microRNA-3656在肺癌患者血清中的表达及临床意义

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＠ｔｏ雜七摩硕士学位论文ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义学科专业内科学学位类型临床医学硕士专业学位研究生姓名＾导师姓名、职称雷明盛主任医师论文编号Ｓ１８０４６２０湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一八年六月 分类号密级学校代码１０５４２学号２０１５７０２００８３６ｍ－３６５６ｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌患者血清中的表达及临床意义Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆ－ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆａｔｉｅｎｔｓｐｗｉｔｈｌｕｎｃａｎｃｅｒｇ研究生姓名陈佳指导教师姓名、职称雷明盛主任医师学科专业内科学研究方向呼吸病学湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇—八年六月 ＭｉｃｒＮＡ－３６５６ｏＲ在肺癌患者血清中的表达及临床意义摘要目的：本研宄旨在通过实时焚光定量ＰＣＲ方法检测肺癌患者和正常健康人血ｃｒｏＲＮＡ－３６５６ＮＡ－清中ｍｉ的表达水平，分析ｍｉｃｒｏＲ３６５６的表达特征，探讨其与肺癌患者临床特征参数之间的相关性一，为肺癌的早期诊断、治疗、预后判断提供定价值。方法：于２０１５年７月至２０１６年３月收集７０例来自中南大学湘雅二医院肿瘤中心和南华大学附属南华医院肿瘤科的肺癌患者和３８例来自南华大学附属南Ｒｅａ－ＰＣＲ华医院体检科的健康人群晨起空腹血样，通过ｌｔｉｍｅ技术检测肺癌组和正常人组血清中ｍ－３６５６ｔｉｃｒｏＲＮＡ的表达水平，采用检验分析计量资料，采用Ｃｈｉ－ＳｉｃｒｏＲＮＡｑｕａｒｅ分析肺癌患者ｍ表达水平和临床特征参数之间的关系。应用受试者工作特征Ｒ０Ｃ）ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６Ｒ０Ｃ（曲线分析诊断肺癌的效能，获取ＡＡｅｔＡＵＣｆｉｃ－３６５６曲线下面积（）值。根据值计算ＭｒｏＲＮＡ的平均表达水平分为－高表达组和低表达组，用ＫａｐｌａｎＭｅｉｅｒ法分析肺癌组中高表达组和低表达组的总体生存期。结果：－１．与正常人组比较，ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达水平明显升高（尸＜０．０１）。２Ｃｈｉ－Ｓ显示ｍ－３６５６．在肺癌患者组中，ｑｕａｒｅ检验分析结果ｉｃｒｏＲＮＡ的表达量与临床分期、远处转移显著相关（户＜〇．〇〇１），与性别、年龄、病理分型无相关性（尸＞０．０５）。－３ｉｃ－，ｍｉｃ３６５６．血浆ｍｒｏＲＮＡ３６５６表达水平影响患者的生存时间ｒｏＲＮＡ高表＝＝达肺癌患者的中位生存时间（ｎ２１１１．３８±０．９８）（ｎ１２４土，较低表达患者４，０）（０００１．８６明显缩短尸＜．）；－－４．通过Ｒ０Ｃ曲线分析ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的诊断效能，ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６对肺癌一＜有定的诊断价值０．０５）。Ｉ 硕士学位论文结论：－１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中呈现异常高表达，检测人体血清中的ｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６表达水平有望用于肺癌的早期诊断ｍ。２－．ＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的表达量与肿瘤分期、有无转移密切相关，且与肺癌患者生存时间显著相关明检测人体血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６，表表达水平有望用于判断肺癌患者预后。ｉＮＡ－３６５６关键词：；ｍｃｒｏＲ肺癌；诊断；预后ＩＩ Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义ＡＢＳＴＲＡＣＴＴｈｅ－ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｐＯｂｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｉｓｓｔｕｄａｉｍｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｊｙｐ－ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔｓａｎｄｎｏｒｍａｌｈｅａｌｔｈｐｙ－ｆｎｅｏｌｅｂｒｅａｌｔｉｍｅｌｕｏｒｅｓｃｅｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄ，ａｎａｌｚｅｔｈｅｐｐｙｙｅｘｐｒｅｓｓｔｔｉ－ｔｓｉｏｎｃｈａｒａｃｅｒｉｓｃｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ａｎｄｅｘｐｌｏｒｅｉｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ，ｗｉｔｈｃｌｉｎｉｃａｌａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔｓ．，ｒｏｖｉｄｉｎｓｏｍｅｖａｌｕｅｐｇｐｐｇｆｏｒｔｈｅｅａｒｌｄｉａｎｏｓｉｓｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｒｏｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒ．ｙｇ，ｐｇｇＭｅｔｈｏｄｓ：Ｔｏｃｏｌｌｅｃｔｅａｒｌｍｏｒｎｉｎｆａｓｔｉｎｂｌｏｏｄｓａｍｌｅｓｆｒｏｍ７０ｙｇｇｐｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｗｈｏｗｅｒｅａｄｍｉｔｔｅｄｔｏｔｈｅＯｎｃｏｌｏｅｎｔｅｒｏｆｇｙＣｔｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｉｔａｌｏｆＸｉａｎｇｙａＣｏｌｌｅｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＣｅｎｔｒａｌｐｇ，ＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄＤｅａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｎｃｏｌｏｇｙｏｆＮａｎｈｕａＨｏｓｉｔａｌｐｐＡｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＮａｎｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｆｒｏｍＪｕｌｙ２０１５ｔｏＭａｒｃｈ２０１６ａｎｄ３８ｈｅａｌｔｈｙｐｅｏｐｌｅｆｒｏｍＮａｎｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｉｌｉａｔｅｄＮａｎｈｕａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．－－ｔｉｔｉｔａｔｉＰＣＲｗａｄＲｅａｌｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｕａｎｔｖｅＰＣＲＲＴｓｕｓｅｔｏｄｅｔｅｃｔｔｈｅｑ（ｑ）ｅｘｒｅｓｓＲＮＡ－ｐｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｒｏ３６５６ｉｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｏｕｇｐａｎｄｈｅａｈｅ－ｗａｔｌｔｈｅｒｓｏｎｒｏｕ．Ｔｔｔｅｓｔｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｚｅｈｅｙｐｇｐｙｍｅａｓｕｒｅｍｅｎ－ｎｓｈｔｄａｔａ．ＣｈｉＳｑｕａｒｅｗａｓｕｓｅｄｔｏａｎａｌｙｚｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｉｐｂｅｔｗｅｅｎｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒｐｇｔｓｒ－ａｉｅｎｔ．ＴｈｅｅｆｉｃａｃｏｆＭｉｃｏＲＮＡ３６５６ｉｎｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｃａｎｃｅｒｐｙｇｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｒｅｃｅｉｖｅｒｏｅｒａｔｉｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃＲＯＣｃｕｒｖｅｓｔｏｇｐｇ（）ｏｂｔａｉｎｔｈｅａｒｅａｕｎｄｅｒｔｈｅＲＯＣｃｕｒｖｅＡＵＣｖａｌｕｅｓ．Ｔｈｅｍｅａｎｅｘｒｅｓｓｉｏｎ（）ｐ－－ｌｅｖｅｌｏｆＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｂａｓｅｄｏｎ２ＡＡＣｔａｎｄｄｉｖｉｄｅｄ，ｈｉ 硕士学位论文－ｏｎ－ｅｘｒｅｓｓｏｎｒｏｅｏｖｅｒａｉｎｔｏｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｒｏｕａｎｄｌｏｗｐｉｇｕｐ．Ｔｈｌｌｇｐ－－ｓｕｒｖｉｖａｌｐｅｒｉｏｄｏｆｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄｌｏｗｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｒｏｕｐｉｎｗａｓａｎａ－ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒｏｕｌｚｅｄｂＫａｌａｎＭｅｉｅｒｍｅｔｈｏｄ．ｇｐｙｙｐＲｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｅｘ－１ｉ．ｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｎｔｈｅｓｅｒｕｍｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｃａｎｃｅｒｗａｓｓｉｎｉｆｉｃａｎｔｌｈｉｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｐｇｇｙｇｒｏｕＰ＜０．０１．ｇｐ（）ｅｎｃａｎｃｅｒａ－２．ＩｎｔｈｌｕｔｉｅｎｔｒｏｕＣｈｉＳｕａｒｅｔｅｓｔａｎａｌｙｓｉｓｓｈｏｗｅｄｇｐｇｐ，ｑｔｈａｔ－ｔｔｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｌｙａｓｓｏｃｉａｅｄｗｉｈｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｇｅａｎｄｄｉｓｔａｎｔｍｅｔａｓｔａｓｉｓ（Ｐ＜０．００１），ａｎｄｗａｓｎｏｔｒｅｌａｔｅｄｔｏｇｅｎｄｅｒ，ａｇｅ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｔｙｐｅ（Ｐ＞０．０５）．Ｔｈｅ－３ｌａｓｍａｍｉｃｒｏＲ３６５６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌａｆｆｅｃｔｅｄｔｈｅ．ＮＡｐｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆａｔｉｅｎｔｓ．Ｔｈｅｍｅｄｉａｎｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｉｈｐｐｇ＝－ｎｉｆｉｃａｎｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｎ２１ｌ．ｗａｓｓｉｓ１，３８±０９８ｔｌｈｏｒｔｅｒｐ（，）ｇｙ＝３＜ｉｎａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｏｗｅｘｒｅｓｓｉｏｎｎ４１２４±０．８６．Ｚ０．００１ｐｐ（，）（）；ｎｏｓｔｉｃｅｆｆｉｃａｃ－４．ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｄｉａｇｙｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｂｙＲＯＣｃｕｒｖｅｍｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６ｔｔｉｈａｓａｃｅｒａｉｎｄｉａｎｏｓｃｖａｌｕｅｆｏｒｌｕｎｃａｎｃｅｒＰ，ｇｇ（＜０．０５．）Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：－１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｓｈｏｗｓａｂｎｏｒｍａｌｈｉｇｈｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｓｅｒｕｍｏｆａｔｉｉ－ｉｅｎｔｓｗｉｔｈｌｕｎｃａｎｃｅｒａｎｄｄｅｔｅｃｔｏｎｏｆｍｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｎｈｕｍａｎｐｇ，ｓｅｒｕｍｉｓｅｘｅｃｔｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｅａｒｌｄｉａｓｉｓｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．ｐｙｇｎｏ２－．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｕｍｏｒｓｔａｇｅａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｉｔｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ａｔ－ｔｐｉｅｎｔｓ．ＴｈｉｓｓｕｇｇｅｓｔｓｔｈａｔｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ｉｓｅｘｐｅｃｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｒｏｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｔｉｅｎｔｓ．ｐｇｐ－ｎｏｓＫｅｗｏｒｄｓ：ＬｕｎｃａｎｃｅｒｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６ＤｉａｎｏｓｉｓＰｒｏｉｓｇ；；ｙ；ｇｇＩＶ 硕士学位论文目录中文摘要１英文摘要ＩＩ第１章引言１第４２章资料和方法２．１研宄对象４２．２入组标准４２．３主要仪器和试剂６２．４研究方法７２．５统计学方法１２第３章结果？３．１肺癌患者组和正常对照组的性别、年龄比较１２一Ａ－３．２血清中ｍｉｃｒｏＲＮ３６５６在肺癌组与正常组中的表达水平１２－一３－．３ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平与肺癌患者临床资料的关系１３３－一－１４．４血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６对肺癌的诊断价值（ＲＯＣ曲线分析）３－．５血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平对患者生存时间的影响１５第四章讨论１６第五章结论２０２参考文献１综述２５参考文献３７ＶＩ －ＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义致谢４４４原创声明６ＶＩＩ ＭｃｒｏＲ－３６５６ｉＮＡ在肺癌患者血清中的表达及临床意义１．引言研究现状Ｘ成果１＿１肺癌的危害及特征一肺癌是种常见的危害人类健康的恶性肿瘤，其病死率远居各恶性肿瘤之首１［］，并且其发病率和死亡率呈逐年上升趋势。据资料统计，平均每年全球约有２３［’］１３０万人死于肺癌，预计到２０２５年，中国每年新增肺癌病例将超过１００万例。在确诊的肺癌患者中，大部分已达手术难以切除的晚期或是进展期，５年生存率。，，很低早期诊断的肺癌患者，通过根治性手术可改善临床症状提高生活质量延长患者生存期。但早期肺癌患者症状和体征不典型，影像学检查可发现肺部较明显异常改变的肺部结节，但大约５０％为良性病变且假阳性率高，对降低肺癌患４５’［］者死亡率，提高５年生存率作用有限。超声气管内镜下活检、肺穿刺活检均为有创检查，难以作为常规筛查手段。传统生物学标志物如细胞角蛋白１－ｌ１－ｌ２（Ｃｙｆｒａ２）、癌胚抗原（ＣＥＡ）、肿瘤多糖、神经元特异性烯醇化酶等是诊断肺癌的常用肿瘤标志物，但其诊断肺癌的敏感度较低，对肺癌的筛查及早期诊断６缺乏重要价值［］。所以探寻无创且敏感度和特异度高的方法对筛查肺癌患者有着重要的科学意义及临床价值。肺癌的死亡率高，，肺癌的预后直接关系到临床疗效准确地判断肺癌的预后一，对于指导临床选择治疗方案具有深远意义。所以寻找种早期诊断和判断预后的分子标志物是目前亟待解决的问题。１．２ｍｉｃｒｏＲＮＡ介绍及诊断价值Ｍ一ｉｃｒｏＲＮＡＮＡ家族的成员，属于小Ｒ，是种内源性非编码的单链ＲＮＡ长度为１９？２５－个碱基，ｉｃｒｏＲＮＡ起源于细胞核ｉｉｃｍ，其初级产物ｐｒｍｒｏＲＮＡ在聚合酶Ｄｒｏ－ｈａＲＮＡＧＣＲ８ＩＨｓｈａｐａｓ和双链蛋白Ｄ等共同作用下形成茎环状前体产物ｐｒｅｉｉｃｒｏＲＮＡ，通过转运蛋白运输到细胞质，在细胞质中经过ＲＮａｓｅｌｌｌ／Ｄｉｃｅｒ酶加工后形成成熟的双链ｍｉｃｒｏＲＮＡｍｉｃｒｏＲＮＡ，最后在解螺旋酶的参与下形成单链，１ 硕士学位论文７＿８［］与ＲＭ诱导沉默复合体整合对靶ｍＲＮＡ调控。通过碱基互补原理结合到耙基’’因ｍＲＮＡ的３端非编码区（３ＵＴＲ），导致ｍＲＮＡ降解或抑制转录后翻译诱导基因，、沉默改变耙蛋白的表达水平，进而在细胞组织或个体水平上影响生物体的生９长发育［］，并参与包括肿瘤在内的多种疾病发展过程。ＭｉｃｒｏＲＮＡ通常位于染色“”体区域的脆弱点以及与肿瘤相关的基因区域，可通过调控相关靶基因的表达１（）［］来影响细胞的增殖、侵袭及转移等生物学行为来参与肿瘤发生发展的过程。１１＿２１［］血清中的并大量的研宄证实，ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以耐受核糖核酸酶的消化而稳定ｉｃｒｏ存在。因此，循环血清ｍＲＮＡ的检测可能为肿瘤包括肺癌的早期诊断带来重大意义。近几年来，国内外研究表明ｍｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌的发生、发展及转移密切相关１３［］。越来越多的研究显示ｍｉｃｒｏＲＮＡ具有促癌和抑癌的双重功效，ｍｉｃｒｏＲＮＡ通过与致癌基因或抑癌基因网络中各个靶点的特异性结合，启动或阻滞这些靶基因的调控程序，，发挥其促癌和抑癌的生物学效应从而激活或抑制其下游信号通路。１４＿１５［］－－诸如ｍｉＲ１７９２在肺癌中充当癌基因的角色，发挥了致癌作用。而抑癌基因的失活或突变能够诱导激活原癌基因，发挥致癌作用。另外有研宄显示１６［］＿￣ｍｉＲ１７９２可通过下调ＲＡＢ１４从而阻止肺部对外部致癌物的作用，从而导致ＭｉｃｒｏＲＮＡ５３ｌ３－肺癌的发生。能够上调抑癌基因ｐ的表达，诱导ｐｋａｋｔ信号通路１７１８［］［］激活ｐ５３，也能够通过负调控抑制ｐ５３的活性，ｍｉｃｒｏＲＮＡ通过这种正负调控发挥其促癌和抑癌的作用。ＭｉｃｒｏＲＮＡ不仅通过促癌和抑癌作用调节肺癌，还通过调节影响肺癌血管生长的基因以及细胞因子发挥作用。在肺癌细胞中ｍｉＲ－１２６－ＡＶＥＧＦ－Ａ的表达直接导致血管内皮细胞生长因子（）下调，从而影响肿１９２＜）［］［］瘤中新生血管的形成，的过表达会导致肺癌血管生成的减少。目前己有多项研宄证明，在肺癌患者血清中存在差异性表达的ｍｉｃｒｏＲＮＡ，２１［］Ｃｈｅｎ等通过肺癌患者与正常人血清的对比发现，肺癌患者血清中２８种ｉｃｒｏＲＮＡ６３ｉＮＡ是正一ｍ缺失，种的ｍｃｒｏＲ常人血清中所没有的，进步比较肺ｃｒｏＲＮＡ－２０５－ｍ－癌和其他肿瘤血清ｍｉ的表达谱发现，ｍｉＲ、ｍｉＲ２０６和ｉＲ３３５等８２ ＭｏＲＮＡ－ｉｃｒ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义２２］［种血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ是肺癌特异的。Ｈｕ等通过１５２例肺癌患者与７５例正常人的血清对比证实－２５ｉＲ－２２３，ｍｉＲ及ｍ在肺癌患者中显著升高，是肺癌特异性血清２３Ｌ］－ｉＮＡ－－。ＺｈｕｉＲ１Ｒ９６ｉＲ１ｍｃｒｏＲ等发现，肺癌患者血清中ｍ８３家族（包括ｍｉ、ｍ８２ｉＲ－８３ＭｉＲＮＡ和ｍ１）的表达要显著高于正常对照组。ｃｒｏ的差异性表达为其成为肺癌标志物创造了又一个条件。而目前所用于肺癌早期诊断的肿瘤标志物如癌胚－抗原、糖类抗原（ＣＡ１２５、ＣＡ１９９）、蛋白和酶类（ＮＳＥ、Ｃｙｆｒａ２１１等）特异性和敏感性均不高。因此，通过检测肿瘤血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达谱，对肺癌早期诊断可以提供重要的意义，并且还可以判断肿瘤的存在及生长情况，从而可以判断患者预后。人们可以根据ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌中表达谱的差异性，通过检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌中的表达水平来判断肺癌患者的预后和转归。在肺癌的治疗过程中，通过检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达水平变化判断化疗药物的敏感性，指导临床用药。一检验血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达作为种非侵入性的诊断方法具有无创性、便。ｒｏＲＮＡ捷性的特点，易于被患者接受己有许多文献报道关于ｍｃ作为肺癌肿瘤标志物的研宄。虽然部分ｍｉｃｒｏＲＮＡ诊断肺癌的特异性和灵敏度均己经达到了９９％以上，但是这些研究仍处于早期实验室研宄阶段，没有在临床上进行推广应用，一一还需要进一步研宄ｃｒｏＲＮＡ－３６５６步反复多次、大样本量进行深入进。Ｍｉ作为４Ｐ３ｃｒｏＲＮＡ不多ｕ一种新型ｍｉ，目前国内外关于其的报道，ＪｌｉａｎＨａｍｆｊｏｒｄ等人项研宄发现，，通过对比结肠腺癌组和正常人组组织ｍｉＲＮＡ的表达他们在结肠腺６ｃｒｏＲＮＡｍ－癌组发现了异常表达的１种ｍｉ，其中包括表达下调的ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６，而＇ｌｌ－－对于其具体作用机制缺乏研宄。ＲｕｉＭｅｎｇＹａｎｇ等人研宄表明ｍｉｃｒｏＲ３６５６在－ＧＲ胰腺癌细胞系中表达降低，且ｍｉｃｒｏＲ３６５６水平的降低与胰腺癌患者预后差密切相关－。在乳腺癌患者的组织和外周血中也发现ｍｉｃｒｏＲ３６５６是降低的。但是－目前国内外暂无研究ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６与肺癌关系的具体报道。本课题通过基因芯片技术初步筛查了肺癌患者循环血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达谱，从中选择ｍｉｃｒｏＲＮＡｏＲＮＡ－３６５６ＰＣＲ技术检表达上调３倍的ｍｉｃｒ进行实时荧光定量测。分析其诊断肺癌的灵敏度和特异性以及与患者临床资料、预后的关系。旨在探讨其在肺癌血清的表达及临床意义。３ 硕士学位论文２．资料与方法２．１研究对象收集中南大学湘雅二医院肿瘤中心和南华大学附属南华医院２０１５年７月至２０１６年３月住院的７０例初治肺癌患者和南华大学附属南华医院体检科的３８例°健康人群的晨起空腹血样。采集２ｍｌ血样置于ＥＤＴＡ抗凝管中，在４Ｃ下离心１０分钟，转速为２０００ｒ／ｍｉｎ，然后取上层血清６００ｕｌ至无ＲＮＡ酶的ＥＰ管，保存于°－８０Ｃ冰箱中。分别收集两组的基本临床资料，如性别、年龄、吸烟及肺癌组的分期、分一一型。而样本数据的生存时间指，每个月随访，、预后、转移情况等次如果第月随访１，患者不在，则生存时间期为月，以此类推。随访期为二年，若二年期满仍存活则定义为２４月。２２＿入组标准２．２．１肺癌组：所有的肺癌患者均经病理学确诊，诊断符合肺癌ＴＮＭＣ０ＩＩＩＩＩＩＩ分期（ＩＡＳＬ２００９）：隐形肺癌、、、、、Ｖ期。所有入组患者在样本收集前未接受任何癌症治疗。隐形肺癌ＴｘＮＯＭＯ０期ＴｉｓＮＯＭＯＩＡ期Ｔｌａ，ｂ，ＮＯ，Ｍ０ＩＢ期Ｔ２ａ，肌ＭＯＩＩＡ期Ｔｌａ，ｂ，ＮｌＭ０Ｔ２ａＮｌＭ０，，Ｔ２ｂＮ０Ｍ０，，ＥＢ期Ｔ２，Ｎ１，Ｍ０；Ｔ３，Ｎ０，Ｍ０ＩＨＡ期Ｔ１，Ｎ２，Ｍ０Ｔ２Ｎ０２Ｍ０，，４ Ｍ－ｃｒｏ３６５６ｉＲＮＡ在肺癌患者血清中的表达及临床意义Ｔ３，Ｎ１，Ｍ０Ｔ３，Ｎ２，Ｍ０Ｔ４，Ｎ０，Ｍ０Ｔ４，Ｎ１，Ｍ０ＩＩＩＢ期Ｔ４，Ｎ２，Ｍ０，任何Ｔ，Ｎ３，Ｍ０ＩＶＴ，任何ＮＭｌａｂ期任何，，小细胞肺癌对于接受非手术治疗的患者采用美国退伍军人肺癌协会的局限？．病变局限于同侧胸腔，能完全被单个照射野包栝期和广泛期分期方法（局限期；广泛期超过局限期的其他任何情况），对于接受外科手术的局限期小细胞肺癌患者采用ＩＡＳＬＣ２００９年第七版分期标准。Ｔ、Ｎ、Ｍ的定义。Ｔｘ：原发肿瘤不能评估，或痰、支气管冲洗液找到癌细胞但影像学或支气管镜没有可见的肿瘤。Ｔｉｓ：原位癌。Ｔ１：肿瘤最大直径彡３ｃｍ，周围被肺或脏层胸膜所包绕，支气管镜下肿瘤侵犯．没有超过叶支气管。Ｔｌａ：肿瘤最大径Ｔｉｂ：肿瘤最大径＞２ｃｍ且＜３ｃｍ一Ｔ２：肿瘤大小或范围符合以下任何项：肿瘤最大径＞３ｃｍ；但不超过７ｃｍ；累及主支气管，多２ｃｍ但距隆突；累及脏层胸膜；扩展到肺门的肺不张或阻塞性肺炎，但不累及全肺。Ｔ２５ｃｍ一＞ａ，：肿瘤最大径彡且符合以下任何点：肿瘤最大径３ｃｍ；累及主２ｃｍ，。支气管，展到肺门的肺不张或阻塞性肺炎但距隆突＞；扩但不累及全肺Ｔ２ｂ：肿瘤最大径＞５ｃｍ且彡７ｃｍ一Ｔ３？．任何大小的肿瘤己直接侵犯了下述结构之：胸壁（包括肺上沟瘤）、膈肌、纵膈胸膜、心包；或肿瘤位于距隆突２ｃｍ以内的主支气管，但尚未累及隆突；或全肺的肺不张或阻塞性肺炎。肿瘤大小最大径＞７ｃｍ；与原发灶同叶的５ 硕士学位论文单个或多个的卫星灶。一心脏Ｔ４：任何大小的肿瘤已直接侵犯了下述结构之者：纵膈、、大血管、气管、食管、喉返神经、椎体、隆突发灶不同叶的单发或多发病灶。；或与原Ｎｘ：区域淋巴结不能评估。ＮＯ。：无区域淋巴结转移Ｎ１：转移至同侧支气管旁淋巴结和（或）同侧肺门淋巴结，和肺内淋巴结，包括原发肿瘤直接侵犯。