人白细胞介素12(hIL12)基因在杆状病毒表达载体系统中的表达

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1、!"卷"期微生物学报%&’(!"0&("#$$"年#月!"#$%&"’()&(*(+&"$,&-&"$)*+,-.,/#$$"!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!人白细胞介素!"#（$%&!"#）基因在杆状病毒表达载体系统中的表达"杨林张晓馨陈新华龙綮新王"章李迎秋（中山大学生物医药中心、生物防治国家重点实验室广州3"$#73）摘要：人白细胞介素"#（89:5"#）是细胞介导免疫发生的关键调节因子，也是目前发现的唯一的异源二聚体细胞因子，由;63和;!$两个亚基经二硫键连接而成。利用<0=重组技术，分别构建了含89:

2、5"#!63基因和!!$基因的重组转移载体质粒>=?=@65!63和>=?=@65!!$。将两个重组转移载体分别与致死缺陷型线性化苜蓿丫纹液蛾核型多角体病毒（=?0;%@.?-’&A&’B:CD*.,CE*B@.?-’&FC,-G）基因<0=共转染昆虫细胞，构建出遗传稳定的重组病毒4=?0;%5HII589:5"#（!63）与=?0;%5HII589:5"#（!!$）。将两种病毒分别感染"#1细胞，取细胞培养物上清和细胞裂解物上清进行J

3、词：人白介素"#基因，杆状病毒表达系统，表达中图分类号：N7O2文献标识码：=文章编号：$$$"52#$1（#$$"）$"5$$635$O人白介素"#（8-P.DCDM*,’*-QCD5"#，89:5"#）是一种对R细胞和自然杀伤细胞（0.M-,*SC’’*,I*’’，0S）具有多种调节功能的细胞因子，它可以刺激R细胞、0S细胞释放!干扰素（CDM*,T*,&D5!，9)05!），诱导辅助性R细胞（U*’>*,RI*’’，RU）前体细胞向RU"细胞分化，从而启动细胞介导免疫，在抗肿瘤，抗病毒等方面有着不可估量的临床应用前景［"］。89:5"#是至今发现的细胞因子中唯一由异二聚体组成的

4、糖蛋白分子，由分子量分别为［#］。63Q<和!$Q<的大小两亚基（;63，;!$）以二硫键连接而成杆状病毒表达载体系统是最具有应用前景的真核表达系统之一。它具有对外源基因容量大，操作方便，不污染环境等优点。由于它是真核表达系统，故可使表达产物得到较充分的翻译后修饰。目前，国际上已有数百家实验室和公司从事这一方面的研究［6］。本文构建了含89:5"#!63和!!$亚基基因的重组转移载体质粒>=?=@65!63和>=?=@65!!$，并应用杆状病毒表达载体系统表达两亚基基因，同时探讨了表达产物在昆虫细胞中的加工修饰过程，为进一步开发出具有临床应用价值的89:5"#打下一定的基础。"材料和

5、方法"("材料"’"’"质粒和菌株：含人白介素"#（89:5"#）!63亚基和!!$亚基基因的质粒>K<5!63"广东省自然科学基金资助项目（12$$31）作者简介：杨林（"12!4），男，云南个旧人，中山大学生物防治国家重点实验室和生物医药中心博士后，主要从事基因工程研究。收稿日期：#$$$5$65#7，修回日期：#$$$5$35"39D微生物学报%A卷和!"#$!%&由美国’()(*+,-.)-*+*/*(.),0123456教授惠赠；转移载体质粒!7,789购自:;<=>+)?()公司；质粒!85/-,=+!-1@（>A9$）由本实验室保存；大肠杆菌#BC!由美国1,=+!!-

6、.)-*+*/*(惠赠，基因型："#!$%%，"%&’(ADE（!F&%&’)">AC），*"+,AG，-.’/A，.01+/A，23-/ED，4*51A，-.%/A；大肠杆菌H>A&E购自:=4I(?<公司，基因型：-.’/A，.0+/A，23-/ED，4*5，*"+,AG（=@J，I@K），-.%/A，"#!$%%，"（%&’1!-6/7），［2’，4-&89D，!-6/7，L%&’9M">AC］。!"!"#昆虫细胞株和杆状病毒：草地贪夜蛾细胞（:!6+6!4.-&;-#25!.-+&E，:;E）引自英国自然环境研究会病毒研究所（N"OP，.)-*+*/*(46Q+=454?R，

7、ST64=U，")?5<)U）；粉纹夜蛾细胞（<-5’*6!%#"5&05，<0$C8A$%）由武汉病毒所惠赠；含合成启动子和半乳糖苷酶基因#$的无包涵体粉纹夜蛾重组株（V)N:Q$1Q.$’）由本实验室构建［%］；致死缺陷型线性苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒基因#N7购自:;<=>+)?()公司。!"!"$试剂：昆虫细胞裂解缓冲液（AW）：A&II45／XV=+-!BG0C，A9&II45／XN