小叶杨ft基因家族的克隆及功能验证

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1、分类号S722学位代码309密级GK学校代码10298学号3120413卷京林戒大学士研究生学位论文论文题目：小叶杨FT基因家族的克隆及功能验证作者：朱燕宇专业：林木遗传育种研究方向：林业生物技术指导教师：陈英副教授黄敏仁教授二〇一五年六月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经特别注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式注明并表示感谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文

2、出版授权书本人及导师完全同意《中国博士学位论文全文数据库出版章程》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库出版章程》（以下简称“章程”，见www.cnki.net),愿意将本人的学位论文提交“中国学术期刊（光盘版）电子杂志社”在《中国博士学位论文全文数据库》、《中国优秀硕士学位论文全文数据库》中全文发表和以电子、网络形式公开出版，并同意编入CNKI《中国知识资源总库》，在《中国博颂士学位论文评价数据库》中使用和在互联网上传播，同意按“章程”规定享受相关权益。论文密级：这公开□保密（_年_月至_年_月）（保密的嗲像讼式在斛密后裘逢守此你试）w/r年厶月（w/r年'月致谢我的毕

3、业论文是在陈英老师的精心指导和大力支持下完成的，她渊博的知识开阔的视野给了我深深的启迪。本篇论文凝聚着她的心血，她严谨的态度和敬业的精神深深地感染了我，对我的工作学习产生了无与伦比的影响，在此我向她表示衷心的谢意。另外，还要感谢黄敏仁老师对我实验的督促以及对我个人的鞭策，使我能深刻体会到时间的紧迫性，如期完成毕业论文。在此，我也要向他道一声感谢。本论文的顺利完成，离不开各位老师、同学和朋友的关心以及帮助。在此感谢林木遗传育种组的王明庥院士、施季森教授、徐立安教授、王章荣教授、潘惠新教授、诸葛强教授、李火根教授、尹佟明教授、季孔庶教授、徐进教授、童春发教授、陈金慧教授、

4、席梦丽教授、胥猛副教授、边黎明副教授、甄艳副教授、王光萍老师、杨立伟老师、陆叶老师的指导和帮助；感谢60523实验室的程强副教授对于我实验的指导和思路的扩展，使得我能更加丰富我的论文；感谢实验室的杨春霞师姐、宣磊师兄、朱嵊师兄、王浩然师兄、邵志龙师兄；同学陈彩慧、王伟、倪州献、王建文、周琦、顾胤聪、徐嘉娟、王德源；以及李爽师妹、刘思安师弟等人的热心帮助，如果没有他们的帮助和支持是没办法完成我的学习论文的。岁月如歌，一晃眼研究生的三年又过去了。回首在南林待的这七年，是你教会了我学会了坚强，学会了独立，让我从当年的青涩蜕变为如今的成熟。感谢我的母校，南林。此刻，站在毕业当

5、口，我想大声地喊一声：南林，再见!社会，我来了！作者：朱燕宇二○一五年六月十二日摘要FT（FLOWERINGLOCUST）基因是植物开花的诱导因子，是最重要的开花整合因子，也是花发育途径的交汇点。植物之所以能开花是因为对开花调控发挥关键作用的FT基因能够整合来自花发育途径的信号因子。本实验以小叶杨为材料，通过同源克隆的方法获得了3个FT基因，命名为PsFT3、PsFT4和PsFT5，并分别构建表达载体进行遗传转化来验证其功能。主要研究结果如下：1.采用同源克隆方法获得了3个小叶杨FT基因。这3个基因的开放阅读框都是525bp，编码174个氨基酸残基的蛋白质，具有典型的

6、PEBP结构域。序列分析结果表明小叶杨3个PsFT蛋白序列之间的相似性高达97.1%，有5个氨基酸不同。另外，与其他植物的FT蛋白也具有很高的相似性。从这3个基因和11种植物的FT开花基因氨基酸序列的遗传进化分析来看：FT开花基因的进化程度较小，和毛果杨、美洲黑杨亲缘关系最近，与毛白杨、山毛榉、野茶树等亲缘关系较近，与龙眼、荔枝、温州蜜柑等亲缘关系相对较远。2.通过Gateway技术将克隆得到的3个基因分别克隆植物过量表达载体pBI121和病毒转导载体TRV中。3.通过农杆菌GV3101介导将由病毒转导载体TRV携带的3个小叶杨PsFT基因注射进幼嫩的烟草中，发现转基

7、因烟草明显比非转基因烟草提前开花。通过实时定量检测进一步证明了目的基因在转基因植株中表达量很高。4.经农杆菌GV3101介导将PsFT3、PsFT4、PsFT5基因分别转化拟南芥和山新杨，通过卡那霉素筛选获得三个基因的转基因植株。对转基因植株进行分子生物学检测和表型观察。发现转基因拟南芥比野生型拟南芥早开花。在对转基因杨树诱导的下游基因AP1、SOC1、LFY的表达情况的实时定量检测中发现，FT基因能激活下游基因的表达，进一步证明了小叶杨PsFT基因已经整合到了山新杨基因组中，并能稳定表达。关键词：小叶杨；FLOWERINGLOCUST；提早开花Cl