Ｎ２：转移至同侧纵膈和（或）隆突下淋巴结。Ｎ３。：转移至对侧纵膈、对侧肺门淋巴结、同侧或对侧斜角肌或锁骨上淋巴结Ｍｘ：远处转移不能评估。Ｍ０：无远处转移。Ｍｌ：有远处转移。Ｍｉａ：胸膜播散（包括恶性胸膜积液、恶性心包积液、胸膜转移结节）；对侧肺叶的转移性结节。Ｍｌｂ：胸腔外远处转移。？２，．２．２正常对，照组．与患病组年龄和性别相近的健康体检者如入组者近２周无感染，无肝肾其他疾病。以上所有入组者均同意且签署了知情同意书，且得到医院伦理委员会批准。２．、．２３＾扫ｔ除标准：所有入组患者排除心脑血管疾病肝肾疾病等全身系统疾病，排除长期服用药物史。，排除其他肿瘤疾病２．３主要仪器和试剂２３．．１主要仪器６ Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ５４１７Ｒ台式冷冻离心机德国艾本德ＡＢ２７２０ＴｈｅｒｍａｌＣｙｃｌｅｒＰＣＲ仪美国ＴｈｅｒｍｏＡＢＳＯＮＭ－６迷你离心机国产ｉＦｌｙＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ７５００美国Ｔｈｅｒｍｏ海尔ＢＣ－１３０Ａ冰箱中国海尔ＥｐｐｅｎｄｏｒｆＮｅｗＢｒｕｎｓｗｉｃｋ超低温冰箱．德国艾本德－恒温水域槽ＳＹ１２１０国产－３Ａ国产旋涡混匀器ＨＹＱ１１１２．３２．主要试剂庚烷国产分析纯无水乙醇国产分析纯甲烷国产分析纯氯仿国产分析纯三羟甲基氨基甲烷Ｂｉｏｓｈａｒｐ盐酸国产分析纯乙二胺四乙酸Ｂｉｏｓｈａｒｐ引物（表１）广州瑞真生物科技有限公司ｍｉＲＮｅａｓｙＳｅｒｕｍ／Ｐｌａｓｍａｋｉｔ德国ｉａｅｎＱｇ－ＰｌａｓｍａＳｐｉｋｅＩｎＣｏｎｔｒｏｌ德国ＱｉａｇｅｎｍｉＳｃｒｉｐｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲＫｉｔ德国ＱｉａｇｅｎｍｉＲＮｅａｓｙＦＦＰＥｋｉｔ德国Ｑｉａｇｅｎ－－ｎｃｒｏｅｎｅｏｅＡｌｌｉＯｎｅＴＭｍｉＲＮＡ美国ＧＣｏｐｉａＲＴ－ＰＣＲＫｉｑｔ２．４研究方法２．４．１肺癌患者血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ的筛选和验证本研究实验前阶段，我们将５例肺癌患者混合样本和５例正常对照者血清混１合样本进行了基因芯片检测：８３个ｍｉｃｒｏＲＮＡ，结果显示其中在肺癌患者中上７ 硕士学位论文调（上调２倍以上的１５６个，上调３倍以上１３１个）；３３９个ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌患者中下调（下调２倍的ｍｉｃｒｏＲＮＡ有３２１个，下调３倍有３０７个）。基因芯片一ＮＡ技术是种筛查ｍｉｃｒｏＲ的高通量检测手段，容易出现假阴性和假阳性，因此我们从中选择表达上调３倍的ｍｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６进行实时荧光定量ＰＣＲ技术进行验一ｉＲ－３６５６的表达ｉＲ－３６５６证。检测肺癌患者及健康人群血清中ｍ，以进步分析ｒａ与肺癌发生的相关性。耵＝３Ｍ图１前期通过基因芯片技术筛查血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ结果２．４．２实验步骤２．４．２．１血清样本的处理ＥＤＴＡ２ｍ用抗凝管采集每位患者外周血ｌ，用实验室台式低速离心机离心°ｌＯｍｉｎ。离心条件：在４Ｃ条件下，转速２０００ｒ／ｍｉｎ，离心ｌＯｍｉｎ；提耳义６００ｕｌ血清°－分装于１．５ｍｌ无ＲＮＡ酶ＥＰ管内，置于８０Ｃ超低温冰箱冻存。２．４．２．２血清ＲＮＡ的提取１）准备好血清样本或者解冻样本。２）取２００ｕｌ血清样本至２ｍｌ收集管，加入ｌＯＯＯｕｌ的裂解液ＱＩＡｚｏｌＬｙｓｉｓ－混勾Ｒｅａｅｎｔ，用移液器吹打２３次，确保分布均匀。ｇ，°３－））在室温环境下（１５２５Ｃ下，静置混合液５ｍｉｎ（使其充分反应），以使核酸蛋白复合物分离完全。Ａ４）７ｕＲＮｉｋ－ＩＣｘ加入ｌｍｉｅａｓＳｅｒｕｍ／ＰｌａｓｍａＳｅｎｏｎｔｒｏｌ（ａｔｌ．６ｌ〇８ｃｏｉｅｓ／ｙｐ试剂ｐｕｌ）〇８ ＭｃｒｏＲ－ｉＮＡ３６５６在肺癌患者血淸中的表达及临床意义５）加入２００ｖｉｌ氯仿至样本中，合上管帽，并剧烈摇晃１５秒（充分混合）。°－）室温下５２５Ｃ）下静置２－３ｍｉｎ（６（１使其充分作用）。°７）在４Ｃ、１２０００ｒ／ｍｉｎ、离心１５ｍｉｎ。（离心后，会分为３层，上层无色，含有ＲＮＡ，第二层白色，第三层红色）８）转移上层无色液体６００ｕｌ至２ｍｌ的收集管，为避免移入杂质，加入９００ｕｌ的无水乙醇，并用移液器混匀。９）７００ｕｌ的样本加入到吸附柱中，，吸取，下端有２ｍｌ的收集管合上盖子在室温下１２０００ｒ／ｍｉｎ，离心３０ｓ，然后弃去收集液。、１０）重复步骤９。１１）加入７００ｕｌ的ＢｕｆｅｒＲＷＴ试剂到吸附柱中，合上盖子０００，在室温下、１２ｒ／ｍｉｎ，离心３０ｓ，然后弃去收集液。１２）加入７００ｕｌ的ＢｕｆｅｒＲＰＥ试剂到吸附柱中，合上盖子，在室温下、１２０００ｒ／ｍｉｎ，离心３０ｓ。并废弃收集液。％＊１３加入５０（＾１的８０的乙醇到吸附柱中，合上盖子，在室温下、１２０００１／１１如，）离心２ｍｉｎ。并废弃收集管和收集液。一１４）重置个新的２ｍｌ收集管，合上盖子，在室温下、１２０００ｒ／ｍｉｎ，离心５ｍｉｎ。并废弃收集管和收集液。一－１５）重置个新的１．５ｍｌ收集管，加入１４ｕｌ的ＲＮａｓｅｆｒｅｅｗａｔｅｒ至吸附柱中心、１２ｒｍｉｎ心ｌｍｉｎ。，合上盖子，在室温下０００／，离１６）丢弃吸附柱，冷冻保存下面的１．５ｍｌ收集管（含有１２ｕｌ的无色液体，内含ＲＮＡ）。２．４．２．３ｉ清样本〇ＤＮＡ合成（使用ｍｉＳｃｒｉｐｔＩＩＲＴＫｉｔ试剂盒）１）在冰上准备逆转录反应条件。２）３ｕ－取纯化ＲＮＡｌ（内含有ｍｉＲＮｅａｓｙＳｅｒｕｍ／ＰｌａｓｍａＳｉｋｅＩｎＣｏｎｔｒｏｌ）至０．５ｍｌｐ的ＥＰ管。３）５ｘｍｉＳｃｒｉｔＨｉＳｐｅｃＢｕｆｅｒ４ｕＫ〇ｘｍｃｔＮｕｃｃｓＭｘ２ｕ加入ｐｌｉＳｒｉｐｌｅｉｉｌ、ＲＮ－ｔ９ｕｌ、ｍＳｔＲＴｔＭｉｘ２ｕｌａｓｅｆｒｅｅｗａｅｒｉｃｒｉｅｖｅｒｓｅｒａｎｓｃｒｉａｓｅ心并充分混勾。ｐｐ，小°４）将含有２０ｕ］混合液的０．５ｍｌＥＰ管置于ＰＣＲ伩上，反应条件设置为：３７Ｃ、９ 硕士学位论文°６０ｍｉｎ９５Ｃ、５ｍｉｎ〇；５－ｆｒ）向完成逆转录反应体系中，加入２００ｕｌ的ＲＮａｓｅｅｅｗａｔｅｒ（无酶水）稀释。°）－２０６冷冻保存于Ｃ血楽样本的ＲＴ反应体系反应成分反应体积５ｘｍｉＳｃｒｉｐｔＨｉＳｐｅｃＢｕｆｅｒ４ｕｌ１ＯｘｍｉＳｃｒｉｐｔＮｕｃｌｅｉｃｓＭｉｘ２ｕｌｍｉＳｃｒｉｐｔＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅＭｉｘ２ｕｌＲＮａｓｅ－ｆｒｅｅｔｗａｅｒ９ｘｘｌ样本（含有ＲＮＡ）３ｕｌ总体积２０ｕｌ２－．４．２．４血清样本ＲＴＰＧＲ扩增１）取２ｕｌ含有ｃＤＮＡ的混合液置于八联管中，然后分别向其中加入２ｘＱｕａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲＧｅｅｎＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉｘ５ｕｌ＾１ＯｘｍｉＳｃｒｉｐｔＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒｌｕｌｎ－－－ＲＮａｓｅｆｒｅｅｗａｔｅｒｌｕｌ，最后加入ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６引物。建立ｌＯｕｌＲＴＰＣＲ应体反－－－ｍｅｒ。ｅｍｉＲ３９１ｍｉＳｃｒｉｐｔｒＡ系设置ＣＰｉｓｓａｙ为内参照。每个样设置三个平行孔，减少实验误差。以上操作均在冰上进行。２ＡＢＳＯＮＭｉＦｌ－６）在进行扩增前，需要在ｙ迷你离心机上充分混匀。３）最终以ｌＯｕｌ的反应体系在实时荧光定量ＰＣＲ仪７５００上进行扩增。反应°一分为两步，第步是９５Ｃ１５ｍｉｎ变性１个循环后进行第二步扩增４０个循；然°°°环９５Ｃ１５ｓ，５５Ｃ３０ｓ，７０Ｃ３０ｓ。（）ＲＴ引物序列：ｆ，－３６５６－－ｍｉｃｒｏＲＮＡ，５ＧＧＧＴＧＣＧＧＧＧＧＴＧＧＡＡＡＡＡ３引物碱基序列为－－－ｍ本研宄ｍｉｃｒｏＲＮＡ的含量校正用ＣｅｉＲ３９ｌ作为内参，内参序列：＇，－５ＵＣＡＣＣＧＧＧＵＧＵＡＡＡＵＣＡＧＣＵＵＧ－３１０ Ｍ－血清中的表达及临床意义ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清样本ｑＰＣＲ反应体系反应成分反疢休和２ｘｕａｎｔｉＴｅｃｔＳＹＢＲｅｅｎＰＣＲａｓｔｅｒＭｉｘＳｕｌＱＧＭｌＯｘｍｉＳｃｒｉｔＵｎｉｖｅｒｓａｌＰｒｉｍｅｒｌｕｌｐ－ＲＮａｓｅｆｉｒｅｅｗａｔｅｒｌｕｌ目的基因（引物）ｌｕｌ样本（含ｃＤＮＡ）２ｕｌ总体积ｌＯｕｌ２．４２．５．样品的处理计算￣ＡＡＣ；Ｔ＝２－３６５６运用公式ＲＱ计算ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达水平，Ｃｔ为反应达到阈值时所需的循环数，ｍｉｃｒｏＲＮＡ相对于标准内参的表达量用方程ＡＯｒ表示，其中Ａ待测样本－ｔ－Ｃ内参ＣｔＣｔ。２．５统计学方法所有数据应用ＳＰＳＳ１８．０统计软件进行分析。采用ｔ检验分析计量资料，采－ｕａｒｅ分析肺癌患者ｍ用ＣｈｉＳｑｉｃｒｏＲＮＡ表达水平和其临床资料之间的关系。根－据计算ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的平均表达水平分为高表达组和低表达组，用Ｋａ－Ｍｉ。ｐｌａｎｅｅｒ法分析肺癌组中高表达组和低表达组的总体生存期ｍｉｃｒｏＲＮＡ诊断肺癌的诊断效能用受试者工作特征（ＲＯＣ）曲线分析，获取ＲＯＣ曲线下面积＜０（ＡＵＣ）。Ｐ．０５表示差异具有统计学意义值值。１１ 硕士学位论文３．结果３．１肺癌患者组和正常对照组的性别、年龄比较在本实验中我们最后共收集到６２例肺癌患者（随访丢失３例患者的临床信息，实验操作失误损失５例血样）和３６例正常健康人（实验失误损失２例血样）的临床资料。对基础资料进行统计分析发现两组受测者间性别、年龄对比无统计学差异（户＞０．０５），具有可比性，见表１表１肺癌组和健康对照组临床资料对比组别性别年龄男女彡５５岁＜５５岁正常组２２１４２３１３肺癌组４３１９４１２１／值０．５９４０．０５０户值０．４４１０．８２２－．２血清中ｍｏ３ｉｃｒＲＮＡ３６５６在肺癌组与正常组中的表达水平Ｒｅａ－ｔｉｉＮＡ－３６５６使用ｌｍｅＰＣＲ法检测肺癌组和正常组血清中的ｍｃｒｏＲ表达＾：７＇＾－水平（图１），结果显示６２例肺癌患者血清中１＾１〇？３６５６的２为５．５１±—＿ＡＡｎＡＡＣＴ＾ＣＴ０．８１，正常人血清中２为２．１２±０．４６，肺癌组２值大于正常组２值。－与正常人组比较，ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达水平明显升高户＜（０．０１）。１２ Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血洁屮的表达及临床意义＾＜〇０１３０－－ＩＩ２０－Ｉ：１〇－、？〇－－１０Ｊ．．正常组肺癌组图－ｌｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在正常健康人和肺癌患者血清中的表达３－．３ｍｃｒｏＲＮＡｉ３６５６表达水平与肺癌患者临床资料的关系在肺癌组中－，依据ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的平均表达量５．５１，将肺癌患者－－分为ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６低表达组（４１例）和ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６高表达组（２１例），Ｃｈ－－ｉＳｑｕａｒｅ检验分析ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平与肺癌患者临床特征关系如（表２－），结果表明ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的表达量与临床分期Ｐ＜、远处转移显著相关（０．００１），与性别、年龄、病理分型无相关性（户＞０．０５）。表２ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达量与临床参数之间的相关性２临床资料低表达高表达Ｘ／Ｚ值尸值年龄彡５５２６１５０．６３１０．５２８＜５５１５６性别男３２１３１．３４９０．１７７女９８吸烟是１９７０．９８２０．３２６否２２１４病理分型鱗癌１０５３．５７６０．０５９病理其他９０１３ 硕士学位论文小细胞肺癌９１腺癌１３１５临床分期Ｉ、ＩＩ期３２５４．１２０＜０．００１ＩＩＩＩＶ９１６、期远处转移是６１３３．８２１＜０．００１否３５８ＣＥＡ升高１２８０．７０４０．４８２正常２９１３－３ｍｉＲ０Ｃ．４血清ｃｒｏＲＮＡ３６５６对肺癌的诊断价值（曲线分析）ｒｏＲＮＡ－３６５６０Ｃ曲２将肺癌组和正常组中ｍｉｃ表达水平做Ｒ线分析如（图），具一ｉＮＡ－３６５６对诊断肺癌有体数值如表３，可知检测血清中的ｍｃｒｏＲ定的意义。Ｒ０Ｃ曲线￣＊？？＊？？＊＊＞ｙ１００１ｉ￣８０■ｐ＾［Ｊ￣ｓｒ＾６０－．／诳／１＇＾－４０ｆ２０－／ｙｙＱ＼，，，，，０２０４０６０８０１００特异性图２ｍｉｃｒ〇ＲＮＡ－３６５６表达水平的Ｒ０Ｃ曲线图４］ Ｍ－ｉｃｉｒｏＲＮＡ３６５６＆肺癌患者血淸中的表达及临床意义表３ｍｉｃｒｏＲＮＡ－Ｓｅｓｅ表达水平的ＲＯＣ曲线图相应值ＡＵＣ值标准误９５％置信区间Ｐ值ｉｃｒｏＲＮＡ－－＜ｍ３６５６０．７５５０．０５２０．６５３０．８５７０．００１３－．