临床检验技师-微生物检验(2019)讲义第二十七章_病毒感染的实验诊断

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1、第二十七章病毒感染的实验诊断本章内容病毒的基本性状病毒的分类与命名病毒感染的实验诊断各类病毒感染的简介病毒的基本性状病毒是一类非细胞型微生物。个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。仅含一种核酸作为遗传物质。（DNA或者RNA）外被蛋白质衣壳或还有包膜。病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。病毒的基本性状——形态结构大小和形状大小：单位用纳米表示。1nm=1/1000μm大型病毒（200～300nm）中型病毒（80～160nm）小型

2、病毒（18～30nm）第1页共21页形态：球形或近似球形、杆状、弹状、砖形、蝌蚪状等。基本结构指病毒的核心和衣壳两部分。辅助结构第2页共21页包膜病毒的基本性状——病毒的增殖病毒必须依赖宿主细胞，以特殊的自我复制方式进行增殖。复制周期：吸附、穿入、脱壳、生物合成、组装与成熟、释放。若病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能组装或释放有感染性的病毒颗粒，称为顿挫感染。由于病毒基因组不完整或基因位点改变而复制出不完整无感染性的病毒，称为缺损病毒。病毒的基本性状——噬菌体以细菌、真菌等为宿主，在其中增

3、殖能引起细菌等裂解的病毒称噬菌体。噬菌体具有识别细菌表面特异受体的功能。噬菌体感染细菌后产生两种后果，一是建立溶菌周期；二是建立溶原状态。病毒的基本性状——非寻常病毒比病毒更小更简单的致病因子，又称为亚病毒因子，包括类病毒、卫星病毒和朊粒等。病毒的分类与命名病毒分类的依据和原则是病毒的基本性质。病毒分类的一般系统是科、属、种3级。将病毒分为DNA病毒、RNA病毒、DNA和RNA逆转录病毒三大类。目前认为有24个科的病毒能感染人和动物。按传播途径：呼吸道病毒、胃肠炎病毒、经性传播感染的病毒等。按感

4、染部位与症状特征：肝炎病毒、出血性热病毒、疱疹病毒等。病毒感染的实验室诊断病毒学实验诊断有三个方面：①直接检测和分离鉴定；②检测病毒蛋白抗原成分和核酸；③检测抗体。病毒感染的实验室诊断——标本采集、运送及处理标本采集（1）采样时机：应在病人急性期或发病初期采集标本。（2）标本种类：根据不同病毒感染采集不同标本。标本的运送及保存大多数病毒抵抗力较弱，在室温中易被灭活，所以标本要快速运送，立即处理和接种。采集和运送保存均在4℃，长时间保存需置-70℃。标本处理根据不同种类的标本，运用不同的处理方法。

5、病毒感染的实验室诊断——分离培养与鉴定分离培养（1）组织培养：包括器官培养、组织块培养和细胞培养。针对不同的欲检测病毒，选择适当的培养细胞。细胞培养分：①原代和次代细胞培养；②二倍体细胞株；③传代细胞系。（2）鸡胚接种：鸡胚常用于黏液病毒、疱疹病毒、痘类病毒等的原代分离。第3页共21页（3）动物接种：常用新生小鼠或乳鼠进行病毒分离。根据病毒种类不同，需选择相应的敏感动物，还需接种相应的合适部位。病毒鉴定（1）初步鉴定：根据临床症状、流行病学特点、标本来源、易感动物范围、细胞病变特征及生物学特征、

6、理化性质可初步判断病毒的科及属。（2）最终鉴定：在初步鉴定的基础上，选择适当的血清学方法对病毒分离株进行最后鉴定。常用的有中和试验、补体结合试验、血凝抑制试验、免疫荧光试验、酶免疫试验等。病毒感染的实验室诊断——病毒感染的诊断显微镜检查（1）用光学显微镜直接检查病毒包涵体。包涵体检查可作为病毒感染的辅助诊断，不是特异性试验。（2）用电子显微镜直接检查病毒颗粒，数小时即可从病毒形态上作出明确的鉴别诊断。应用免疫电镜灵敏度更高。病毒抗原检查利用特异性免疫血清检测标本中病毒抗原。病毒抗体检查利用特异性

7、抗原检测病毒感染者血清中IgM和IgG抗体。IgM抗体出现在病毒感染的早期。IgG抗体检测需采集感染急性期与恢复期双份血清，恢复期IgG效价必须比急性期增高4倍或4倍以上时，才有诊断意义。病毒核酸检测利用核酸杂交和PCR技术检测病毒特异基因片段。但检出病毒核酸并不等于检出具有传染性的病毒颗粒。流行性感冒病毒——生物学性状分节段的单负股RNA病毒。形态：球形或丝状。结构：核心：由核酸和核蛋白组成。基质蛋白（M蛋白）：保护核心与维持病毒外形。第4页共21页包膜：血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）。分

8、型：变异：流感病毒易发生变异，变异的物质基础是HA和NA，两者变异可同时出现，也可单独出现。培养特性：鸡胚接种培养；原代猴肾细胞或犬肾传代细胞培养；利用红细胞凝集试验确定病毒的存在。抵抗力：不耐热，对干燥、日光、紫外线以及甲醛、乙醇等均敏感。流行性感冒病毒——微生物检验标本采集和处理：在发病急性期，以前三天为最好。合理采集相应标本，如鼻腔洗液、咽拭子、鼻拭子等，置于Hanks液中。低温运送保存。分离培养与鉴定：接种于鸡胚羊膜腔，收集羊水和尿囊液进行血凝试验、血凝抑制试验进行鉴定。快速诊断：①免疫