雌激素及pth对去卵巢大鼠脊柱wntβ-catenin通路表达及退变程度的影响

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1、分类号：R681学校代码：10062密级：学号：2013601135博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：雌激素及PTH对去卵巢大鼠脊柱Wnt/β-catenin通路表达及退变程度的影响TITLETheeffectsofestrogenandPTHonspinalWnt/β-cateninpathwayanddegenerationinovariectomizedrats一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外论文作者：贾浩波指导教师：马信龙教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R681学校代码：10062密级：学号：2013601135学位类别：科学学

2、位专业学位学科门类：医学博士学位论文DOCTORALDISSERTATION论文题目：雌激素及PTH对去卵巢大鼠脊柱Wnt/β-catenin通路表达及退变程度的影响TITLETheeffectsofestrogenandPTHonspinalWnt/β-cateninpathwayanddegenerationinovariectomizedrats一级学科：临床医学二级学科：外科学骨外论文作者：贾浩波指导教师：马信龙教授导师组成员：张晓林徐卫国马剑雄天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果

3、。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师

4、签名：日期：年月日天津医科大学博士学位论文中文摘要【目的】研究大鼠卵巢切除后及雌激素和PTH补充治疗对腰椎Sclerostin、Wnt/β-catenin通路表达以及骨强度和骨量的作用；研究雌激素和PTH对大鼠卵巢切除导致的间盘退变的缓解作用及机制，以及间盘退变和药物干预后Wnt/β-catenin的变化情况；从椎体和椎间盘两个方面综合评估大鼠卵巢切除及雌激素和PTH干预后脊柱的退变情况以及退变过程中Wnt/β-catenin的变化情况。【方法】第一部分：选取3月龄雌性SD大鼠，分为伪手术组（Sham组）、单纯对照组（OVX组）、雌激素组（OVX+E2组）、PTH组（OVX+PTH组

5、）和联合治疗组（OVX+E2+PTH组），行卵巢切除造模。术后正常饲养8周，第9周开始各组按实验设计给予药物干预12周。干预结束后测量大鼠腰椎骨密度，处死后取材，分别取各组L1检测MEF2A、MEF2C、MEF2D和SOST的mRNA表达量；取L2检测椎体Sclerostin表达量；取L3行Sclerostin和β-catenin免疫组化染色，并进行骨细胞密度测定；取L4行Micro-CT扫描评价骨小梁结构参数；取L5行生物力学测试；取L6行Westernblot检测β-catenin蛋白含量；取血清检测P1NP及CTX-1。第二部分：选取3月龄雌性SD大鼠，分为Sham组、OVX组

6、、OVX+E2组和OVX+PTH组，行卵巢切除术制造低雌激素性间盘退变模型。术后第9周开始各组按相应干预处理12周后取材。分别获取各组动物T12/L1及L1/2椎间盘行RT-PCR检测间盘组分及Wnt/β-catenin通路表达情况；取L2/3及L4/5椎间盘的髓核部分，提取核蛋白检测β-catenin表达量；对L5/6间盘行HE染色和免疫组化染色评价间盘退变情况；取L2利用Micro-CT分析终板退变情况；取L3-L4节段进行间盘生物力学测试，从功能上评价间盘退变情况。【结果】第一部分：（1）与Sham组相比，OVX组大鼠椎体中MEF2s和SOSTmRNA表达增高，而OVX+E2组

7、椎体中MEF2s和SOSTmRNA表达比OVX组减低（p<0.05）。PTH能抑制MEF2s和SOSTmRNA的表达量，而OVX+E2+PTH组与OVX+PTH组相比对MEF2s和SOSTmRNA有更强的抑制作用。（2）与Sham组相比，OVX组大鼠椎体中Sclerostin阳性细胞数量增多，OVX+E2组椎体Sclerostin阳性细胞数量比OVX组减少。OVX+E2+PTH组椎体中Sclerostin阳性表达细胞量与OVX+PTH组相似。Western