野蔷薇苷对缺氧性心肌损伤的保护作用及其机制研究

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1、授予单位代码１００８９学号獅请号２０１３２０４９中關书分类号Ｒ？６６＿＿ＨｅｂｅｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ硕士学位论文科学学位野蔷薇苷对缺氧性心肌损伤的保护作用及其机制研宄研宄生：髙文扬导师：李灵芝教授指导老师：李建宇讲师专业：药理学二级学院：武警后勤学院２０１６年３月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研宄所获得的研宄成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科

2、大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要一内容相关的论文，试验材料、原始数据、，第署名为单位河北医科大学。。申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有否则，承担相应法律责任Ｓ研究生签导师签章二级学院领章＾＾７＾＾＾河北医科大学研宄生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研宄。成果，指导教师对此进行了审定本论文由本人独立撰写，文责自负。研宄生签名导师签＾７Ｗ年“

3、曰７目录中文摘要１英文摘要５英文缩写１０研宄论文野蔷薇苷对缺氧性心肌损伤的保护作用及其机制研究第一部分野蔷薇苷对急性低压缺氧诱导大鼠心肌损伤的保护作用Ｉｔｓ１１材料与方法１３觀１７關１９讨论２３雜２５参考文献２６第二部分野蔷薇苷对Ｈ９ｃ２心肌细胞缺氧性损伤的保护作用及机制研究贿２８材料与方法３０棘３８酬４２满５７结论６２参考文献６３综述细胞死亡信号转导通路在心肌组织中的相互作用６５麵７８

4、个人简历７９中文摘要野蔷薇苷对缺氧性心肌损伤的保护作用及其机制研宄摘要目的：通过建立心肌缺氧损伤的动物模型和细胞模型，观察野蔷薇苷在体内对缺氧诱导心肌组织、细胞损伤的保护作用及其作用机制，为研发新型抗缺氧药物提供理论基础和实验依据。方法：本实验内容分为两部分。第一部分：野蔷薇苷对急性低压缺氧诱导大鼠心肌损伤的保护。１实验分组：清洁级雄性大鼠５０只，体重（２００±２０）ｇ，随机分为常氧对照组（Ｃ）、急性缺氧模型组（Ｍ）、野蔷薇苷高浓度组Ｈ、野蔷薇苷（）低浓度组（Ｌ）、地塞

5、米松阳性对照组（Ｎ）。２急性低压缺氧模型的建立：将大鼠置于低压氧舱内，通过调节低压氧舱的参数设置，模拟海拔７０００ｍ高原环境的大气压，并将舱内低氧环境维持１８ｈ，建立大鼠急性低压缺氧损伤模型。３利用生化检测试剂盒，检测各组大鼠心肌组织匀浆中的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）、谷胱甘肽（ＧＳＨ）、乳酸脱氣酶（ＬＤＨ）的含量。４采ａｒ－ＯＮａｌｓｅｎ染色法，用ＨＥ染色法和ｇ对心肌组织进行染色，观察急性缺氧导致的病理学改变。５利用Ｗｅｓ－ｔｅｍｂｌｏｔ技术检测心肌组织中凋亡相关蛋白

6、ＣｙｔＣ的表达。第二部分：野蔷薇苷对Ｈ９ｃ２心肌细胞缺氧性损伤的保护作用及机制研宄。１实验分组：将生长状态良好的Ｈ９ｃ２心肌细胞随机分为５组：正常对照组（Ｃ）、缺氧模型组（Ｍ）、野蔷薇苷组（Ｒ）、野蔷薇苷苷元组（委陵菜酸，Ｔ）、阳性药维拉帕米组（Ｗ）。°２Ｈ９ｃ２心肌细胞体外缺氧模型的建立：利用三气培养箱（３７Ｃ，９５％Ｎ－５％Ｃ０Ｈ９ｃ２心２２），建立肌细胞缺氧损伤模型，并利用ＭＴＴ法确定Ｈ９ｃ２心肌细胞的适宜缺氧时间及野蔷薇苷的给药剂量。３利用生化检测试剂盒，分别检测各组心肌细

7、胞培养液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出量以及细胞内超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、丙二醛（ＭＤＡ）１中文摘要和谷胱甘肽。（ＧＳＨ）含量４通过光学倒置显微镜观察各组心肌细胞形态结构的变化；利用台盼蓝染色观察细胞存活情况ｈｅｓｔ－ＰＩ染色技术观察；在荧光显微镜下利用Ｈｏｃ各组Ｈ９ｃ２心肌细胞的凋亡形态学改变。５利用流式细胞术检测各组Ｈ９ｃ２心肌细胞的凋亡率。６利用Ｗｅｓｔｅｍ－Ｂｌｏｔ方法检测各组细胞的线粒体凋亡通路相关蛋白－、、－Ｂｃｌ２Ｂａｘ、ＣｔＣ、Ｃａｓａｓｅ９ｃｌｅａｖｅｄＣａ

8、ｓａｓｅ３蛋白水平。并在力口入ｙｐｐＥＲＫ－／１／２阻滞剂ＰＤ９８０５９后，检测ＥＲＫｌ２和以上五种凋亡相关蛋白的ｐ。表达变化，从而探究野蔷薇苷对抗缺氧性心肌损伤的作用机制一结果：第部分：野蔷薇苷对急性低压缺氧诱导大鼠心肌损伤的保护作用。１实验动物基本情况：利用低压