分子特性分析、原核表达和基于两种蛋白的间接ＥＬＩＳＡ检测方法的建立等研究，主要结果如下：１．Ｉ型鸭甲巧病毒ＶＰ２、ＹＰ４基因的生物信息学分析和原核表达根据本试验室ＧｅｎＢａｎｋ中提交的１型鸭甲肝病毒Ｈ株燈录号ＪＱ３０１４６７Ｊ）序列－及

7、专业的蛋白的切割位点预测软件ＮｅｔＰｉｃｏＲｎａＶ１．０分析获得ＤＨＡＶＨＶＰ２、ＶＰ４５４３ｂ、２２５ｂ，１８１７５基因序列分别编码、个氨基酸，分子量分别，大小分别为ｐｐ－Ｉ约为２０．６ＫＤａ和７．７ｋＤａ，ＶＰ２、ＶＰ４分另Ｊ含有４个和１个Ｎ豆寇醜化位点、３个和１－３－个Ｎ糖基化位点个酪蛋白激酶ＩＩ踞酸化位点，ＰＣＲ、均含有抗原位点较多。经民ＴＰＥｘ－－ＶＰ２扩增、Ｔ克隆和亚克隆，成功构建了原核表达重姐质粒ｐｒｏＨＴｂ和°＋－ＶＰ４ｐＥＴ３２ｃ，分别转化到宿主菌ＢＬ２１，经表达条件优化，得出在巧Ｃ、（

8、）０．２ｍｍｏＬＩＰＴＧ诱导化，ＶＰ２重姐蛋白可在宿主菌中Ｗ包涵体，经ｌ／形式大量表达°切胶纯化得到较纯的ＶＰ２重姐蛋白。在３７Ｃ、０．６ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导他，ＶＰ４重组２？蛋白可在宿主菌中Ｗ可溶性形式表达，经ＮｉＴＡ柱