rnai创制水稻抗黑条矮缩病材料的初步研究

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2、？、‘＇’、？—＇研究生姓名王少ｔ一－ｆ指导教师王志龙教授＇．王国梁教授学科专业作物遗传育种：也Ｖ義‘、‘４’；’：＊呼：的－＇，■；＇ａ’－－、’－Ｔｘ：、、，＾＇’？＇心；幹游赛皆站鸿Ｖ：鮮护诞親辩复藝．、，、！－分类号Ｓ５ｉ密级公开ＵＤＣ单位代码１０５３７觸斋糸朵夫＃硕：±ｒ学位论文ＲＮＡｉ创制水程抗黑条矮缩病材料的初步研究Ｔｈｅｒｅｌｉｍｉｎａｒａｎａｌｓｉｓｏｆｒｉｃｅｍａｔｅｒｉａｌ

3、ｐｙｙｔｈｒｏｕｇｈＲＮＡｉｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｇａｉｎｓｔｒｉｃｅｂｌａｃｋｓｔｒｅａｋｅｄｄｗａｒｆｖｉｒｕｓ研究生姓名王少岭指导教师王志龙教授王国梁教授学科专业作物遗传育种研究方向作物基因工程论文答辩日期２０１５年６月１３日答辩委员会主席刘勇论文评阅人李伟淘、李俊周、章鹏二〇—五年六月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在指导老师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加＾＾１标注和致谢的地方外，论文中不包含

4、其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得湖南农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：＾时间：年＜＾月关于论文使用授权的说明本人完全了解湖南农业大学有关保留、使用学位论文的规定：，即学校有权保留送交论文的复印件和电子稿，允许论文被查阅和借阅，可采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意湖南农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，并同

5、意将由此产生的收益捐赠给学校教育基金会用于发展研究生教育。（保密的学位论文在解密后应进守此协议）－研究生签名：时间：＞４＾年（月）曰＾导师签名：时间：年＾月曰摘要摘要水稻黑条矮缩病是由水稻黒条矮缩病毒（ＲｉｃｅｂｌａｃｋｓｔｒｅａｋｅｄｄｗａｒｆｖｉｒｕｓＲＢＳＤＶ），。ｅｒｆｅ引起的水稻病毒病，严重危害水箱安全生产本研究利用ＲＮＡｉＲＮＡｉｎｔｒｅｎｃｅ术，（）技：构建针对ＲＢＳＤＶ病毒本身及其传播媒介灰飞風的ＲＮＡｉ载体，转化ＲＢＳＤＶ水稻高感品种武

6、陵横１号，期获得抗水稻黑条矮缩病和灰飞風的水稻新种质，并探讨抗水稻黑条矮缩病机制。结果如下：ＬＷＲＢＳＤＶ的Ｓ４－、Ｓ８和Ｓ９序列为候选基因片断，利用两步法（ｐＥＮＴＲｐＡＮＤＡ）快速高效构建了５个ＲＮＡｉ载体，通过农杆菌介导的转化法转化武陵梗１号并获得转１基因Ｔ，其中含有Ｓ９干扰片段０株，Ｓ８转基因１３株，目｜代阳性植株的转基因植株前Ｓ４仍在转化过程中。同时，对含有Ｓ８干扰片段的转基因Ｔ２代植株进行温室ＲＢＳＤＶ接种一，初步实验结果表明，沉默Ｓ８的转基因株系对ＲＢＳＤＶ呈现定抗性。

7、２．利用基因停列拼接手段将ＲＢＳＤＶ的Ｓ９片段分别与Ｓ４、Ｓ８进行拼接，组合成—个拼接组合较大的干扰片段Ｓ４＆Ｓ９（）和Ｓ８＆Ｓ９（两个拼接组合），共构建３个ＲＮＡｉ拼接载体，分别转化武陵搜１号，获得了沉默Ｓ４＆Ｓ９和Ｓ８＆Ｓ９的转基因Ｔｉ代阳性植株分别有８株系和６６株系。３．构建了分别针对灰飞１１关键基因激活性蛋白激酶Ｃ受体（ＲｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣ化４ＣＡＴ）基因、６０Ｓ核糖体蛋白Ｌ５（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｒｏｔｅｉｎＬ５基

8、，ｐ，－－因－－ａｅｅｎａ、甘油酵３磯酸脱氨酶（Ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ３ｈｏｓｐｈｔｄｅｈｙｄｒｏｇｓｅＧ乂ＰＤ妨）基因、ｐ，，６０Ｓ核糖体蛋白Ｌ７ａ（６０ＳｒｉｂｏｓｏｍａｌｒｏｔｅｉｎＬ７ａｉ？／王７ａ）基因、６脂核糖体蛋白Ｌ８（６０Ｓｐ，ｒｉｂｏｓｏｍａｌｐｒｏｔｅｉｎＬ８基因、线粒体ＮＡＤＨ脱