莱菔硫烷对脂肪细胞的代谢调控作用及分子机制研究

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1、R151公开分类号：____________密级：______________ＵＤＣ：____________单位代码：______________11646硕士学位论文论文题目：莱菔硫烷对脂肪细胞的代谢调控作用及分子机制研究学号：_________________________1211101075姓名：_________________________张慧琴营养与食品卫生学专业名称：_________________________医学院学院：_________________________张晓宏教授指导教师：______________

2、___________论文提交日期：2015年04月13日AThesisSubmittedtoNingboUniversityfortheMaster’sDegreeEffectofsulforaphaneontheglucoseandlipidmetabolisminadipocytesCandidate：ZhangHui-qinSupervisors：ProfessorZhangXiao-hongFacultyofMedicineNingboUniversityNingbo315211，ZhejiangP.R.CHINAApril13,20

3、15独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得宁波大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。签名：___________日期：____________关于论文使用授权的声明本人完全了解宁波大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；

4、学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________宁波大学硕士学位论文莱菔硫烷对脂肪细胞的代谢调控作用及分子机制研究摘要目的：以3T3-L1成熟脂肪细胞为模型，研究莱菔硫烷（sulforaphane，SFN）对3T3-L1成熟脂肪细胞糖、脂代谢的影响及其潜在的分子机制。方法：经典激素鸡尾酒（methylisobutylxanthine,dexamethasoneandinsulin,MDI）法诱导

5、3T3-L1前脂肪细胞分化成为成熟脂肪细胞。油红O染色法直接观察3T3-L1前脂肪细胞在诱导分化过程中的脂质积聚情况，2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,34羟氨基]-2-脱氧葡萄糖（2-NBDG）染色法检测诱导分化过程中脂肪细胞的葡萄糖摄取变化，以探索SFN干预的最佳时点。低浓度（0-10.0μmol/L）SFN干预3T3-L1成熟脂肪细胞48h，经2-NBDG染色后，分别用共聚焦和多功能酶标仪定性、定量检测SFN处理的成熟脂肪细胞内的葡萄糖摄取变化，蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法分别检测SFN干预48h对葡萄糖摄取和代谢相关蛋白GLUT-4、

6、GCK、CS及基因ACC、FAS表达的影响；甘油GPO-POD酶法检测成熟脂肪细胞经SFN处理后培养基中的甘油含量，间接评价SFN对白色脂肪细胞脂质水解的影响，蛋白印迹法检测SFN干预48h对白色脂肪细胞脂质分解代谢相关蛋白ATGL、HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer565、p-HSLSer660、Perilipin、CPT1A、CS、DGAT-1表达的影响，综合评价SFN处理对3T3-L1成熟脂肪细胞葡萄糖和脂质代谢的影响，探讨SFN调控白色脂肪细胞的糖、脂代谢作用及分子机制。结果：诱导分化过程中的3T3-L1前脂肪细胞葡萄糖摄

7、取和脂质积累逐渐增加，到分化第10天逐渐趋于稳定，故本课题选择诱导分化第10天的3T3-L1脂肪细胞作为本研究对象。2-NBDG染色显示，SFN可显著增强3T3-L1成熟脂肪细胞的葡萄糖摄取。甘油GPO-POD酶法检测提示，SFN干预可明显增加脂肪细胞的脂质水解作用。蛋白印迹法和实时荧光定量PCR法检测表明，SFN可上调葡萄糖摄取相关蛋白GLUT-4，葡萄糖有氧氧化相关蛋白GCK、CS，脂质水解相关蛋白HSL、p-HSLSer563、p-HSLSer660和脂肪酸β氧化相关蛋白CPT1A的表达，同时下调脂肪酸合成相关基因ACC、FAS，脂质水解

8、相关蛋白p-HSLSer565、Perilipin，甘油三酯合成相关蛋白DGAT-1的表达。结论：低浓度（0-10μmol/L）SFN干预可通过上调葡