５血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平对患者生存时间的影响－３６５６５．５１在肺癌组中，按照ｍｉｃｒｏＲＮＡ平均表达水平，将肺癌患者分为高Ｋａｌ－Ｍｉｅ３－表达组和低表达组ａｎｅｒ法），ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６。ｐ分析结果（图发现＝＝ｎ２１．高表达肺癌患者的中位生存时间（，１１．３８±０９８）较低表达患者４１，２０．７３（ｎ０－±．８６）明显缩尸＜０００１４ｉＮＡ３６５６短（．），具体数值如表。结果表明血清ｍｃｒｏＲ表达水平会影响肺癌患者生存时间，对判断肺癌患者预后有重要意义。表４ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６影响生存时间的统计数值ｍ－３６５６ｉｃｒｏＲＮＡ中位生存时间（月）Ｐ值高表达组１１尸＜０．００］低表达组２０生存函数－－低表达组１００ｉ．－高表达组］ｈ８。＿Ｉ＾＇Ｉ？Ｉ一Ｉ￡６０－；＃此４０－廿Ｉ２０－Ｉ＊？０４８１２１６２０２４生存时间（月）图３血清ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平对患者生存时间的影响１５ 硕士学位论文４．讨论一肺癌仍是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之，其临床表现复杂多样，在疾病的早期大多数患者无明显的症状和体征，部分患者可表现为咳嗽、咳痰，，痰中带血丝、发热、胸部疼痛等不适但常常被忽略。大多数患者发病时已是疾病的中晚期，早期诊断是肺癌治疗的关键ＣＡ１２５、。癌胚抗原、糖类抗原（ＣＡ－１９９）、蛋白和酶类（ＮＳＥ、Ｃｙｆｒａ２１１等）是肺癌诊断的常用肿瘤标志物，但其敏感性和特异性均不高，发现新的用于早期诊断的标志物十分重要。近几年来，ｍ一ｉｃｒｏＲＮＡ己成为医学研究热点之。２６［］Ｖｏ－２１ｉＲ－２－－ｓａ通过在肺癌患者中，ｍｉＲ，ｍ１０ｍｉＲ１８２ｍｉＲ３１研宄发现，，，－２０５－１８３－２６－３－－－－ｍｉＲｍｉＲ，ｍｉＲ１ｉＲ３０ａｍｉＲ３０ｄｍｉＲ４８６５ｐ，表达上调ｐ，ｍ，，，２７［］ｉＲ－４５１ａｉＲ－１２６－ｉＲ－－ｍ，ｍ５ｐｍ１４３ｍｉＲ１４５，Ｃｕｉ，，表达下调。另外等研宄发ｍ－现ｉＲ１２５ｂ表达水平升高与肺癌患者的生存率的降低有关。不同病理类型的肺８Ｐ］ｉｒｃｒｏＲＮＡｍｉＲ－２０５－２癌组织的ｍ表达也有差异，在肺鳞癌中表达上调，ｍｉＲ１在腺癌和鳞癌中表达上调。这些特异性的表达对肺癌诊断、治疗、预后判断具有一定意义。采集外周血检测特定的ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达情况，造成的损伤较小，敏感性又高，可对肿瘤的诊断、治疗反应、预测和预后判断提供重要依据。因此，通ｉｃｒｏＲＮＡ的表达将可能成为诊断肺癌的重要标志物过检测外周血中ｍ，并且比传统的病理活检手段更具有优势。ｃｒｏＲＮＡ－３６５６－由于目前关于ｍｉ的报道很少，ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达情况仍然未知。本研宄应用基因芯片技术筛查出在肺癌患者中上调的ｍ－１８３ｍｉｃｒｏＲＮＡ，ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６个其中我们选择上调的进行验证，首次研宄ｍ－３６５６ｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌的相关性。＿ｍ－研宄结果发现ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在正常人和肺癌患者的血液中存在显著差异户＜００１ＮＡ性表达（．）。与芯片筛查的结果相符合ｃｒｏＲ。本研宄证实肺癌组ｍｉ１６ ＭｏＲＮＡ－血清中的表达及临床意义ｉｃｒ３６５６在肺癌患者一的表达明显高于健康对照组ｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６。同时我们发现ｍ与肺癌的诊断有定一ｉｃ关联，提示ｍｒｏＲＮＡ有可能成为肺癌早期诊断的个指标。－本研宄通过检测肺癌患者组和正常对照组血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的表达水ｉｃ－３６５６户＜平，实验结果表明ｍｒｏＲＮＡ在肺癌患者血清中的表达水平明显升高（一０．０１），，进步研宄其与临床参数相关性结果表明其表达量与临床分期、远处＞转移显著相关（户＜０．００１），而与性别、年龄、吸烟、病理分型无相关性（尸一ｍ－０．０５）。进步将肺癌组和正常人组中ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平做Ｒ０Ｃ曲线分析，一，结果显示其灵敏度高，有定的特异性这提示通过检测人体血清中的ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６有助于鉴别肺癌患者和健康正常人。结合以上结果，提示对于早ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６期临床症状不典型的患者，可通过检测患者血清的表达量水平筛选出可能的早期肺癌患者，为提髙肺癌的早期诊断率带来福音，。对于肺癌患者ｃｒｏＲＮＡ－３６５６可通过检测患者血清ｍｉ的表达量水平，，评估患者病情了解肺癌是２９］［－否已存在转移Ｔａｎｇ等，在血浆中ｍｉＲ２１。的研究结果显示与健康对照组相比Ｒ－Ｒ－５和ｍｉ１５５表达水平升高，而ｍｉ１４在肺癌患者中表达水平较低，结合检测这三种ｍｉｃｒｏＲＮＡ有助于区分肺癌和健康吸烟者，其灵敏度为６９．４％，特异性为３（）ｌ一ｔ７８－．３％。另项研宄显示运用ＱＰＣＲ分析法检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ，与健康人相比，ｒａｉＲ－２５ａ－５ｉ－２５ｉ－２６１ｐ，ｍＲ和ｍＲ１在肺癌患者血清中显著减低，联合检测这三种ｍｉｃｒｏＲＮＡ，能以８７．５％的灵敏度和特异性区分早期肺癌患者。有数据显示检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ有助于区分肺癌与吸烟者，但本实验结果显示肺癌患者中吸烟与否和－ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６７ｊＣ平无关，这可能与不同ｍｉｃｒｏＲＮＡ的不同角色所表现出不同特色有关－，而关于ｍｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的研宄尚且有限，需要更多的深入研宄。本实验研究结果提示高表达ｍｃｒｏＲＮＡ－３６５６ｉ患者中位生存时间（１１月）明ｍ－显短于低表达组（２２月），表明血清ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６表达水平可能会影响肺癌一ｉ患者生存时间，可能成为判断肺癌患者预后的个生物学指标。ｍｃｒｏＲＮＡ在肺癌血清中有着不同的表达谱，通过检测肺癌患者血清ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达谱，可以３１［］。判断肺癌肿瘤的存在及生长情况，以便确定肺癌的预后有研宄报道单个－７ｉ－３４ａｍｉｃｒｏＲＮＡ的低表达预示肺癌的不良存活率或高复发性ｌｅｔ，ｍＲ，，包括１７ 硕士学位论文－一－－１１ｉＲ－２２１ｉ２００ｃ－３７４ａｍｉＲ８ａｍ，ｍｉＲ２１８ｒｏＲＮＡｍｉＲ，ｍＲ些ｍｉｃ，，等；的高表－－８３－１－１－９６达则提示预后不佳，包括ｍｉＲ２１、ｍｉＲ１家族（ｍｉＲ８２，ｍｉＲ８３和ｍｉＲ），３２３３’［］ｉＲ－１－１６ｉＲ－９２ａ－２－１２６－ｍ３，ｍｉＲｍｍｉＲ。在ＳＣＣ型，ｉＲ１２６，和ｑ亚中高表达ｍｍ－ｉＲ１２６水平与不良预后的相关性尤为显著；的高水平与肿瘤中ＶＥＧＦ的增加相ｉＲ－１２６关，并且ｍ和ＶＥＧＦ的共同表达提７Ｋ肺癌预后不良。而目前还没有ｍ－３６５６ｉｃｒｏＲＮＡ的表达与肺癌预后的研宄报道。一综上所述，肺癌是种复杂的分子性疾病，尽管目前有多种技术和手段可诊一。断肺癌，但仍欠理想目前仍缺乏种操作安全、简单、无创，标本容易获取、费用低易于普及推广的筛查方法，从而提高早期诊断肺癌水平，运用新技。因此术，从基因和蛋白水平筛查和早期诊断肺癌是未来重要研究方向。本研宄从基因ＮＡ－３６５６水平检测肺癌患者血清中ｍｉｃｒｏＲ的表达水平，运用统计分析方法探寻ｍｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６与肺癌临床特征和预后的关系，发现检测人体血清中ｍｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６有望成为肺癌早期诊断和判断预后的新型无创性生物标志物。然－３６５６而ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌的发生、发展的具体机制及相关性仍需要更大样本和多中心临床实验来进一步研宄。８１ Ｍ－血清中的表达及临床意义ｉｃｒ〇ＲＮＡ３６５６在肺癌患者５．结论ｉｃ－３６５６１．ｍｒｏＲＮＡ在肺癌患者血清中呈现异常高表达，可能与肺癌的发生ｉｃ－密切相关，检测人体血清中的ｍｒｏＲＮＡ３６５６表达水平有望用于肺癌的早期诊断。ｍ－２．ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６的表达量与肿瘤分期、有无转移密切相关，且与肺癌患者生存时间有相关性ｃｒｏＲＮＡ－３６５６表达水平有望用于判，表明检测人体血清中ｍｉ断肺癌患者预后。１９ 硕士学位论文参考文献１ＴｏＬＢＦＲＬＦＪＬｏｔｔ－ＴｉｔＪＪｅｍａｌＡｌｌｒｒｅＡｒａｉｅｅｌｅｒｌａｒｅｅｕｌｅｎ．Ｇｏｂａｃａｎｃｅｒ［］，ｙＳ，，，ｇｙｓｉｓｔｃｓ２０１２ＪＣａｎｃｅｒ－Ｊｌｉｎ２１５６５２：７１ｓｔａｔｉ．ＣＡＣ．０．８０８．，［］（）２ＴｏｒｒｅＬＳｉｅｅｌＲＬＪｅ．ＬｕｎＣａｎｃｅｒＳｔａｔｉｓｔｉｃｓＪＡｄｖＥｘＭＢ．２０１ＡｍａｌＡ，ｅｄｉｏｌ６．［］，，ｇｇ［］ｐ－８９３：１１９．－Ａ３ＴｏｒｒｅＬＡＢｒａＦＳｉｅｅｌＲＬＦｅｒａＪｒｔｅｔＴｅｕｌｅｎｔＪＪｅｍａ．ｏｂａｃａｎｃｅｒ，ｙ，ｇ，ｌｙ５ＬｏｉｓｌＧｌｌ［］－ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓＪ２０１２．ＣＡＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎ．２０１５．６５２：８７１０８．［］，（）４ｓｅｎＪｅ－［ＳｗｅｎＳＪｔｔＪＲ，ＨａｒｔｍａｎＴＥ，ｅｔａｌ．ＣＴｓｃｒｅｅｎｉｎｆｏｒｌｕｎｃａｎｃｅｒ：ｆｉｖｅｅａｒ］，ｇｇｙ－ｒｏｓｅｃｔｉｖｅｅｘｅｒｉｅｎｃｅＪＲａｉｌｏ．２００５２３５１：２５ｐｐｐ．ｄｏ．）９６５．［］ｇｙ（［５］ＢｏｅｒｉＭ，ＶｅｒｒｉＣ５ＣｏｎｔｅＤ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓｉｇｎａｔｕｒｅｓｉｎｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｐｌａｓｍａｐｒｅｄｉｃｔｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔａｎｄｒｏｎｏｓｉｓｏｆｃｏｍｕｔｅｄｔｏｍｏｒａｈｄｅｔｅｃｔｅｄｌｕｎｃａｎｃｅｒＪ．ｐｐｇｐｇｐｙｇ［］－ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２０１１．１０８９：３７１３８．（）６ＣｈｅｎＸＨｕＺ，ＷａｎＷ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｅｎｓｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡｓｆｒｏｍａ［］，ｇ－ｆｅｎｏｍｅｗｉｄｅｓｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｒｏｉｌｅａｓｎｏｖｅｌｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｇｐｐｆｏｒ－ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｕｎｃａｎｃｅｒｄｉａｓｉｓＪ．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ２０１２１３０７１６２０８ｌｇｇｎｏ［］．．（）：．７ＲｅｉｄＧＫｉｒｓｃｈｎｅｒＭＢｖａｎＺａｎｄｗｉｋＮ．ＣｉｒｃｕｌａｔｉｎｍｉｃｒｏＲＮＡｓ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［］，？ｊｇｗｉｔｈｄｉｓｅａｓｅａｎｄｐｏｔｅｎｔｉａｌｕｓｅａｓｂｉｏｍａｒｋｅｒｓＪ．ＣｒｉｔＲｅｖＯｎｃｏｌＨｅｍａｔｏｌ．２０１１．８０２）：［］（－２０８１９３．［８］ＺｈａｎｇＬＦ？ＪｉａｎｇＳ，ＬｉｕＭＦ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃａｎｃｅｒ－ｃｅｌｌｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＣｅｌｌＭｏｌＬｉｆｅＳｃｉ．２０１７．７４１６：２９２９２９４１．（）［９］ＬｉｎＰＹ，ＹｕＳＬ，ＹａｎｇＰＣ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢｒＪＣａｎｃｅｒ．２０１０．