鹅细小病毒传代致弱毒株的培育及胶体金免疫层析检测方法的建立

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1、密级：论文编号:中国农业科学院学位论文鹅细小病毒传代致弱毒株的培育及胶体金免疫层析检测方法的建立GooseParvovirusAttenuationbySerialPassageandColloidalGoldImmunochromatographicAssayEstablishmentforVirusDetection硕士研宄生：邵周伍林指导教师：张云副研究员申请学位类别：兽医硕士专业领域名称：兽医培养单位：哈尔滨兽医研宄所研宄生院2015年5月独创性声明本人布明所％交的论XI我个人在f师指异下

2、进厅的研究工作及取得的研究成沿，尽我听知.除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发农或携写过的研究成果，也不包含为获得中W农#科学院或其它教存机构的学位或证Mull丨j过的mu我一时3::作的_志讨本研究所跆的任何贡献均已在论文中作了明确的说明汴灰十了谢意;关于论文使用授权的声明本人完令了解中M农业科学院打发保谢.论义的规记.ffl):中W农业科学院打权保留送交论文的复印件磁盘.允丨'丨论义妓介阅和借阅，町以采w影印、缩印或n描等玆制荠段保存、r编学位论文，N怠中w衣'im乍院

3、可以用+同方式在不同媒体h发农、传播学位论文的伞部或部分内界中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表论文题目鹅细小病毒传代致弱毒株的培育及胶体金免疫层析检测方法的建立

4、动物传染病及其病论文作者邵周伍林专业预防兽医学研宄方向原分子流行病学指导教师张云副研宂员培养单位（研宂所）哈尔滨兽医研宂所硕（博）姓名职称单位专业签名导师评硕导口曾振灵教授华南农业大学褂医药理学博导v阅硕导口中国动物疫病预防控兽医公共卫人马世春研宂员中心生学博导v硕导口李一经教授东北农业大学预防軎医学主博导7席硕导口周锐教

5、授华中农业大学预防兽医学博导V1TK硕导口中国军事医学科学院涂长春研宄员预防兽医学博导V军事兽医研宄所答硕导口倪宏波教授黑龙江八一农垦大学顸防兽医学傅导V辩硕导口李广兴教授东北农业大学基础兽医学博导V委硕导口凌虹教授哈尔滨医科大学病原生物学博导V员硕导口仇华吉研宄员哈尔滨兽医研宂所预防兽医学博导V爾八'会议记录（秘书）王秀梅论文答辩时间地点2015年5月21日哈尔滨兽医研宄所三楼学术报告厅Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDisserta

6、tionGooseParvovirusAttenuationbySerialPassageandColloidalGoldImmunochromatographicAssayEstablishmentforVirusDetectionM.S.Candidate：ShaozhouWulinSupervisor：Prof.ZhangYunDegree：MasterofVeterinarianSpecialty:VeterinaryMedicineMay2015摘要鹅细小病毒病是由鹅细小病毒（Goose

7、parvovirus，GPV）引起的，该病是一种主要侵害4~20日龄雏鹅和雏番鸭的急性或亚急性败血症，具有高度传染性，以发生渗出性肠炎为主要特征。该病传播快，病死率高，5日龄以内雏鹅感染，死亡率高达95%以上。鹅细小病毒病的传播和流行对我国养鹅业造成了重大经济损失，严重制约着我国养鹅业的健康发展。本研究从小鹅瘟疑似病例中分离到一病原，经过PCR鉴定、IFA鉴定和动物回归试验，确定该病原为GPV并将其命名为GPVYG株。通过将GPVYG株在鹅胚成纤维细胞（GEF）和鸭胚成纤维细胞（DEF）上进行交替

8、传代培养，当病毒在GEF上传至第12代时，开始出现细胞病变；IFA检测发现，随着病毒感染时间的延长，感染细胞数量呈现先增加随后减少的变化趋势，感染后第96h阳性细胞数量最多；病毒的滴度随着传代次数的增加而逐渐升高，当病毒在GEF上传6.5至第50代时，GPVYG株细胞适应毒毒价为10TCID50/mL。雏鹅致病性试验结果显示，第50代病毒毒力明显减弱，表现为感染雏鹅死亡和发病率降低，且死亡雏鹅无鹅细小病毒病的特征性病变及临床表现。对接种了第50代病毒的雏鹅粪便进行PCR检测后发现，接种后的第3天至

9、第21天，雏鹅所排粪便内均能检测到GPV抗原，这表明GPV传代致弱毒株能够在雏鹅体内持续增殖，并向外界环境排毒。易感雏鹅在接种GPV传代致弱毒株后，体内开始产生中和抗体，并且-2.55抗体滴度随着时间的增长而逐渐升高，在接种后第4周，中和抗体滴度可达10/0.2mL，之后抗体滴度有所下降。对F0代和F50代病毒的全基因组序列和推导氨基酸序列进行比对，结果显示与F0代相比，F50代病毒共有89个核苷酸突变位点，主要位于VP基因；以及19个氨基酸突变位点，其中5个位于NS蛋白，14个位