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1、第25卷第3期华侨大学学报(自然科学版)Vol.25No.32004年7月JournalofHuaqiaoUniversity(NaturalScience)Jul.2004文章编号100025013(2004)0320301204丛枝菌根真菌的增殖技术王晓琴(华侨大学材料科学与工程学院,福建泉州362011)摘要对目前国内丛枝菌根真菌的主要增殖方法进行比较研究.以三叶草作宿主植物,采用单孢和多孢两种接种方法,分别将摩西球囊霉、地表球囊霉、地球囊霉、缩球囊霉和网状球囊霉,在土培、沙培、水培的条件下进行增殖.收获后分别测定它们的侵染株率、侵入点的密度和侵染率.研究结果表明,三叶草是理想的
2、宿主植物,其在液培条件下丛枝菌根真菌侵染能力最高,沙培法法次之,土培法最低,摩西球囊霉和地表球囊霉对三叶草侵染能力较高.关键词丛枝菌根真菌,三叶草,增殖技术,培养方法,侵染能力中图分类号Q949.32∶Q932335文献标识码A菌根是土壤中的真菌与植物根系的共生体,这种共生现象在自然界普遍存在.严格的讲,大多数植物没有根系,只有菌根.其中,接合菌纲(Zygomycetes)的部分真菌菌丝,可在植物根细胞内形成丛枝状特殊变态结构,因此我们把这种菌根称为丛枝菌根(Arbuscularmycorrhiza,简称AM).据统计,地球上90%的有花植物都形成丛枝菌根.也就是说,80%以上的陆生植
3、物都能够与丛枝菌根真菌(Arbuscularmycorrhiza〔1〕Fungus,简称AMF)形成共生体.研究表明,丛枝菌根不仅可促进植物对营养元素的吸收,还能提高植物的抗病、抗逆能力,有利于植物的生长,对农林业生产具有重要的意义.然而,丛枝菌根真菌目前还不能进行纯培养,必须与植物共生才得以繁殖.目前,盆栽法仍是普遍应用和大力推广的一种方法.盆栽法主要有土培法、沙培法和液培法3种形式.本研究将5种丛枝菌根真菌在宿主植物三叶草上进行单孢接种和多孢接种.比较不同培养条件下,其侵染能力的差异;探索菌根真菌的培养方法和接种方法的最佳结合.从而,发展丛枝菌根真菌的传统增殖技术.1材料与方法1.
4、1试验容器及装置三种方法均采用容积为200mL的培养管,使用前用质量分数为0.003的高锰酸钾溶液消毒3h,然后经流水冲洗.土培法和沙培法在培养架上进行,液培法在专用的静止液培槽进行.1.2增殖宿主植物及AMF供试菌种增殖宿主选用牧草植物红三叶草(TrifoliumpratenseL).供试菌种分别是摩西球囊霉(G.mosseaeGerdemann&Trappe)、地表球囊霉(G.versiformeBerch)、地球囊霉(G.geosporumWalker)、缩球囊霉(G.constrictumTrappe)、网状球囊霉(G.reticulatumBhattacharjee&Muke
5、rji)1.3孢子和种子的表面消毒-1将孢子浸泡在质量分数为0.02的氯胺T和200mg·L链霉素溶液中15min,用无菌水冲洗数次.将三叶草种子用体积分数0.75的酒精进行表面消毒,然后用无菌水反复冲洗,置于催芽箱中催芽.1.4供试基质及营养液收稿日期2004201212作者简介王晓琴(19772),女,助教,硕士,主要从事丛枝菌根真菌的生态生理及增殖技术的研究.E2mail:wangxiaoqin77@sohu.com302华侨大学学报(自然科学版)2004年土壤采自西北农林科技大学林学院苗圃地的垆土,经2mm筛过筛,湿热灭菌3h并放置2d后备用.取建筑用河砂经3mm筛过筛后,流水
6、冲洗直到洗液不再浑浊为止,干热灭菌2h,备用.营养液采用〔2〕修改的Hoagland营养液,配方如表1所示.表中C1为母液浓度,C2为营养液浓度11.5培养方法表1Hoagland营养液配方-1-1本研究采用土培法、沙培法、液培法3种培成分C1/g·LC2/mL·L养方法.土培法以土壤为基质,沙培法和液培法KH2PO4136.001.0大量KNO3101.005.0以河砂为基质.以三叶草为宿主培养上述5种丛元Ca(NO3)2236.005.0枝菌根真菌,每个培养处理下采用单孢接种、多素MgSO4246.502.0孢接种两种接种方法(对照除外).共设30个处H3BO32.861.0理,每
7、个处理均重复10次.MnCl2·4H2O1.811.0微1.6管理方法ZnSO4·7H2O0.221.0量土培法和沙培法的培养管放置在生长室内CuSO4·5H2O0.081.0元H2MnO4·H2O0.021.0的培养架上,土培法用手动喷雾器喷水,沙培法素EDTA7.451.0每14d用半强度的营养液浇灌1次.培养过程FeEDTAFeSO4·7H2O5.471.0中,注意调换培养管的位置.液培法的培养管放在静止培养台上,向培养槽内加入大量元素减