１０３（８）：－１１４４８．１０ＧａｏＧｌｉＡ－１４ＰＸｉｎＡＹＺｈｏｕＹｅｔａｌ．ＴｈｅｍｏｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｓｍｏｆｍｉｃｒｏＲＮ５［］，ｇ，，－ｍｅｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｖａｓｉｏｎｔａｓｔａｓｉｓｃａｓｃａｄｅｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＪ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ［］，２０１３３２４４９１－１：５０．，（）２０ Ｍ－血清中的表达及临床意义ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者ＣｈｔｌｈａｔｉｏｎｉｌｉｅｎＸＢａＹ，ＭａＬｅａ．ＣｒａｃｔｅｒｉｚａｏｆｍｃｒｏＲＮＡｓｉｎｓｅｒｕｍ：狂ｎｏｖｅｐ］，，ｃｌａｓｓｏｆｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒａｎｄｏｔｈｅｒｄｉｓｅａｓｅｓＪ．ＣｅｌｌＲｅｓ．２００８．［］０－００６１８１：９９７１．（）１２ＭｉｔｃｈｅｌｌＰＳＰａｒｋｉｎＲＫＫｒｏｈＥＭｅｔａｌ．ＣｉｒｃｕｌａｔｉｎｇｍｉｃｒｏＲＮＡｓａｓｓｔａｂｌｅ［］ｓ，，－ｓｅａｒｅｒｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｅｔｅｃＪＰｒｏｃＮａｂｌｏｏｄｂａｄｍｋｄｔｉｏｎ．ｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ．２００８．［］－１０５３０：１０５１３８．（）１３ＪａｆｒＭＡＡｌ－ａｔａｎｉＭＨＳｈａＪＷＲｏｌｅｏＲＮＡｓｉｎｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｉｈ．ｆｍｉｃｒｏ［］，Ｑ，ｙｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｔｉｌ．：Ｉｍｐｌｉｃａｔｏｎｓｆｏｒｔｈｅｒａｐｅｕｃｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ＾．ＳｅｍｉｎＣａｎｃｅｒＢｉｏ．２０１７］４４－６）：１１７１３１．（１４ＣｈｏＷＣ．ＲｏｌｅｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＪ．ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＭｏｌＤｉａｇｎ．２００９．［］［］－９８７７３．）：６（１５ＣｈｏＷＣ．ＯｎｃｏｍｉＲｓ：ｔｈｅｄｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｒｏｒｅｓｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｃａｎｃｅｒｓＪ．［］ｐｇ［］００７９６０ＭｏｌＣａｎｃｅｒ．２．：６．（）１６ＫａｎｚａｋｉＨＩｔｏＳＨａｎａｆｕｓａＨｅｔａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｒｅｃｔｔａｒｅｔｓｆｏｒｔｈｅ，，，［］ｇｍＲ－－ｉｓ－ｉ１７９２ｃｌｕｓｔｅｒｂｙｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｓＪ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．２０１１．１１１７：３５３１９．ｐｙ［］（）ＰＹＬＮ－１７ａｒｋＳｅｅＪＨＨａＭａｍＪＷＫｉｍＶＮ．ｍｉＲ２９ｍｉｃｒｏＲＮＡｓａｃｔｉｖａｔｅ５３ｂ［］，，，？ｐｙ－ｔａｒｅｔｉｎ８５ａｌｈａａｎｄＣＤＣ４２Ｊ．ＮａｔＳｔｒｕｃｔＭｏｌＢｉｏｌ２．１１２３ｇ．００９６：９．ｇｐｐ［］（）ＰＡＫＫＳ－１８ａａｉａｎｎａｋｏｏｕｌｏｓＴＳｈａｉｒｏｏｓｉｋ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ２１ｔａｒｅｔｓａｎｅｔｗｏｒｋｏｆｐｇｐ，ｐ，［］ｇｔ－ｋｅｕｍｏｒｓｕｒｅｓｓｉｖｅａｔｈｗａｓｉｎｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａｃｅｌｌｓＪ２６８ｙｐｐｐｙｇ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．００８．１９：［］（）８１６４－７２．－－１９ＺｈｕＸＬｉＨＬｏｎＬｅｔａｌ．ｍｉＲ１２６ｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｏｆｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌ［］，，ｇ，ｙｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｏａｎｔｉｃａｎｃｅｒａｇｅｎｔｓｂｙｔａｒｇｅｔｉｎｇｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒＡＪ－．ＡｃｔａＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｓＳｉｎＳｈａｎａｉ２０１２．４４６；５１２６ｐｈｙｇｈ．（９．［］（））［２０］ＤｏｅｄｅｎｓＡＬ，ＳｔｏｃｋｍａｎｎＣ，ＲｕｂｉｎｓｔｅｉｎＭＰ，ｅｔａｌ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｏｘ－－－ｈｙｐｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ１ａｌｐｈａｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＴｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｔｕｍｏｒ－ｒｏｒｅｓｓｉｏｎＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０１９６５．ｐｇ．．７０：７４７５［］（）ｉＣｈｅｎＸＢａＹＭａＬｅｔａｌ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｓｅｒｕｍ：ａｎｏｖｅｌｐ］，，，ｃｌａｓｓｏｆｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｃａｎｃｅｒａｎｄｏｔｈｅｒｄｉｓｅａｓｅｓＪ．ＣｅｌｌＲｅｓ．２００８．［］２１ 硕士学位论文－１８１０９９７１００６：．）２２ＨｕＺＣｈｅｎＸＺｈａｏＹｅｔａｌ．ＳｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎａｔｕｒｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｉｎａ［］５，，ｇ－ｅｎｏｍｅｗｉｄｅｓｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｒｏｆｉｌｉｎｇｒｅｄｉｃｔｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｇｐｐｐ－－－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｕｎｃａｎｃｅｒＪ．Ｊｌｉｎｎｃｏｌ１ｎｏｎｌｇ［］ＣＯ．２０１０．２８１０：７２１６．（）［２３］ＺｈｕＷ，ＬｉｕＸｓＨｅＪ５ＣｈｅｎＤ，ＨｕｎａｇＹＺｈａｎＹＫ．Ｏｖｅｒｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｅｍｂｅｒｓ，ｇｐｏｆｔｅｍｃｒｏＲＮＡ－１８３ｆａｍｉｌｓａｓｆａｃｔｏｒｆｏｒ１皿ｃａｎｃｅｒａｃａｓｅｃｏｎｏｌｓｔｕｄＪ．ｈｉｙｉｒｉｋｇ：ｔｒｙ］［ＢＭＣＣａｎｃｅｒ．２０１１．１１：３９３．２４ＨａｍｏｒｄＪＳｔａｎｅｌａｎｄＭＨｕｅｓＴｅｔａｌＤｉｆｆｅｒｅｎｔａｌｅｘｒｅｓｓｏｎｏｆｍＲＮＡｓＡ．ｉｉｉ［］＾，ｇ，ｇｈ，ｐｉｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒ：ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆａｉｒｅｄｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅａｎｄａｄａｃｅｎｔｎｏｒｍａｌｍｕｃｏｓａｐｊｕｓ－ｕｔｉｎｇｈｉｇｈｔｈｒｏｕｇｈｐｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＰＬｏＳＯｎｅ．２０１２．７４：ｅ３４１５０．（）ＺｈＭＸｕＳＷ－２５ＹａｎＲＭａｎｅｔａｌ．ｍｉＲ３６５６ｅｘｒｅｓｓｉｏｎｅｎｈａｎｃｅｓｔｈｅ］，，［ｇ，ｐｃｈｅｍｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｔｏｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅｔｈｒｏｕｇｈｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＲＨＯＦ／ＥＭＴａｘｉｓ．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｓ．２０１７．８１０）：ｅ３１２９．（Ｖ５Ｖｏｏｄｅｒ＿２６ｓａＵＴＫｏｌｄｅＲｅｔａｌ．ＭｅｔａａｎａｌｓｉｓｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｌｕｎｇ［］，，，ｙｐ－ｃａｎｃｅｒＪ．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ２０１３１３２１２：２８８４２８９３．［］，，（）Ｐ７ＣｕｉＥＨＬｉＨＪＨｕａＦ，ｅｔａｌ．ＳｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡ１２５ｂａｓａｄｉａｎｏｓｔｉｃｏｒｒｏｎｏｓｔｉｃ］，，ｇｐｇｂｉｏｍａｋｅｒｆｏｒａｄｖａｎｃｅｄＮＳＣＬＣａｔｉｅｎｔｓｒｅｃｅｉｖｉｎｃｉｓｌａｔｉｎ－ｂａｓｈｅｍｏｔｈｅｒａＪｒｐｇｐｅｄｃｐｙ．［］Ａｔ－ｃａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎ２０１３３４２）：３０９３１３．，，（［２８］ＳｏｌｏｍｉｄｅｓＣＣ５ＥｖａｎｓＢＪＳＮａｖｅｎｏｔＪＭ，ＶａｄｉｇｅｐａｌｌｉＲ，ＰｅｉｐｅｒＳＣ，ＷａｎｇＺＸ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｒｏｆｉｌｉｎｇｉｎｌｕｎｃａｎｃｅｒｒｅｖｅａｌｓｎｅｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｄｉａｎｏｓｉｓｒＪ．ｐｇｇ［］Ａｔｔ－ｃａＣｏｌ２０１２５６６：６４５５４．ｙ，，（）［２９］ＴａｎｇＤ，ＳｈｅｎＹ，ＷａｎｇＭ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍａｍｉｃｒｏＲＮＡｓ￡ｉｓｎｏｖｅｌｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｅａｒｌｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒ－Ｐｒｅｖ２０１３２２６４０．：５５４８，，（）［３０］ＷａｎｇＰ，ＹａｎｇＤ，ＺｈａｎｇＨｓｅｔａｌ．ＥａｒｌｙＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｕｎｇＣａｎｃｅｒｉｎＳｅｒｕｍｂｙａＰａｎｅ－ｌｏｆＭｉｃｒｏＲＮＡＢｉｏｍａｒｋＪｌｉｎＬｕｎａｎｃｅｒ２０１５１４３３１９ｅｌ．ｅｒｓ［］．ＣｇＣ，，６（）：３１．３１］ＶｏｏｒｔｍａｎＪＧｏｔｏＡＭｅｎｄｉｂｏｕｒｅＪｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌ［，，，ｐｏｕｔｃｏｍｅｓｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈａｄｊｕｖａｎｔｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙａｆｔｅｒｃｏｍｐｌｅｔｅｒｅｓｅｃｔｉｏｎｏｆ２２ ＭｉｃｒｏＲＮＡ－３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义ｎｏｎ－ｓｍａ－ｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａｒＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０７０２１：８２８８８２９８．［］，，（）３２Ｚｈａｏ－ＷＺｈａｏＪＪＺｈａｎＬｅｔａｌ．ＳｅｒｕｍｍｉＲ２１ｌｅｖｅｌ；ａｏｅｎｔｉａｌｄｉａｔｉｃａｎｄ［５ｔｓ］，，ｇｐｇｎｏ－ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｂｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｒＪ．