四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究论文

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1、四种甘草对人乳腺癌细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的比较研究论文【摘要】目的比较新疆四种野生甘草活性成分对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用，以期筛选出药效最佳的甘草种类。方法采用MTT法检测不同样品对BCAP37细胞的增殖抑制作用，Hoechst33258荧光染色法检测各样品诱导BCAP37细胞凋亡的作用。结果4种甘草的活性成分对人乳腺癌BCAP37细胞具有显著的增殖抑制与诱导凋亡的作用，且存在显著的种间与产地间差异。结论抗癌药效最佳的甘草种类为阿拉尔甘草。【关键词】甘草活性成分人乳腺癌BCAP37细胞parativeStudyontheAnti-prol

2、iferationandApoptosis-inducingEffectsofActiveponentsfromFourGlycyrrhizaSpeciesonHumanBreastCancerBCAP-37CellAbstract:ObjectiveToselecttheoptimalglycyrrhizaspeciesformedicinalutilizationbyparingtheanti-proliferationandapoptosis-inducingeffectsofactiveponentsfromfouranbreastcance

3、rBCAP37cell.MethodsTheanti-proliferationeffectsofdifferentsamplesonBCAP37celleasuredbyMTTassay.Thecellapoptoticrateore,therealGlycyrrhizaspeciesforanticancerutilizationisGlycyrrhizaalalensisL.KeyanbreastcancerBCAP37Cell甘草是我国十分重要的中药材，素有“十方九草”的美誉。近年来，随着对甘草开发利用的不断深入，甘草被广泛用于药品、食

4、品、保健品、化妆品等领域［1］，甘草的市场需求量剧增。我国是世界上甘草出口大国.freela公司；顺铂(DDP)，江苏豪森药业股份有限公司；Hoechst33258染色试剂盒，碧云天生物技术研究所。1.3.2仪器CO2培养箱，美国（Forma）；Metertech∑960自动酶标仪；荧光显微镜，OlympusBX51；超净工作台，上海净化设备厂；血球记数板，上海医用光学仪器厂。2方法2.1实验样品采集与处理采集株龄一致(根茎粗细相等)的4种甘草的根茎材料，立即放入80℃烘箱中烘干至恒重，然后用药材粉碎机将其粉碎成粉末，过100目筛，备用。2.2甘草活

5、性成分的制备2.2.1甘草水提物准确称取1.0g甘草根茎干粉加10ml蒸馏水于室温下放置48h，12000r/min离心10min，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，加样前用细胞培养液根据文献［11］将不同样品配制成含甘草酸为1200μg/ml的受试样品。2.2.2甘草总黄酮准确称取1.0g甘草根茎粉末，用250ml无水乙醇加5滴浓盐酸溶液为提取剂在索氏提取器中于95℃的水浴加热条件下提取6h，浓缩至30ml，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，加样前用细胞培养液根据文献［11］将不同样品配制成含总黄酮为50μg/ml的受试样品。2.3细胞培养BCAP-3

6、7细胞用含10％灭活小牛血清的RPMI1640培养基，加入NaHCO32g/L，谷氨酰胺0.24g/L，Hepes2.4g/L，青霉素100U/ml，链霉素100mg/ml，置于37℃,5％CO2孵箱中培养。实验用细胞均处于对数生长期，常规台酚蓝计数活细胞大于95％。2.4细胞增殖抑制实验(MTT法)将处于对数生长期的BCAP37细胞用胰蛋白酶消化后,制成2.0×105个/ml的细胞悬液,然后以每孔100μl接种到96孔板上,在37℃，5%CO2孵箱中培养24h后更换培养液，实验组加入不同的受试样品100μl，终浓度分别为：甘草水提物中甘草酸浓度为

7、600μg/ml，甘草总黄酮25μg/ml，每一样品均设8个平行孔，阳性对照组加入顺铂100μl：终浓度50μg/ml，空白对照组加入等体积的培养液。继续培养24h,48h及72h后，每孔加入20μlMTT溶液(浓度为5mg/ml)，轻振培养板，放回培养箱内再孵育4h后，吸尽上清液，每孔中加二甲基亚砜150μl，振荡器上振荡10min,用酶标仪检测各孔吸光度（OD值）测定波长λ=570nm。抑制率计算公式为：抑制率(％)=〔(对照组OD值－实验组OD值)/对照组OD值〕×100％。2.5细胞凋亡率实验取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡20min，0.

8、9%NaCl溶液洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞，培养过夜，使约为50%～8