广西犬h9n2和类禽型h1n1猪流感病毒的遗传进化分析及对小鼠致病性的研究

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3、的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除己特别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，，允许论文被查阅和借阅可Ｗ将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可采用影印、缩印或其它复制手段保

4、存。、汇编学位论文本学位论文属于；□保密，在年解密后适用授权。＂＂请在ｉＵ上相应方框内打Ｖ（）论文作者签名；日期：Ｉ指导教师签名日期乂３作者联系电话；电子邮箱；广西犬Ｈ９Ｎ２和类禽型Ｈ１Ｎ１猪流感病毒的遠传进化分析及对小鼠致病性的研究摘要Ｈ９Ｎ２亚型和Ｈ１Ｎ１亚型流感病毒是流感大家庭里面两个重要的病原，它们都在正粘病毒科Ａ型流感病毒属，基因组包括八个分节１。段的基因片段，共编码约１种蛋白Ｈ９Ｎ２亚型流感病毒于１９６６年首次在意大利分离到，Ｈ１Ｎ１亚型流感最先于１９１８年在美国报道，目前的研究表明两种流感病毒都能够突破种间障碍

5、感染猪、雪貂等动Ｈ９Ｎ２亚，物，但还没有在犬身上分离到型流感病毒的报道对广西Ｈ１Ｎ１流感病毒致病性的研究也很少，因此开展对Ｈ９Ｎ２和Ｈ１Ｎ１亚型流感病毒的流行病学调查、遗传演化分析和致病性研究有重要意义。本研究对采自广西各地市的５８８份宠物犬棉拭子样品和１０３８份发病猪肺组织样品进行病毒分离。将采集到的样品接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚后收取尿囊液，结果从犬棉拭子中共分离到１３株Ｈ９Ｎ２亚型流感病毒，而从猪肺组织中共分离到１４株类禽型Ｈ１Ｎ１亚型流感病毒，序列分析表明，１３株Ｈ９Ｎ２亚型流感病毒与近年来广西分离株Ａｉ／ｅｑｕｉｎｅ／Ｇｕａｎｇｘｉ／３／２０

6、１１氨基酸同源性在９９．０％ｔｉ？上，内部基因进化关系与２０１３年暴发的人Ｈ７Ｎ９很近，且８个基因片段来自于五个经典的毒株一，组成了个新的基因型Ｕ；１４株类禽型Ｈ１Ｎ１猪流感病Ｉ８－毒中ｌｉｋｅ亚系，，２０１３年早期分离株的个基因片段全部来自Ａｖｉａｎ随后一３、４月份分离株中７号和８号有个基因片段来源于２００９甲型流感，Ｓ２分离株中有两个片段来自甲流，３２号片段有Ｈ个片段来自甲流，而２０１３年５月底和２０１４年３月分离的六株病毒中６个片段来自甲流，病毒的基因中来源于２００９甲型流感的趋势不断增加。Ｇ２、Ｇ１４、Ｇ２１、Ｇ３０、Ｓ２、３２、７和８号毒株

7、ＰＢ２氨基酸７０１位发生了天冬氨酸到天冬醜胺的突变，说明了毒株正逐渐适应人源。１３株从犬棉拭子中分离到的病毒经鸡胚培养，测定每毫升病毒ｗ８３３？所含ＥＩＤｌ〇１０Ｈ１饥ｓｏ为；从发病猪组织分离到的猪流感病毒６＇０８６—３３？经ＭＤＣＫ细胞培养，测定每毫升ＴＣＩＤ值为１〇１〇。Ｗ１〇ＥＩＤｓｏｓ〇或ＴＣＩＤｓｏ的病毒液滴鼻攻毒ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果发现从健康宠物犬分离到的Ｈ９Ｎ２亚型的流感病毒不能感染小鼠，而