ＩｎｔＪＣｌｉｎＥｘＭｅｄ２０１５［］ｐ，，８９４７－（：１５９６３．）３３ＺｈａｎＳｈｅｎ－－－－ＨＭａｏＦＴｅｔａｌ．ＰｌａｓｍａｍｉＲ１４５ｍｉＲ２０ａｍｉＲ２１ｍｄｍｉＲ２２３［］，，，ｇ，，ａｓｎｏｖｅｏｍａｒｋｅｅａｒ－ｔａｅｎｏ－ｓｃｅｎｃｅｃｏｌｂｉｒｓｆｏｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｌｓｎｍａｌｌｌｌｌｕｎｃａｒｒＪ，Ｏａｌｙｇｇ［］１１６６９－６７６Ｌｅｔ２０７３２．：，，（）２３ 硕士学位论文综述外周血ｍｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌一，摘要：肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之因其高发病率、高病死率严重危ｉｃ害着人们的健康，目前亟待需要更好地了解这种疾病来指导临床。而ｍｒｏＲＮＡＲＮＡ是内源性的具有调控功能的非编码，通过对细胞中多种信号通路的调节影响细胞增殖、凋亡等过程，其表达异常会导致包括癌症在内的很多疾病，具有类似。原癌基因和抑癌基因的作用，它与肺癌的发生发展亦有着密切的关系本文主要综述ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌中发挥致癌或抑癌作用的最新机制及研究成果，为肺癌的诊断、治疗及预后判断提供新的思路。关键词：ＭｉｃｒｏＲＮＡ；肺癌；诊断；治疗；预后中图分类号：Ｒ７３４．２文献标识码：ＡＰｅｒｉｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＭｉｃｒｏＲＮＡａｎｄＬｕｎＣａｎｃｅｒｐｇＡｂｓｔｒａｃｔ：Ｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｔｅｓｏｆｍａｌｉｎａｎｃｉｎｔｈｅｙｐｇｙ＇ｉｌｏｕｒｃｏｕｎｔｒ．Ｂｅｃａｕｓｅｏｆｉｔｓｈｉｈｉｎｃｉｄｅｎｃｅｈｉｈｍｏｒｔａｌｔｓｅｒｉｏｕｓｌｅｎｄａｎｅｒｅｏｅｓｙｇ，ｇｙｙｇｐｐｈｅａｌｔｈ，ｂｅｔｔｅｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｉｓｗａｒｒａｎｔｅｄｆｏｒｇｕｉｄｉｎｇｉｎｃｌｉｎｉｃａｌ－ｍａｎａｅｍｅｎｔ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｉｓｅｎｄｏｅｎｏｕｓｎｏｎｃｏｄｉｎｇＲＮＡｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｔｇｇ，ｈａｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｓｉｇｎａｌｉｎｇｐａｔｈｗａｙｓｉｎｃｅｌｌ，ｉｔｓｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｍｌｅａｄｔｏｍａｎｙｄｉｓｅａｓｅｓ，ｔ－ｔｉｎｃｌｕｄｉｎｃａｎｃｅｒｗｉｔｈｓｉｍｉｌａｒｒｏｏｏｎｃｏｅｎｅｓａｎｄｕｍｏｒｓｕｒｅｓｓｏｒｅｎｅｓｉｔａｌｓｏｇ，ｐｇｐｐｇ，ｈａｓａｃｌｏｓｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈｔｈｅｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．ＨｅｒｅｉｓｔｏｍａｋｅａｒｅｖｉｅｗｐｏｆｔｈｅｌａｔｅｓｔｍｅｃｈａｎｉｓｍａｎｄｒｅｓｅａｒｃｈｒｅｓｕｌｔｓｏｆｓｏｍｅｍｉｃｒｏＲＮＡｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ，ｐｒｏｖｉｄｉｎｇｎｅｗｉｄｅａｓｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｔｒｅａｔｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ．Ｋｅｗｏｒｄｓ：ＭｉｃｒｏＲＮＡ；ＬｕｎＣａｎｃｅｒＤｉａｇｎｏｓｉｓ；Ｔｈｅｒａｉｅｓ；Ｐｒｏｎｏｓｉｓｙｇ；ｐｇ２４？－ ＭｏＲＮＡ－ｉｃｒ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ概述人类基因组包括２０８０５个蛋白质编码基因和３７１４７个非编码基因及假基因，１［］通过ＲＮＡ加工与编辑可形成１９６５０１个基因转录本，由此可知ＲＮＡ在人类基因组中扮演着重要角色。其中微小ＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ），分子长度很短，是由较长的发夹前体转录产物而加工产生，而逐，因其种类多、作用广渐被人们所认识。一ｍｉｃｒｏＲＮＡ广泛存在于真核生物中，是类内源性的具有调控功能的非编码ＲＮＡ，２［］广泛分布于人类的组织细胞内、循环和其他体液中。Ｍｉｔｃｈｅｌｌ等中首先报道ｍｉｃｒｏＲＮＡ存在于外周血中，血液中的ｍｉｃｒｏＲＮＡ通常包裹于外核体、微粒和凋ＨＤＬ－，ｍｉｃｒｏＲＮＡ存在于脂蛋白等复合物ｍｉＲＮＡ、亡小体参与囊内运输，部分（如３［］Ａｇ〇２／ｉｄＲＮＡ）中参与囊外运输。虽然血液中存在大量的核糖核酸酶，但是外％周血中ｍｉｃｒｏＲＮＡ相当稳定。Ｚｈａｎｇ等人通过不同的极端条件（如高温、延长保存期、反复冻融等）处理ｍｉｃｒｏＲＮＡ，发现其稳定性并没有明显改变，表明，ｍｉｃｒｏＲＮＡ具有很强的抗ＲＮａｓｅＡ水解能力，其稳定性有助于功能的发挥。５［］而ｍｉｃｒｏＲＮＡ的生物合成，通常是从细胞核内ＲＮＡ聚合酶ＩＩ转录开始，ｒｉ－ｍｉＲＮＡＲＮＡ聚合酶Ｉ切生成发卡结构然后形成转录产物ｐ，再在ＩＩ作用下剪－－５ｍｉＲＮＡ，ｐｅｒ，细胞核内的ｐｅｒｍｉＲＮＡ经输出蛋白输送至细胞质。在细胞质中＿－ｍｉＲＮＡ被ＲＮａｓｅＩＩＩＤ２５ｎｔｐｅｒ内切酶ｉｃｅｒ切割成长度约１８的非完全配对的双链结构一ｏｎａｕｔＮＡ。其中条链被Ａｒｇ蛋白选择性地结合形成Ｒ诱导沉默复合体一（ＲＩＳＣ）而发挥其生物学效应，而互补ｍｉｃｒｏＲＮＡ链被降解，ｍｉｃｒｏＲＮＡ。方面’ＲＮ一通过不完全互补配对的方式与靶ｍＡ的３非编码区结合抑制靶基因翻译；另方面，其通过与靶基因完全互补配对，引起靶基因在互补区特异性断裂，从而降解靶基因ｍＲＮＡ而发挥功能。ｍｉｃｒｏＲＮＡ的重要性突出表现在：它可同时调节多个基因或参与多条途径从而影响整个生物过程网络而发挥其独特功能。自从首次报道癌症中有ｍｉｃｒｏＲＮＡ异常表达以来，ｍｉｃｒｏＲＮＡ就被认为是肿瘤发病机制的关键调控因子，，也是新型临床干预的标志物。众所周知随着我国工业化速度加快、环境污染逐渐加重、人口老龄化结构日趋明显，肺癌的发病率、病死率均呈２５ 硕士学位论文上升态势。目前，在男性患者中肺癌的发病率及病死率位居所有恶性肿瘤之首，一在女性中，死亡率居第，发病率居第二位（低于乳腺癌）位，严重危害着人们一一旦确诊大部分己是处于中晚期的健康。然而，，由于肺癌早期般无明显症状，肺癌患者预后很差。因此，寻找早期诊断和早期治疗的方法和手段迫在眉睫。而通过生物分子方面的研宄以寻找更有效的早期诊断方法，靶向治疗肺癌，＿是目前国内外的研宄热点一ｃｒｏＲＮＡ生物标志物可用于肺癌的早。近年来些研究显示ｍｉ６７’］［期诊断及治疗，对于提高肺癌患者生存率具有重要意义。在下文中，我们将总结概括ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌领域发挥的作用，以及它在临床应用中的潜力。２．ＭｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌的发生发展一目前肺癌仍是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之，大多数患者发病时已是疾病的中晚期，５年生存率极低。而肺癌是机体在各种致瘤因子的作用下，局部组织细胞在基因水平上失去了对其生长的调控，导致单克隆性异常增生而形成的新生物，肿瘤的转移、侵袭与复发是肿瘤患者预后不佳的重要因素。近几年８９［’］ＲＮＡ－来，国内外研宄表明ｍｉｃｒｏ与肺癌的发生、发展及转移密切相关。ＭｉｃｒｏＲＮＡ不仅调控着细胞增殖、分化和凋亡，血清ｒａｉｃｒｏＲＮＡ更是潜在的肿瘤分子标志物，在肿瘤的早期诊断、治疗、预后判断以及化疗耐药中都有良好的应“”用前景。ＭｉｃｒｏＲＮＡ通常位于染色体区域的脆弱点以及与肿瘤相关的基因区域，可通过调控相关靶基因的表达来影响细胞的增值、侵袭及转移等生物学行为３１（）［’］来参与肿瘤发生发展的过程。２．１ＭｉｃｒｏＲＮＡ基因在肺癌中的致癌作用一在肿瘤中呈高表达的ｍｉｃｒｏＲＮＡ基因般被认为是癌基因，他们通过抑制抑癌基因的活性，促进肿瘤细胞增殖、抑制凋亡，从而促进肿瘤疾病的发生发展。－ｍ？ｉＲ１７９２ｉＲＮＡ多顺反子的簇，是ｍｃｒｏ中具有原癌基因作用的代表，由位于１３ｑ３１．３的基因编码，其在多种类型的恶性肿瘤中高表达，并在多种恶性肿瘤中出现扩增，包括肺癌、弥漫大Ｂ细胞淋巴瘤、滤泡型淋巴瘤、Ｒｕｒｋｉｔｔ淋巴瘤等。Ｔａｋａｈａｓｈｉ团队首次发现了ｍｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌的关系，他们的研宄显示在肺癌２６ ＭｒｏＲＮＡ－血清中的表达及临床意义ｉｃ３６５６在肺癌患者ｒａ＿￣ｉ－ｉＲ１７９２Ｒ１７细胞中，簇显著过度表达，并且其可促进肺癌细胞增殖生长。Ｍ？９２Ｅ２ＦＭＹＣＳＣＬＣ的表达受到家族成员和的反式激活作用，后者在小细胞肺癌（）Ｆ－ｌｉＲ－１７？９２中常过表达。ＨＩａ是肺癌中ｍ的直接靶点。这种关系部分解释了ＣＩＦ－ｌＭＹ可下调Ｈａ的作用。在肺癌细胞背景下，这种调节在常氧条件下影响细１２［］－？胞增殖而不影响细胞对缺氧的适应。另外有研宄显示ｍｉＲ１７９２可通过下调ＲＡＢ１４从而阻止肺部对外部致癌物的作用，从而导致癌症的发生和发展。一ｍｉＲ－２１７基因定位于１号染色体，是癌症类型中研宄较多的种。早期有ｃ－人对ｍｉｒｏＲＮＡ分析研究发现ｍｉＲ２１在包括肺癌在内的所有六种类型的实体瘤１３［］ＨａｔｍｉＲ－２中上调。ｌｅｙ等人基于小鼠模型的研究清楚地证实了１在肺癌中的ｉＲ－２ＧＦＲ－ＥＧＦＲＥＧＦＲ酪致癌性。Ｍｌ７Ｋ平与磷酸化Ｅ（ｐ）水平相关，并被氨酸激酶ＥＧＦＲ－ＴＫ－－抑制剂Ｉ）抑制，ｉＲ２１ＥＧＦＲＴＫＩＰＴＥＮ（反义ｍ增强诱导的细胞凋亡。－－２肿瘤抑制基因（ＴＳＧ）被确定为ｍｉＲ２１的直接靶点，而ｍｉＲ１抑制该靶点可促－ｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＮ？进非小细胞肺癌（ｎ，ＳＣＬＣ）的细胞生长和侵袭。ＤＭｉａｎ一ｉＲ－２４ｍＪｇ等人的研究进步证实ｍ１可阻止程序性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｎｔｈ４，ＰＤＣＤ４）的表达而激ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴ０Ｒ通道，促进ＮＳＣＬＣ的生长。另外ＷａｎｇｍｉＲ－５７５，等研宄了的表达水平和非小细胞肺癌的相关性。ｍ－ｉＲ５７５在非小细胞肺癌组织中表达上调，明显高于相邻的非肿瘤组织。在研究非小细胞肺癌细胞系中重新导入ｍｉＲ－５７５显著促进细胞增殖细胞迁，可，提高癌１６［］ＷａｎｍｉＲ－２７ａ移和侵袭的能力。ｇ〇等的研宄结果表明的过度表达可通过抑制原代人支气管上皮细胞的恶性转化的靶基因ＦＢＸＷ７来促进细胞生长。－Ｍ２２１／２２２Ｒ－４９等也可通过ｉＲ、ｍｉ抑制癌细胞凋亡而成为促癌基因。总之，ｍｉｃｒｏＲＮＡ中有多种基因可通过影响细胞增殖、生长及凋亡等过程，从而有助于癌症的发生、发展。２．２ＭｉｃｒｏＲＮＡ基因在肺癌中的抑癌作用研宄发现大约有３０种ｍｉｃｒｏＲＮＡ与恶性肿瘤的发生发展及形成相关，其既－有促进作用也有抑制作用。作为ｍｃｒｏＲＮＡ，ｌｅｔ７ｉ中的抑癌基因的功能首先在２７ 硕士学位论文１７［］ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ中的ｌｅｔ７以线虫为对象的研宄发现，家族的序列和功能在物种－－－＿，３ｔ７ａ７ａ２７ａ３７ｂ７ｃ间保存得很好。在人类中有１个成员，包括：ｌｅｌ，，，，，７ｄ－－－－，７ｅ，７ｆｌ７ｆ２７ｇ，７ｉｍｉＲ９８２０２，，，，和ｍｉＲ可以负调控细胞周期进程和终末细胞分化ｅｔ－７家族成员起抑制。在肺癌的研宄中证实，在肿瘤发展过程中ｌ－作用，ｅｔ７，与邻近的正常肺组织相比较在肺癌组织中，ｌ家族表达明显下调，１８１９［’］患者总生存期减少ｌｅｔ－７可通过靶向ＬＩＮ２８Ｂ。近两年的数据显示或者联合ｍ－ｉＲ３４协同抑制非小细胞肺癌细胞增殖来抑制肿瘤的发生与生长。一ｅｔ－７ｉＲＮＡ之ｍｉＲ－３４／４４９与ｌ成为最早研究的ｍ相比，家族仅在近几年才一－３４ａ－３４ｂ／ｃ一个ｍ受到关注。ＭｉＲ和ｍｉＲ是同源的并属于同家族。另ｉＲＮＡ家Ｒ－４４９ａ４４９ｃ一ｉＲ－ｉＲ－３４，ｍｉ％和４４４４９ｍ族后来发现，起缩写为ｍ，与具有相同一－－的种子序列和二级结构，因此被指定为ｍｉＲ３４家族的部分ｉＲ３４／４４９与。Ｍ３Ｅ２ＦＰ５Ｒ－－４４９ｐ５和转录因子形成反馈网络。３激活ｍｉ３４，而Ｅ２Ｆ激活ｍｉＲ。两一种ｍｉＲＮＡ都直接抑制Ｅ２Ｆ，但是通过祀向去乙酰化酶基因ＳＩＲＴ１来上调ｐ５３。些报道已经将ｍ－３４ｉＲ－ｉＲ与肺癌联系起来。在ｍ３４和ｐ５３的早期文献中，研宄人２（＞［］６／１４ＣＬＣ－ｉＲ－员发现（４３％）的ＮＳ样本中ｍｉＲ３４ｂ／ｃ的表达显着降低，ｍ３４的恢复抑制了肺癌细胞的生长，暴露于化学致癌物（尼古丁衍生的亚硝胺酮－－（ＮＮＫ））ｉＲ３４ｉＲ４或香烟烟雾的大鼠肺中发现ｍ的表达显着降低，与ｍ３的肿瘤一－Ｒ－抑制作用致。