nrf2-are信号通路在脑缺血后血管新生作用机制及脑健片干预研究

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1、分类号：学校代码：学号：级：仏湖南中医药大学博士学位论文信号通路在脑缺血后血管新生作用机制及脑健片干预研究学科专业：中西医结合临床研究方向：脑血管疾病的防治研究作者姓名：佘颜导师姓名、职称：祭光先教授学位类型：科学学位中国湖南长沙二零一五年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他已经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得湖南中医药大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研

2、究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名年月日关于学位论文使用授权说明本人了解湖南中医药大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以釆用复印、縮印或其它手段保存学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名导师签名本研究受到以下课题基金的资助基金名称：国家重点基础研宄发展计划计划）项目课题名称：基于益气祛瘀生新法调控脑缺血后神经再生的创新药物研宄课题编号：基金名称：湖南省中药粉体与创新药物省

3、部共建国家重点实验室培育基地开放基金课题名称：补阳还五精简方调控信号通路对脑缺血后神经血管单元作用机理研宄课题编号：中文摘要目的从体内动物实验、体外细胞实验两方面探讨信号通路在脑缺血后血管新生的分子机制及脑健片的干预研究。方法（体内研究以大鼠为动物模型将大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组（灌胃：和脑健片组（灌胃：。各组给予相应处理后，在第天，第天，第天三个时间点取海马进行检测，免疫组织化学法检测血浆因子相关抗原（测定微血管密度（。测定脑组织活力（黄漂呤氧化酶法）、含量（疏代巴比妥酸法）、含

4、量（酶标法）及活性（比色法）。釆用和法检测大鼠海马组织中、、基因及蛋白表达。（体外研究采用浓度的作用大鼠血管内皮细胞建立体外血管内皮细胞氧化应激模型，根据不同处理分成正常组、模型组、补阳还五汤含药血清组、脑健片含药血清组、脑健片含药血清组、脑健片含药血清组组，采集细胞培养液进行检测，法及流式细胞术检测血管内皮细胞增殖及调亡，测定细胞活力（黄漂呤氧化酶法）、含量（疏代巴比妥酸法）、反含量（酶标法）。采用和法检测大鼠海马组织中、、基因及蛋白表达。结果（动物实验结果：假手术组在微血管只有少量的阳性表达，

5、模型组阳性表达微血管在第天时无明显差异，第天时表达明显升高（，随着动物生存时间延长，模型组阳性表达呈现下降趋势。给药组与模型组表达规律基本一致，其中给药组第天与模型组比较均有显著差异（，给药组组间比较差异无显著性。各个时间点模型组与假手术组比，脑组织含量、含量、活性明显降低（，含量升高（各用药组与模型组比较，其中第天含量、含量、活性与同时间点模型组比较差异有统计学意义（尸，第天含量、活性与同时间点模型组比较差异有统计学意义（。结果显示：假手术组、及呈少量表达，各个时间点模型组表达略高，但与假手术组

6、比较差异无统计学意义（尸，第天模型组HO-1mRNA，第天模型组与同时间点假手术组比较差异有统计学意义（。各给药组能不同程度上调表达，其巾在第天上调最明显与同时段模型组比较差异具有统计学意义（。和在第天上调最明显，与同时段模型组比较差异具有统计学意义（。各时间点各给药组之间比较差异无统计学意义（〉。结果显示：蛋白定位于蛋白定位于蛋白定位于内参照物定位于，假手术组中、及蛋白呈少量表达，模型组蛋白表达水平第天与假手术组比较差异有统计学意义尸，模型组蛋白表达量升高，第天、第天表达最明显，尸。各给药组能不

7、同程度上调蛋白表达，其中在第天及第天上调最明显，与同时段模型组比较差异具有统计学意义。各给药组能不同程度上调蛋白表达，其中在第天及第天上调最明显，与同时段模型组比较差异具有统计学意义（尸。各给药组第天能上调蛋白表达，与同时段模型组比较差异具有统计学意义（尸。（细胞实验结果：形态学、及流式细胞术检测到脑健片含药血清处理组较脑健片含药血清处理组和脑健片含药血清处理组细胞损伤程度低，抑制凋亡的效果最明显。与正常组比较，缺氧组，含量明显降低（尸含量显著升高与缺氧组比较，各给药组，含量明显升高含量显著降低（

8、尸，三组不同精简含药血清组中脑健片含药血清处理组抑制氧化应激反应效果最佳（。及结果显示：模型组，，及蛋白表达较正常组高，而用不同浓度脑健片含药血清处理后，能不同程度提高，，及蛋白表达，其中脑健片含药血清处理组上调最明显（。结论：通路在脑缺血缺氧损伤条件下早期被激活，的高表达上调了其下游的，丫水平，提示通路可能参与了脑缺血后内源性应激防御机制。“益气祛瘀生新”为治则的脑健片能促进脑缺血后血管新生，这种对血管保护作用可能是通过提高抗氧化酶活性，降低脂质过氧化程度及激活通路中，，等靶基因