盘羊和巴什拜羊mhc-drb1、drb3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究

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1、分类号：密级：学号：2007201014单位代码：10759石河子大学博士学位论文盘羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究学位申请人冷青文指导教师剡根强教授申请学位门类级别农学博士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向免疫遗传与抗病机理所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年6月PolymorphismoftheOLA-DRB1、DRB3exon2intheArgaliandBashibaisheeppopulationanditsassociation

2、withMycoplasmaovipneumoniaeinfectionADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofDoctorofAgricultureByLengQing-wen(AnimalGenetics,BreedingandReproduction)DissertationSupervisor:ProfessorYanGen-qiangJune,2015

3、石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名：使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论

4、文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：导师签名：盘羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究摘要主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibilityComplex，MHC)是脊椎动物染色体中紧密连锁、高度多态的区域，OLA是绵羊淋巴细胞表面抗原（OvineLymphocyteAntigen）即绵羊MHC的简称。MHC基因的高度多态性对病原的免疫识别起重要作用，特别是MHC-Ⅱ类分

5、子的DRB基因编码的抗原具有重要的免疫调控作用，与许多动物疾病的易感性、抗性及免疫应答密切相关。绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae，M.O)是传染性胸膜肺炎的病原之一，主要引起绵羊、山羊及野生绵羊发病，且不同绵羊品种对M.O的易感性存在明显差异。本研究在野生盘羊与新疆地方品种巴什拜羊杂交一代羔羊暴发绵羊支原体肺炎确诊基础上，利用绵羊肺炎支原体抗体Elisa试剂盒检测盘羊和巴什拜羊，采用PCR-RFLP方法检测分析M.O阳性及阴性巴什拜羊和盘羊OLA-DRB1、DRB3外显子2

6、多态性及差异，探索两种不同品种绵羊OLA与M.O感染的相关性，为进一步开展绵羊杂交、抗病育种提供理论依据。试验主要内容和结果如下：1、为查明某动物园盘羊呼吸性疾病的原因，从发病盘羊群采集的病料中分离出5株支原体。通过菌落形态观察、生化反应、PCR鉴定和动物回归试验及序列测定，确诊引起盘羊发病的病原是绵羊肺炎支原体(M.O)。此结果为国内外首次报道，为M.O感染的流行病学特征增加了新内容。通过对PCR扩增条件优化以及扩增的特异性、敏感性分析，建立了快速简便、经济实用的检测盘羊肺炎支原体感染的PCR方法。2

7、、采用PCR-RFLP方法，检测盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2的遗传多态性；分别对M.O阴性和阳性盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3外显子2基因型频率及等位基因频率进行统计分析和差异性检验。结果显示，盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2在TaqI、PstI和HaeⅢ酶切位点存在丰富的多态性，盘羊群体检测出9种基因型，8种等位基因，巴什拜羊出现24种基因型和11种等位基因；在第122、154、168和241碱基处，盘羊与巴什拜羊OLA-DRB3基因外显子2均表现出多态性。盘羊的PstI、Ha

8、eⅢ位点和巴什拜羊的TaqI、PstI位点达到Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），其余位点未达到平衡状态（P﹤0.01）；盘羊OLA-DRB3外显子2的基因杂合度、多态信息含量和有效等位基因数分别为0.300、0.3339和1.5037，巴什拜羊的对应参数值为0.541、0.4854和3.2918，表明巴什拜羊遗传变异程度较高，盘羊具有较为稳定的基因遗传结构。OLA-DRB3基因中，盘羊HaeⅢ-AA（P﹤0.01）、巴什拜羊