芒果苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

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1、南方医科大学2009级博士学位论文芒果苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究StudiesonProtectiveEffectsandMechanismsofMangiferinonCerebralIschemia-reperfusionInjury课题来源：广东省医学科研基金课题(项目编号B2012066)学位申请人李雪导师姓名罗炳德教授专业名称营养与食品卫生学培养类培养层所在学型委托培养次博士研究生院公共卫生与热带医学院2014年5月1日广州博士学位论文芒果苷对脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究研究背景和目的摘要脑血管疾病是世界最常见的疾病之一，因其发病率高、致残率高、死亡率高的

2、特点，严重威胁人类生命与健康。缺血性脑血管病(ischemiccerebrovasculardisease，ICVD)指供应大脑血流的主要动脉发生狭窄或闭塞，结果导致脑组织(特别是大脑中动脉区域)急剧缺血缺氧，最终引起局部脑组织发生缺血或坏死，出现相应的临床症状。缺血性脑卒中后可通过溶解血栓或机械再通的方式恢复缺血区的血液灌注，但一些病人在缺血后再灌注后不仅没有使组织功能恢复，反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重，即我们所说的脑缺血再灌注损伤(cerebralischemia-reperfusionfIR)injury)。脑缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程，近来研究发现，脑血流

3、中断和再灌注使脑的细胞产生损伤是一个快速的级联反应，这个级联反应包括许多环节，如能量障碍、细胞酸中毒、兴奋性氨基酸释放增加、细胞内钙失稳态、自由基生成、凋亡基因激活等。这些环节互为因果，彼此重叠，并相互联系，形成恶性循环，最终导致细胞凋亡或坏死。目前虽然对脑缺血的病理生理机制研究取得重大进展，但治疗选择仍然有限。一种成功抢救缺血组织的治疗方式是恢复再灌注，溶解血栓的重组组织型纤溶酶原激活剂型(recombinanttissueplasminogenactivator，rt．PA)是唯一批准临床使用的药物，然而其时间窗有限(3l卜4．5h)，且造成出血并加重缺血再灌注损伤的风险。另一种方法则是

4、以缺血级联反应中的各个关键环节为靶点，阻断其发展，达到神经保护的目的。遗憾的是虽然目前许多神经保护剂在动物实验上能缩小脑梗塞体积并改善神经功能，但没有一种被证实临床有效。摘要天然存在的抗氧化物质所具有的神经保护作用近来成为人们关注的焦点。●芒果苷(mangineferin，MAG)是一种天然的多酚类物质，广泛存在于许多药材如百合科植物知母以及芒果叶中。芒果苷分子中的四个芳香族羟基使其具有较强的抗辐射以及抗氧化作用。大量已发表的体内及体外研究表明芒果苷在炎症、氧化应激、肿瘤生长、微生物感染、代谢调节、免疫调节以及辐射保护方面具有广泛的药理学活性。本研究通过在整体动物水平和细胞水平上来建立神经元

5、缺血再灌注损伤模型，探讨芒果苷对缺血性脑损伤的保护作用及其可能的机制，从而为芒果苷更安全、合理的应用于临床提供理论依据。研究方法在整体动物实验中，(1)采用线栓法阻塞大鼠中动脉(middlecerebralarteryocclusion，MCAO)，建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察MAG对脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能评分，评价造模是否成功。大鼠脑缺血2h，再灌注24h后，观察存活大鼠行为变化，参考Zea．10nga的5分制评分标准进行神经行为学评分。在剂量研究中，将大鼠随机分成6组：模型组、假手术组、阳性对照组(edaravone，Eda)、MAG各剂量组(5mg／kg、10mg／kg、

6、20mg／kg)。假手术组除不插线外，其余步骤同上。假手术组与模型组均给予等体积生理盐水。HE染色观察组织形态学改变，观察MAG对大鼠缺血大脑的梗塞面积及含水量的影响；(2)较长周期给药实验中，将大鼠随机分成6组：模型组、假手术组、阳性对照组、MAG的高、中、低各剂量组，造模成功后分别于第2、4、6、8d，称量体重，采用姿势反射试验、肢体不对称试验两种方法作为行为学评价指标，观察MAG对大鼠缺血再灌注损伤后运动功能康复的影响；(3)氧化应激生化指标的检测：实验大鼠分组同上。脑缺血2h，再灌注24h后，比色法检测MAG对脑组织匀浆中丙二醛(malonaldehyde，MDA)，还原型谷胱甘肽(

7、glutathione，GSH)含量和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性的影响；(4)炎症生化指标的检测：实验大鼠分组同上。RT．PCR检测MAG对脑组织匀浆中炎Il博士学位论文性因子肿瘤坏死因子一Q(tumornecrosisfactor．旺，TNF．0【)、白介素．1B(Interleukin．1p，IL．1p)在转录水平表达的影响，随后实验采用ELISA法对上述两种炎性