usp4介导的tgfβ信号转导通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

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1、分类号：密级：UDC：学号：416523212200南昌大学专业学位研究生学位论文USP4介导的TGFβ信号转导通路对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响theeffectofUSP4-mediatedTGF-βsignaltransductionpathwayontheproliferationofhypertrophicscarfibroblast陈燕培养单位（院、系）：南昌大学第一附属医院指导教师姓名、职称：付建华教授专业学位种类：临床医学专业领域名称：外科学论文答辩日期：2015年6月答辩委

2、员会主席：评阅人：2015年6月学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，

3、同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签

4、字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要背景：瘢痕是人体创面修复过程的一种自然产物，其中病理性瘢痕则是皮肤损伤后创面过度修复引起以大量ECM合成及沉积为特征的皮肤纤维化疾病。它主要包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩，其中增生性瘢痕(hypertrophicscar,HS)在临床中非常多见，其表现为突出皮肤表面或呈持续生长的亢奋状态。大量研究表明，TGF-β是促进创面修复及瘢痕形成的关键效应因子，T

5、GF-β的生物活性的发挥主要通过Smads家族介导的。而TGF-β/Smad信号通路主要通过活化的TGF-β与其胞膜TβRII（TGFβ-receptorII）相结合，促使TβRI（TGFβ-receptorI）与TβRII形成受体异聚体，随后TβRI的GS区磷酸化，激活TβRI，与Smad2和Smad3形成TβRI-SARA-Smads复合体，随后将Smad2和Smad3磷酸化，与Smad4形成异源复合物转入细胞核，最终调控成纤维细胞的增值、分化及胶原代谢，促进增生性瘢痕形成。由此可见TβRI

6、是TGF-β/Smad信号通路的关键组分。不仅如此，抑制型蛋白Smad7是TGF-β/Smad信号通路的主要负性调节因子，Smad7通过负反馈调节着正性与负性Smads之间的平衡。近年来研究表明，泛素特异性蛋白酶4（USP4）可增强TGF-β信号通路的水平，但在HS形成中，USP4对TGF-β信号通路的作用还未见报道。本实验就从组织水平及细胞水平研究USP4对瘢痕形成的调控作用，为瘢痕的防治探索新方法。目的：探讨USP4在HS形成中的重要作用，尤其是TGF-β/Smad信号通路的调控作用；通过泛

7、素特异性蛋白酶抑制剂（VialininA）抑制USP4表达，明确USP4与TβRI、Smad7的相关性，阐明USP4对增生性瘢痕的作用机制，为临床上利用USP4作为药物作用靶点治疗HS提供重要的理论依据。方法：1、取本院整形外科临床上增生性瘢痕患者的HS标本以及瘢痕周围正常皮肤组织标本15例（伤后6个月~1年内），低温下迅速带回实验室处理；部分组织生理盐水洗净后用4%中性甲醛固定后，常规脱水和石蜡包埋，进行免疫组化检测；部分组织用于Westernblot检测人增生性瘢痕组织中USP4及TβRI蛋

8、白表达水平差异，并以正常皮肤组织(Normaltissue，NS)作为对照。II摘要2、收集人增生性瘢痕组织及瘢痕周围正常皮肤标本，采用改良组织块联合胰酶消化法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞（Hypertrophicscarfibroblast，HSFB）和正常皮肤成纤维细胞（Normalskinfibroblast，NSFB）。①取第4代FB（Fibroblast），Westernblot检测HSFB与NSFB中USP4、TβRI和Smad7蛋白表达水平；②人增生性瘢痕成纤维细胞铺板培养24h