ＭｉＲ３４ａ和ｍｉ１５／１６以ＲＢ依赖的方式在ＮＳＣＬＣ细胞中协同诱导细胞周期停滞ｉＲ－４４９。肺组织是ｍ优先表达的位点（其他位点是睾丸）。但关２１一［］ｉＲ－４４９和于ｍ肺癌的文献是有限的。项研宄发现与相应的正常组织相比＾ｉＲ－４４９ａ／ｂ的表达降低－肺癌组织中ｍ，ＨＤＡＣ１被认为是ｍｉＲ４４９ａ／ｂ在肺癌细胞中的靶点－４４９ａ／ｂ。Ｒ的异位表达降低了多种肺癌细胞系中的细胞活力和Ｈ２９９ｉ－ｉＲ－４４９ｂ１细胞的锚定非依赖性生长。ｍＲ４４９ａ或ｍ与ＨＤＡＣ１抑制剂的组合一处理更强的生长抑制ｍｉＲ－引起比抑制剂单。所有这些结果证实３４／４４９，家族在肺癌中起着肿瘤抑制剂的作用。２８ ＭｒｏＲＮＡ－血清中的表达及临床意义ｉｃ３６５６在肺癌患者Ｍ－ＰＴＥＮｉＲ１２５ｂＴＰＭ１和ＰＤＣＤ。在肺癌中调节多种肿瘤抑制基因，包括，，２２［］－ｂＺｈａｎＲ－２５ｂＭｉＲ１２５基因经常被删除，ｇ等的研究表明在肺癌中，通过上调ｍｉ１一－的表达可减慢化疗所产生的抵抗，这间接表明了ｍｉＲ１２５Ｂ有定的抑癌作用人－ｉＲ－１２５Ｍ１－类。ｍ１３的表达可能通过抑制抗凋亡分子ｃｌ或Ｂｃｌｗ而诱导来源于肺ｉＲ－１癌的各种细胞系和致敏的癌细胞对不同凋亡刺激的自发性凋亡，表明ｍ２５ｂ２３］［的上调可抑制肿瘤的发展。在ＮＳＣＬＣ组织和具有较高转移潜能的肺癌细胞中２４２５［］［］ｉＲ－１２５－３ｉ报道了ｍａｐ的表达降低。Ｊａｎｇ等人通过损失和功能获得实验－２５ａ－Ｍ－证实了ｍｉＲ１３ｐ在抑制肺癌侵袭和转移中的作用。ｉＲ１８３家族成员Ｒ－１８３ｉＲ－－（ｍｉ，ｍ１８２和ｍｉＲ９６）从染色体７上的基因间区域共表达，它们具有共同的和独特的靶标，所有这三个成员抑制调节癌症中锌稳态的锌转运蛋白，２６［］ｍｉＲ－１８３ＥＺＲＩＮａｎ被证明能够通过靶向抑制肺肿瘤的侵袭和转移，而ｚｈｇ等２７［］Ｒ－人的研宄显示ｍｉ１８３可促进非小细胞肺癌的生长，但是其具体作用机制及家族其他成员的作用尚未完全明确ｉｃｒｏＲＮＡ，。因此ｍ中抑癌基因的作用非常复一杂，尚需进步的实验来证实。２．３ｍｉｃｒｏＲＮＡ调节肺癌血管的形成随着肿瘤的增长，瘤体中心与原血管之间的距离变得越来越大，其中心易出现缺氧ＩＦ－。缺氧是肿瘤发生的主要标志，它调节着缺氧诱导因子１（Ｈ１）的活－－性，而ＨＩＦ１ａ诱导血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）和血小板衍生生长因子（ＰＤＧＦ）等不同血管生长因子的表达，作用于各自的受体，促进新的毛细血管形成。越来越多的证据表明ｉｃｒｏＲＮＡ是肺癌血管生成以及缺氧反应的重要调节，ｍＥＧＦｍｒｏＲＮＡ的－因子ｉｃ。在ＮＳＣＬＣ细胞中ｍｉＲ１２６。Ｖ就在肺癌中的表达受多种调控ＶＥＧＦ－ＡＲ－２６ａ的表达直接导致下调表达则通过未知的机制导致其上调，，而ｍｉ５４９２－从而影响肿瘤中新生血管的形成，在Ａ细胞中ＶＥＧＦＲ直接受ｍｉＲ２００ｃ的调２８［］－－－控。另有研宄显示ｍｉＲ５１９ｃ的过表达会导致ＨＩＦ１ａ的显着降低和肺癌血２９［］管生成的减少。２９ 硕士学位论文此外，在肺癌血管生成过程中还受成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）和白细胞介－－ＮＡＦＧＦ素８（ＩＬ８）等细胞因子的作用，而这些细胞因子又受ｍｉｃｒｏＲ的调节。ＦＧＦ受体ＮＳＣＬＣ肿瘤增殖有四种，这些配体包括在和血管生成中起重要作用的碱性ＦＧＦ（ｂＦＧＦ和ＦＧＦ２）。在具有可检测的淋巴结转移的患者的肺肿瘤组织中，ＦＧＦ３０［］－－似乎被ｍｉＲ１５５特异性调节。同样，在ＮＳＣＬＣ患者的肿瘤样本中，通过ｍｉＲ２００－－２００的调控ＩＬ８水平通常也会升高，而且ｍｉＲ也可以靶向肿瘤的内皮细胞和生ＣＸＣＬ－长调节蛋白（１）细胞，影响肺癌血管的生长。实际上，人们可通过将ｍｉＲ２００递送到肺癌内皮细胞，抑制肿瘤的转移或者减少血管生成以及血管正常化而达到３１［］－－。ｉＲ３７８ＩＬ８，抗肿瘤的目的相反，ｍ的过度表达增强了的表达因此增加了３２［］进细胞生长ＮＳＣＬＣ患者内皮细胞的刺激。还有其他与血管生成有关的蛋，促ＲＮＡ－３８ＲＮＡ白质也受到ｍｉ的调控，例如，异常表达的ｍｉＲ１可在ｍ和蛋白质水平均减低干细胞基因ＩＤ１（分化抑制剂１）的表达，其参与肿瘤侵袭和血管生成，３３［］并因此显着降低肺癌细胞的迁移和侵袭能力。ｉＲＮＡ亦，大量研宄表明，异常表达的ｍｃｒｏ与肺癌转移密切相关但是具体机－－制还未完全明确。研宄者们利用ｍｉＲＮＡＰＣＲ基因芯片筛选出ｍｉＲ２９ｂ在ＣＤ１３３阳性肺癌患者Ａ５４９细胞中表达明显下调，通过生物信息学预测其靶基因并进行ｍｉＲ－２９ｂ１０６，，分析，结果表明的靶基因有个与细胞外基质形成有关参与与肿一瘤相关的信号传导ｉＲ－２９ｂ，证明ｍ可能与肺癌的转移有关。最新的项研宄提示３４［］ｉＲ－２００－－－１８２Ｆｏｘｆ２ｍ家族和ｍｉＲ１８３９６集群通过靶向作用于抑制肺癌的侵袭与转移。因此，ｍｉｃｒｏＲＮＡ不但可以发挥癌基因和抑癌基因的直接作用，还能通过调节肺癌血管的生成、影响肺癌的转移等而发挥作用。３．ＭｉｃｒｏＲＮＡ在肺癌中的临床运用ｍｉｃｒｏＲＮＡ，癌基因与肺癌发生、发展的交织网络暗示ｍｉｃｒｏＲＮＡ参与着肺ｉＲＮＡ，癌发病机制的多方面，靶向ｍｃｒｏ是用于干预肺癌的新方法包括诊断、风险评估，结果预测或治疗。３．１ＭｉｃｒｏＲＮＡ用于肺癌的诊断３０ Ｍ－血清中的表达及临床意义ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者早期诊断是肺癌治疗的关键。癌胚抗原、糖类抗原（ＣＡ１２５、ＣＡ１９９）、蛋白ＳＥＣｆｒａ２１－１和酶类（Ｎ、ｙ等）是肺癌诊断的常用肿瘤标志物，但其敏感性和特异性均不高一，发现新的用于早期诊断的标志物十分重要。近年来有项新的检测技术：液体活检问世，其为肺癌的精准诊断带来了新的希望。这项新技术主要通过检测体液［如外周血（最主要的）、尿液、唾液等］中来源于肿瘤的循环肿瘤抗体谱、微小核糖核酸（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）、循环肿瘤ＤＮＡ（ｃｔＤＮＡ）、循环肿瘤细胞（ＣＴＣｓ）一和外泌体等生物标志物来反应与肺癌有关的情况，为肺癌的早期诊断提供种无创、简洁ｉｃｒｏＲＮＡ和外泌体中的、快速的手段。其中液体活检的主要项目就是ｍｍｉｃｒｏＲＮＡｏｍ一外周血ｉｃｒｏＲＮＡ与肿瘤组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ具有定的相关性，多数异常表达的３５［］研宄发现ｍ－１５５ｍｉｃｒｏＲＮＡ在组织和外周血中有相同的改变趋势。Ｌａｗｒｉｅ等ｉｒ在淋巴瘤患者的肿瘤细胞和外周血中的表达水平同时升高。肿瘤组织和外周血中一ｍｉｃｒｏＲＮＡ表达致性使外周血ｍｉｃｒｏＲＮＡ成为潜在的肿瘤标记物提供依据。外周＾血ｍｉｃｒｏＲＮＡ非常稳定，能够抵抗核糖核酸酶的降解，且在体内生存期长，经室温过夜、煮沸、反复冻融、过酸处理，仍十分稳定。因此，人们可以通过抽取外周血获得血清或血楽检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ。因此，通过液体活检检测外周血中ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达将可能成为诊断肺癌的重要肿瘤标志物，并且比传统的病理活检手段更具３６［］ｓａ通－２１－２－－有优势。Ｖｏ过研究发现在肺癌组织中，ｍｉＲｍｉＲ１０ｍｉＲ１８２ｍｉＲ３１，，，，－－－－－－－ｍ２０５１８３Ｒ１２３ｉＲ３０ａＲ３０ｄｉＲ－４８６５ｉＲｍｉＲ，ｍｉ６ｍｒｏｉｍ，表达上调ｐ，，，ｐ，－－－－ｍ－。ｉＲ４５１ａｍｉＲ１２６５ｍｉＲ１４３ｍｉＲ］４５表达下，Ｃｕｉ等，，ｐ，，调另外研究发现ｍｉｒ－１２５ｂ其表达水平的升高与肺癌患者的生存率的降低有关。而且，不同类型一ｃＲＮＡｍｉｒ－２０５的肺癌组织中的ｍｉｒｏ表达也不样在肺鳞癌中表达上调，－一ｍｉｒ２１在腺癌和鳞癌中表达上调。这些特异性的表达对肺癌的诊断具有定意义。目前检测ｍｉｃｒｏＲＮＡ的常用技术有实时焚光定量ＰＣＲ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法、Ｓａｎ原位杂交技术、基因芯片、电化学传感仪、ｇｅｒ测序、基因敲除和过表达等，３１ 硕士学位论文３９［］目前运用最多和最成熟的就是ＰＣＲ－ＰＣＲ分析６２名患者和６０。Ｔａｎｇ等使用ＱｍｃｒｏＲＮ－名健康吸烟者的训练集中选择并鉴定了三种异常血裝表达的ｉＡ（ｍｉＲ２１，－ｍ－ｉＲ－２ｍｉＲ１４５和ｉＲ１５５），以定义具有高诊断肺癌的效率。与健康对照相比，ｍ１和ｍ－ｉＲ－１４５ｉＲ１５５显示更高的血浆表达水平，而ｍ在恶性肿瘤患者中表达水平较低。而且结合检测这三种ｍｉｃｒｏＲＮＡ这有助于区分肺癌和健康吸烟者，灵敏度为４（＞［７８一］６９．４％，特异性为．３％。另项研究显示，与健康人相比，ｍ－－－－ｉｒ１２５ａ５ｐｎｉｉｒ２５１２６，和ｍｉｒ在肺癌患者血清中显著减低，联合检测这三种ｍｉｃｍＲＮＡ，能以８７、５％的灵敏度和特异性区分早期肺癌患者，但对于不同分期一，。值得提的是它们的表达水平相对于患者的年龄的肺癌患者无明显差异、性ｍ－－－－另丨Ｊ、吸烟状况是独立的，提示ｉｒ１２５ａ５ｐ，ｍｉｒ２５和ｍｉｒ１２６有可能成为肺癌早期诊断的新型无创性生物标志物。３．２ＭｉｃｒｏＲＮＡ用于肺癌的治疗随着免疫学、基因组学等学科的发展，探索有效治疗肺癌的新方法是目前基一心基因表达的调控因子础研宄领域的当务之急。ＭｉｃｒｏＲＮＡ作为类控制中，在肿瘤的发生发展中发挥着重要的作用，其可以调节蛋白的表达并且影响多种信息途径，ＭｉｃｒｏＲＮＡ作为生物治疗肿瘤的目标分子比基因编码更加有效。主要可利＇用ｍｉｃｒｏＲＮＡ的三种机制进行抗肿瘤治疗，１、减缓肿瘤的生长和播散：恢复肿瘤抑癌基因ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达；２、灭活原癌基因的致癌活性；３、通过调节ｍｉｃｒｏＲＮＡ的基因调控网络，恢复肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。一ｃｍＲＮ些具有抑癌基因功能的ｍｉＡ在肺癌患者中呈低表达或抑制，可以采用基因转染的方式导入并激活相应ｍｉｃｒｏＲＮＡ的表达，从而达到潜在的治疗作ｅ－用。例如在肺癌动物模型中引入合成的ｌｔ７可以减小瘤体大小，体外组织培养４１［］－－也证明在人的肺癌细胞中导入－７可以抑制细胞增殖ｉＲ９３ｍＲ９８ｌｅｔ。ｍ、ｉ、ｉ－１ＦＵＳ１的表ｍＲ９７通过下调抑癌基因达而起到抑制肺癌生长、发展的作用且与４２［］肺癌患者总体生存率密切相关。Ｌｉｕ等研宄表明，小鼠及人类肺癌中－－－－ｉｒ３４ｃｍｉｒ１４５ｒ１４２５ｐ，ｉｃｒｏＲＮＡ进ｍ，和ｍｉ表达受抑制采用每种ｍ行转染可３２ －ＭｉｃｒｏＫＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义以显著抑制肺癌细胞的生长，发挥抗肿瘤效应。ｍｉｃｒｏＲＮＡ具有较低的毒性，并’且能够“’多靶向，表明它们有潜力进入临床实践。一一方面通过增加ｍｉｃｒｏＲＮＡ中抑癌基因的表达，另方面则通过抑制或者减４３ｌＮＡ－少ｍｉｃｒｏＲ中致癌基因的表达，起到抗肺癌的作用。有研宄显示＼ｎｉＲ１４５可－ｍｙｃ－－以通过下调ｃ的表达来抑制肺癌细胞增殖，ｍｉＲｌｅｔ７ａ通过抑制ＫＲＡＳ和４４４５］］［［－ｍｙｃ的表达来抑制以裸鼠为模型的肺癌细胞的生长他邱ｃ。等研宄发现，－２ｍ－抑制ｍｉＲ１和ｉＲ２００ｂ的表达可增加肿瘤细胞对吉西他滨的敏感性，増强吉西他滨的抗癌作用ｉＲ－１４１，抑制ｍ的表达可降低细胞的生长速度。曾经有报道应用－ｉＲ－１７－９２１７－５ｍｉＲ－２０ａ基因反义核苷酸技术持续地抑制ｍ家族中的ｍｉＲｐ、，可一－－导致ｍｉＲ１７９２过表达的肺癌细胞凋亡，进步深入研宄ｍｉｃｒｏＲＮＡ中各种基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。一，对化疗或放射治疗的耐药性是当前肺癌治疗的个障碍另外。已经显示许多ｍｃｒｏＲＮＡ可，ｉｒｎａｉ改变肺癌细胞对不同药物或辖射的反应。研宄显示有些ｍＰｏ－Ｌｉｋ（ＰＬＫ可能影响肿瘤对化疗药物的敏感性，ｌｏｅ激酶１１）是高度保守的丝／苏氨酸激酶，有诱导ＤＮＡ合成、ＤＮＡ完整性检修和防止细胞凋亡方面的作用，研４６［］－００通过丝宄表明人类肺腺癌中低表达的ｍｉｒ１／苏氨酸激酶信号通路会导致ＰＬＫ－１的高表达，导致肺腺癌细胞对多稀紫杉醇耐受，而高表达的ｍｉｒ１００可以４７一［］－恢复耐药细胞株对多稀紫杉醇的敏感性。在项研宄中表明，ｌｅｔ７ｇ对肺癌＿２６ｂ细胞具有放射保护作用，，ｍｉＲ有助于增强肺癌细胞放射敏感性而－Ｒ－－－ｍｉＲ１５５、ｍｉ９、ｍｉＲ７和ｍｉＲ１２６则有相反的作用。在这些情况下，将ｍｉＲＮＡ模拟物或抑制剂与传统疗法组合可以增强治疗的功效。虽然利用以上基因的转染作用有望成为治疗肺癌的新靶点ｉｃｒｏＲＮＡ，但把ｍ运用到临床肺癌的治疗中还有很多困难需要克服，包括ｍｉＲＮＡ药物的稳定性，在体内的传递、吸收及组织的特异性等。ｍｉｃｒｏＲＮＡ应用于临床治疗的关键是要提高其药代动力学、保证最小的毒性作用和脱靶效应学。为了解决这些问题，与－ｍｍｉｃｒｏＲＮＡ表达的病毒载体或化学合成的ｐｒｅｉＲ相比，双链ｍｉｃｒｏＲＮＡ模拟物具有更低的成本来源且更低的非特异性效应的功能成熟性ｍｉｃｒｏＲＮＡ。在肺癌细胞３３ 硕士学位论文４１［］系中检测７个双链模拟物以抑制致瘤特性并被证明是有效的。为了通过靶向’－治疗达到治疗效果，已经开发了几种类型的ｍｉｃｒｏＲＮＡ抑制剂。化学修饰，如２０一甲基和锁定核酸（ＬＮＡ），将増加针对核酸酶的寡核苷酸稳定性。类新的“”ｍｉｃｒｏＲＮＡ抑制剂ｍｉＲＮＡ海绵可以表达于串联ｍｉｃｒｏＲＮＡ结合位点的转基因细４８］［－１２２胞中与强启动子相连接。己有证据表明，针对ｍｉＲ的抑癌基因能够在灵Ｒ－１２２，这提示了ｍｉｃｒｏＲＮＡ长类动物中有效沉默ｍｉ，而没有毒性抑制剂可用于４８［］临床实践中。