小麦抗叶锈基因Lr37的ISSR分子标记

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1、河北农业大学硕士学位论文小麦抗叶锈基因Lr37的ISSR分子标记姓名：张立荣申请学位级别：硕士专业：植物病理学指导教师：刘大群2002.6.1摘要本研究利用ISSR(内部简单重复序Y0)技术对Thatcher及22个以Thatcher为轮回亲本的小麦抗叶锈病近等基因系(NILs)进行分析，结果如下：／1．建立了一套适合本研究的小麦ISSR分析的晟优化反应体系及反戍程序。f通、过以小麦基因组DNA为模扳，对ISSR反应体系及反应程序中的一些重要参数进行摸索和优化试验．本研究所用反应体系为：25。m反应体系中含有10mMKCl、8mM(NHO

2、2SO‘、10mM"Iris．HCI(pH9．0)、NP-40、2．0ramMg”、150t2MdNTP、200nM引物、60ng模板DNA、2．0UTaqDNA聚合酶。反应程序为第一个循环基因组DNA经94"(2预变性3min：40个循环为94"C变性30sec．48"(3遨火60sect72"C延、伸2rain：最后一个循环完成后．在72"C下延伸7min。斗／2．通过对Thatcher及小麦抗叶锈病近等基因系的ISSR分析找到一个与￡一7基／因连锁的ISSR标记。(研究采用100个ISSR引物对小麦抗叶锈近等基因系进行了分、析，其中

3、绝大多数引物能扩增出清晰可辨的条带．经过多次重复发现有两个引物UBCSl2和UBC848在小麦抗叶锈基因Lr37近等基因系问表现多态性。当用这两个引物对含Lr37基因的抗病材料VPMl+Trident、Hyak、Madsen及其它不含Lr37基因的感病材料进行检测时．标记UBC812．1200可以从三个含Lr37基因的抗病材料中检测到一条1200bp的多态性带。而在其它感病材料中，没有这条1200bp的条带，初步表明标记UBC812．1200与Lr37基因连锁。而标记UBC848—700不能将不同遗传背景中的Lr37基因检测出来，表明UB

4、C848．700的特异性羞．同时说明标记、UBC848．700的结合位点与Lr37基因不连锁。、}，r3．伪了进一步确定ISSR标记UBC812-1200与Lr37基因连锁的紧密程度，我＼～—————————一们种植ThatcherxLr37／6*Thatcher杂交的F2代小麦128株．接种LrJ7的无毒菌株，＼，抗感比为3：1刀提取其单株小麦的DNA，再以引物UBC812进行扩增，发现所有的／抗病单株均能扩增出1200bp的特异性条带，丽所有的感病单株没有此条带。表明标记UBCSl2—1200与Lr37基冈共分离。关键词：小麦：抗nf

5、‘锈基冈：￡，球ISSR分子标记f独创性声明本人声明所里交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外。论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得j!l丝硅生茎i釜或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：巩电系签字日期：v。}年‘月≯p日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解!豸塑巫查盏有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印

6、件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．本人授权i五苎!g趋±f垒可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文．(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：鸟告矽扬签字日期：1们J年b月j7日学位论文作者毕业后去向工作单位：通讯地址：别谴名．动气节签字日期：j。·≯年。月7’7日电话邮编!：耋苎!!：塑苎堕!：!：塑!!!!坌三塑皇L———————————一文献综述1．SSR、ISSR分子标记技术及其在植物中的应用近年来．分子标记的研究与利用得到了迅速的发展。对不同分子标记

7、技术的选用，主要取决于应用目的和研究对象，理想的分子标记应既简单又可靠。目前应用于植物中的DNA分子标记主要有限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、扩增酶切片段长度多态性(AFLP)、序列特异扩增区域(SCAR)、数量可变串联重复(VNTR)、简单序列重复K度多态性(SSR)和简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)等。SSR、ISSR分子标记技术以其高效可靠性正越来越受到人们的重视．1．1SSR、ISSR分子标记技术的原理和特点1．1．1原理在真核生物基因组中均存在着由1．4个碱基对组成的简单重复序列，又称之

8、为微卫星(Microsatellite)【23】，如(GA)n、(AC)n、(GAA)n等。同一类微卫星DNA可分布在整个基因组不同位置上。由于其重复次数不同或重复程度不完全而形成每个座位的多