试析血根碱对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用研究

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1、分类号:学校代码:10128UDC:学号:20071159硕士学位论文（类别：全日制硕士研究生题目：血根碱对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用研究英文题目：Inhibitoryeffectsandinductiveofapoptosisofsanguinarineoncells研究生：张鸿学科名称：化学工艺指导教师：魏雄辉二○一○年六月摘要目前肝癌和胃癌病发率在亚洲较为突出。治疗手段主要是手术辅助化疗，但是化疗的耐药性成为治疗过程中新的难题。因此，从中药中寻找抗癌药物成为当前研究的热点。血根碱（Sanguinarine，SA）是提取自博落回等植

2、物中的一种苯菲啶类生物碱，具有抗癌活性。为了能进一步探讨血根碱抗癌作用，本课题选择人胃癌细胞株BGC-823细胞和人肝癌细胞株SMMC-7221细胞作为研究对象，通过光学倒置显微镜观察药物作用前后的细胞形态变化，直观的看出SA对肿瘤细胞具有明显的增殖抑制作用；台盼蓝拒染试验和二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）实验，结果表明血根碱对细胞具有明显的抑制作用。在一定范围内，随着药物浓度的增大，作用时间的延长和细胞浓度的减小，细胞增殖抑制作用增强，最高抑制率最高超过90%；Hochest33258染色实验，结果表明随着药物浓度的增大，细胞的早期凋亡率增

3、大，同时，细胞体积变小，细胞染色质浓缩；在流式细胞仪（FCM）检测对血根碱作用肿瘤细胞的细胞周期和细胞凋亡情况，结果表明随着药物浓度的增大，作用时间的延长，细胞早期凋亡率升高，细胞各个时期的DNA含量变化明显，血根碱使BGC-823细胞阻滞于G1/G0期，而将SMMC-7221细胞阻滞于G2/M期。为了进一步佐证血根碱抑制细胞增殖，改变细胞周期和诱导细胞凋亡与相应的凋亡蛋白有关，我们通过WesternBlot试验对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达进行检测，试验结果表明随着血根碱浓度逐渐增大，SMMC-7221细胞和BGC-823细胞的B

4、cl-2/Bax都逐渐降低。血根碱和谷胱甘肽（GSH）的相互作用紫外光谱和荧光光谱研究，结果表明随着谷胱甘肽浓度的增大，血根碱的紫外吸光光度和荧光吸光光度逐渐减少，血根碱与谷胱甘肽存在相互作用。关键词：血根碱；肝癌细胞；胃癌细胞；细胞凋亡AbstractBackground:Atthepresenttime,itisterribleintheAsiawherethelivercancerandthegastriccancerratearehigher.Surgicaloperationassociatedwithchemotherapeu

5、ticsisanidealmethodtotreatcancer,howeverwefindthatoneffectivetherapyisavailableforcancerbecausetumorcellsexistenceisdrug-fast.ItisahottopictoextractausefulingredienttreatingcancerfromtraditionalChinesemedicine.Sanguinarine,abenzo[c]phenthridinealkaloidextractedformMacleya

6、Cordata,exhibitsananticancerproperty.TostudythemechanismoftherapeuticactionofSA,inthispaper,wechooseBGC-823cellsandSMMC-7221cellsasthesubjectinvestigated.WefoundthegrowthofcancercellshasbeeninhibitedbySA,whichthemorphologicalchangesofcellswereobservedonoptical-microscope.

7、ByusingtrypanbluedyeexclusiontestandMTTassaytomeasuretheinhibitionofSAoncancercells,wefoundthattheinhibitionrateincreaseswiththedecreasingofcellinoculumsdensity,theincreasingoftreatingtimeandtheincreasingofdrugconcentration,andthelargestinhibitorionrateexceeds90%intheexpe

8、riment.WeusedHochest33258dyeassaytofindthatwiththeincreasingofdrugconcentration,theapoptosisrate