介体异沙叶蝉与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作蛋白质的鉴定

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文介体异沙叶蝉与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作蛋白质的鉴定IdentiiicationofProteinsofVectorPsammotet/ixalienusI

2、的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：5年5*月巧日关于论文使用授权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名：时间：h/S年5月巧日中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表V文题目介体异沙叶蝉与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作蛋白质的鉴定沧文作者赵艺泽

3、专业植物病理学研究方向分子植物病理学-：!导教师王锡锋培养单位（研究所)植物保护研究所硕（博)姓名职称单位专业签名导师_一厂茺人硕导口盲评博导口硕导口

4、博导口答辩主研究员硕导口中国科学院微生物研方荣祥微生物学W院士博导V究所硕导口生物化学与李毅教授北京大学博导v分子生物学硕导口中国农业科学院植物周雪平教授植物病理学博导v保护研究所答硕导口<7范在丰教授中国农业大学植物病理学博导v辩硕导口韩成贵教授中国农业大学植物病理学博导v委硕导口博导口员硕导口博导口硕导口博导口会议记录（秘书）李莉论文答辩时间地点2015年5月17日，中国农业科学院植物保护研究所密级:论文编号:中国农业科

5、学院学位论文介体异沙叶蝉与小麦矮缩病毒外壳蛋白互作蛋白质的鉴定IdentificationofProteinsofVectorPsammotettixalienusL.InteractedwiththeCoatProteinofWheatdwarfvirus硕士研究生：赵艺泽指导教师：王锡锋研究员申请学位类别：农学硕士专业：植物病理学研究方向：分子植物病理学培养单位：植物保护研究所研究生院2015年5月Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationIdentificationofProteinsofVe

6、ctorPsammotettixalienusL.InteractedwiththeCoatProteinofWheatdwarfvirusMS.Candidate:ZhaoYizeAdvisor:Prof.WangXifengMajor:PlantPathologySpecialty:MolecularPlantPathologyMay2015摘要异沙叶蝉（PsammotettixalienusL.）是一种重要的传毒介体昆虫，以持久性非增殖方式传播小麦矮缩病毒（Wheatdwarfvirus,WDV），该病毒引起的小麦矮缩病是世界上重要病毒病害之一。为了研究异沙叶蝉传播W

7、DV的分子机制，本论文利用分离泛素酵母双杂交膜系统，以WDV的外壳蛋白（Capsidprotein,CP）基因为诱饵对异沙叶蝉cDNA文库进行了筛选。以实验室饲养的异沙叶蝉为材料，提取其总RNA后，利用SMART法构建得到以pPR3-N为载体的异沙叶蝉分离泛素酵母双杂交膜系统cDNA文库；同时构建了带有SfiI酶切位点的诱饵载体pDHB1-WDVCP。经功能检测后用诱饵载体初步筛选pPR3-N空文库，得到了适合筛库的条件和确定了His基因产物抑制剂3-氨基-1,2,4-三唑（3-AT）的使用浓度。然后用诱饵载体筛选异沙叶蝉cDNA文库，对筛选结果进行了分析，再通过共转验证和

8、β-半乳糖苷酶检测进一步验证是否发生互作。利用Uniprot和KEGG在线网站，对筛选到的蛋白进行GeneOntology（GO）注释和Pathway分析。66检测结果表明：初级文库库容量超过2.0×10cfu；文库实际扩增数量大于1.3×10cfu；文库重组率大于97%；扩增文库插入片段平均长度大于1000bp，表明异沙叶蝉cDNA文库的质量较高。酶切验证显示诱饵载体pDHB1-WDVCP中CP基因的插入完整而准确。功能检测表明融合-1蛋白能够正确表达。在3-AT浓度为5mmol∙L的筛选条件下，诱饵载体筛选异沙