总体而言，基于ｍｉＲＮＡ的疗法，单独或与常规疗法相结合，仍处于初级阶段；ｉＲＮＡ的，它的潜力是有希望的，ｃｒｏ但是，鼓舞人心的未来的工作应该集中在ｍ化学修饰和递送上，特别是靶向递送到肿瘤部位而不伤害非癌细胞。３．３ＭｉｃｒｏＲＮＡ用于判断肺癌的预后目前，寻。研究，肺癌的死亡率高求判断肺癌预后的生物学标志物至关重要ｍｉｃｒｏＲＮＡ在肿瘤组织中有着不同的表达谱通过检测肿瘤组织ｍｉｃｒｏＲＮＡ表明，，一。的表达谱，可以判断肿瘤的存在及生长情况，以便确定肺癌患者的预后最新４９［］ｍ－－１项研宄表明ｉＲ１５０在非小细胞肺癌中高表达，ｍｉＲ５０的表达水平与淋巴结转移ＴＮＡｉＲ－１５０高表达患者累积５、远处转移及临床分期有关，分析显示在ｍ年总生存率为４０．８％，而在低表达组为６９．２％。另外，几个研宄小组独立报道了５＜）］［ｃｒｏＲＮＡｅｔ－７单个ｍｉ的低表达预示肺癌的不良存活率或高复发性，包括ｌ，一－－－－ｉＲ＿３４ａｉＲ－３７４ａｍｉＲ，ｍ，ｍｉＲ１８１ａ，ｍｉＲ２２１２００ｃ，ｍｉＲ２１８些ｍｉｃｒｏＲＮＡｍ，等；－２－１８３ｉＲ－１ｉＲ－１８３的高表达则提示预后不佳，包括ｍｉＲ１、ｍｉＲ家族（ｍ８２，ｍ和－－－ｉＲ－９６ｉＲ－３１ｉＲ－１６ｍｉＲｍ），ｍｉＲ９２ａ２１２６。ＳｑＣＣ，，ｍ，ｍ和在亚型中高表达５１５２［’］ｍ－ｉ－１２６ｉＲ１２６７］Ｃ平与不良预后的相关性尤为显著；ｍＲ的高水平与肿瘤中ＶＥＧＦｉ－１ＶＥＧＦ。的增加相关，并且ｍＲ２６和的共同表达提示肺癌预后不良其他标志物是基于多个ｍｉｃｒｏＲＮＡ的组合表达水平来了解肺癌的预后。血清－－－ｉＲ－４８６ｍｉＲ３０ｄｍｉＲ１和ｍ４９９中高水平的ｒａ和联合低水平的ｉＲ可以显着预测５３［］－－＿ｉＲ－２５ｉＲ３４ａｉＲ３４ｃ５－ＮＳＣＬＣ的不良预后。Ｗａｎ，ｉＲ１９１ｇ等报道ｍ，ｍ，ｍｐｍ３４ ＭｃｒｏＲＮ－血清中的表达及临床意义ｉＡ３６５６在肺癌患者ｅｔ＿７ｅＳ和ｌ可以特异性预测ｑＣＣ亚型的生存率。除ｍｉｃｒｏＲＮＡ水平外，ｘｎｉｃｒｏＲＮＡ甲基化状态的改变也可独立预测肺癌预后ｉＲ－９－３Ｒ－１２４－２３：ｍ和ｍｉ／的甲基化与肺癌的晚期Ｔ分期有关－３４ｂ，整个甲基化位点的数量越高，生存率越差ｍｉＲ；５＋５６［］／ｃ的甲基化与第Ｉ阶段的ＮＳＣＬＣ高复发和低总体生存率（ＯＳ）独立相关。ｘｎｉｃｒｏＲＮ，因此，Ａ与肺癌的生存率密切相关其可作为肺癌预后判断或定义侵袭性疾病的临床治疗有效性的有效指标。４．结语ＭｉｃｒｏＲＮＡ不仅是许多癌症相关基因的调节者，而且还是重要的癌基因或抑癌基因。而外周血清中ｍｉｃｍＲＮＡ的稳定存在和可检测性，将有望用于肺癌的早ｃｒｏＲＮＡ一期诊断、治疗以及预后的判断。但ｍｉ对肺癌的调控作用是种复杂网络，，ｍｉｃｒｏＲＮＡ运。受多因素调控将用到临床中，尚有许多难题需要解决因此深入ｉｃｒｏＲＮＡ与肺癌之间的作用及其作用机制探究ｍ，将成为肺癌新的诊断标志物及基因治疗的有效ＩＧ点，为肺癌患者带来新的希望。３５ 硕士学位论文詩文献［１］ＣａｍｐｂｅｌｌＭＪ．ＶｉｔａｍｉｎＤａｎｄｔｈｅＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ：ｍｏｒｅｔｈａｎｍＲＮＡｒｅｕｌａｔｉｏｎＪ．ＦｒｏｎｔＰｈｙｓｉｏｌ２０１４５：１８１．ｇ［］，，［２］ＦｉｌｉｐｏｗｉｃｚＷ，ＢｈａｔｔａｃｈａｒｙｙａＳＮ，ＳｏｎｅｎｂｅｒｇＮ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｔ－ｔｉｔｐｏｓｒａｎｓｃｒｐｉｏｎａｌｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｍｉｃｒｏＲＮＡｓ：ａｒｅｔｈｅａｎｓｗｅｒｓｉｎｓｉｇｈｔ？Ｊ．ＮａｔＲｅｖ［］ｅｎｅ－Ｇｔ２００８９２：１０２１１４．，，（）－－３ＬｉＴＬｕＹＹＺｈａｏＸＤｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ２９６５ｐｉｎｃｒｅａｓｅｓｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｉｎａｓｔｒｉｃ［］，，Ｓｇ－ｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｒｅｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｕｄａｌｒｅｌａｔｅｄｈｏｍｅｏｂｏｘ１Ｊ．Ｏｎｃｏｅｎｅｇｈｐ［］ｇ，２０１４３３６７８３－７９３：．，（）４ＺｈａｎＬｏｕＤＣｈｅｎＸｅｔａｌ．ＥｘｏｅｎｏｕｓｌａｎｔＭｌＲ１６８ａｓｅｃｉｆｉｃａｌｌｔａｒｅｔｓｇ，Ｈｓ，ｇｐｙｇ［］ｐＬＤＬＲＡＰ－ｍａｍｍａｌｉａｎ１：ｅｖｉｄｅｎｃｅｏｆｃｒｏｓｓｋｉｎｇｄｏｍｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｍｉｃｒｏＲＮＡＪ．Ｃｅｌｌ［］Ｒｅｓ２０－１２２２１：１０７１２６．，，（）５ＢｅｒｅｚｉｋｏｖＥＣｈｕｎＷＪＷｉｌｌｉｓＪｅｔａｌ．ＭａｍｍａｌｉａｎｍｉｒｔｒｏｎｅｎｅｓＪ，ＭｏｌＣｅｌｌ［，ｇ５，ｇ［］，］２－？２００７２８：３２８３３６．ｓ（）６ＭａＪＬｉＺｈａｎＭｅｔａｌＤＲＮＡｉｎＹ．ｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｍｉｅｘｒｅｓｓｏｎｓｉｎｅｒｉｈｅｒａｌｂｌｏｏｄ［，，，ｐｐｐ］ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｌｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＬａｂＩｎｖｅｓｔ，９５１０－２０１５：１１９７１２０６．，（）７ＪｉａｎＣＨｕＸＡｌａｔｔａｒＭｅｔａｌ．ｍｉＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｒｏｆｉｌｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈ［］ｇ，，？ｐｐｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＥｘｐｅｒｔＲｅｖＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＴｈｅｒ，２０－１４１４４：４５３４１．５６（）Ａ－８ＪａｆｒｉＭＡｌａｈｔａｎｉＭＨＳｈａＪＷ．ＲｏｌｅｏｆｍｉＲＮＡｓｉｎｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒ［］，Ｑ，ｙｍｅｔａｓｔａｓｉｓ：ＩｍｌｉｃａｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｒａｅｕｔｉｃｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎＪ．ＳｅｉｎＣａｎｃｅｒＢｉｏｌｐｐｍ，［］－２０１７４４：１１７１３１．，［９］ＦａｒａｚｉＴＡ５ＳｐｉｔｚｅｒＪＩ，ＭｏｒｏｚｏｖＰ，ｅｔａｌ．ｍｉＲＮＡｓｉｎｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒ［Ｊ］，ＪＰａｔｈｏｌ，－２０１１２２３２：１０２１１５，５（）３６ Ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义Ａ－１０ＧａｏＰＸｉｎＡＹＺｈｏｕＧＹｅｔａｌ．ＴｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｍｉｃｒｏＲＮ１４ｔｏ，５［，ｇ，］－ｓｕｒｅｓｓｉｎｖａｓｉｏｎｍｅｔａｓｔａｓｉｓｃａｓｃａｄｅｉｎａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒＪ．Ｏｎｃｏｅｎｅｐｐｇ［］ｇ，２０３２－１３４：４９１５０１．，（）１１ＴＫ－ａｕｃｈｉＡＹａｎａｉｓａｗａＴａｎａｋａＭｅｔａｌ＿Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｈｏｘｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅ［］ｇ，ｇ，，ｙｐ－－－ｆａｃｔｏｒ１ａｌｈａａｓａｎｏｖｅｌｔａｒｅｔｆｏｒｍｉＲ１７９２ｍｉｃｒｏＲＮＡｃｌｕｓｔｅｒＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｐｇ［］，２００８６８－１４：５５４０５５４５．，（）［１２］ＫａｎｚａｋｉＨ，ＩｔｏＳ，ＨａｎａｆＵｓａＨ，ｅｔａｌ＿Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｉｒｅｃｔｔａｒｇｅｔｓｆｏｒｔｈｅ－－－１７ｕｓｔｍｉＲ９２ｃｌｅｒｂｙｐｒｏｔｅｏｍｉｃａｎａｌｙｓｉｓＪ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ２０１１ｌｌ１７：３５３１３５３９．［］，ｓ（）－１３ＨａｔｔＤＭｔＭｏｄｕ－ＲｄｔｌｅＭＥＰａｒｉｃｋＧａｒｃｉａＭＲｅａｌ．ｌａｔｉｏｎｏｆＫａｓｅｅｎｄｅｎｌｕｎ［］ｙ，，，ｐｇｔｓ－－ｕｍｏｒｉｇｅｎｅｉｓｂｙＭｉｃｒｏＲＮＡ２１Ｊ．ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ，２０１０１８３：２８２２９３．［］５（）Ｈ－＿１４ＪｉａｎＬＰｅＣＹＺｈｕＺＴ．ＲｏｌｅｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ２１ｉｎｒａｄｉｏｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｎｎｏｎｓｍａｌｌ［］ｇ，，ｙｃｅｌｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔａｒｅｔｉｎＰＤＣＤ４ｅｎｅＪＯｎｃｏｔａｒｅｔｌｕｎｇｂｙｇｇｇ．ｇ［］，２０－１７８１４：２３６７５２３６８９．，（）１５ＷａｎＹａｎＣＳｈｉＸｅｔａＡ－５７５ｔｓＩｔｔＨｌ．ＭｉｃｒｏＲＮｔａｒｅＢＬＤｏｒｏｍｏｅｒｏｗｔｈ［］ｇ，５ｓｇｐｇ－－ａｎｄｉｎｖａｓｏｎｏｆｎｏｎｓｍａｃｅｌｕｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＪＦＥＢＳＬｅｔｔ２０５５８９＊：８０５８ｉｌｌｌｌｇ［］．，１，（７）１１．ＬＬ－１６ＷａｎｉＤＣｉＺＦｅｔａｌ．ＵｒｅｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉＲ２７ａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｔｈｅ［ｇＱ，，，ｐｇ］ｍａｌｉｇｎａｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｒｏｎｃｈｉａｌｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＳＶ４０ｓｍａｌｌ－ＴａｎｔｉｅｎＪｎｃｏｅｎｅ５．．Ｏｇ２０１１３０３６：３８７３８８６ｇ［］，（，）ｔ－［１７ＴａｋａｍｉｚａｗａＪ５ＫｏｎｉｓｈｉＨ，ＹａｎａｇｉｓａｗａＫ，ｅａｌ．Ｒｅｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｌｅｔ７］ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｈｕｍａｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓｉｎａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈｓｈｏｒｔｅｎｅｄｐｏｓｔｏｐｅｒａｔｉｖｅ－ｓｕｒｖｉｖａｌＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００４ｌｌ：３７５６．，６４３７５３［］？（）ｔ－－１８ＳａｈｌｈｕｔＣＳｌａｃｋＦＪ．ＣｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌｃｔｉｏｎｏｆｃｒｏＲｓｌｅｔｉＲ３４［，ＡＭｉＮＡ７ａｎｄｍ］ＥｆｅｃｔｅｎｓｗｔｈＥｒｏｔｎｏＳｕＮｏｎ－ｓｍａＬｕｎＣａｎｃｆｉｖｌｙＳｙｅｒｇｉｚｅｉｌｉｉｂｔｐｐｒｅｓｓｌｌＣｅｌｌｇｅｒＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｌｌｌ１５２－１．ＣｅＣｃｅ２０１４１３：１７１２８０．＾］ｙ，，（）１９Ｙｔ－２０－７ＺｈｏｕＬｉａｎＨＬｉａｏＺｅａｌ．ｍｉＲ３ｅｎｈａｎｃｅｓｌｅｔｂｉｏｅｎｅｓｉｓｂｔａｒｅｔｉｎ［］ｓ，ｇ，ｇｙｇｇＬＩＮ２８Ｂｔｏｓｕｐｐｒｅｓｓｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＳｃｉＲｅｐ，２０１７，７：４２６８０．［２０］ＩｚｚｏｔｔｉＡ，ＣａｌｉｎＧＡ，ＡｒｒｉｇｏＰ５ｅｔａｌＤｏＡｖｕｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｈ－ｅｌｕｎｓｏｆｔｉｔｔｋＪ．ＦＡ２００９２３０６８１２．ｒａｔｓｅｘｏｓｅｄｏｃａｒｅｅｓｍｏｅＳＥＢＪ３：８ｇｐｇ［］５）？（３７ 硕士学位论文ｔＣ－２１ＪｅｏｎＨＳＬｅｅＳＹＬｅｅＥＪｅａｌ．ｏｍｂｉｎｉｎｍｉｃｒｏＲＮＡ４４９ａ／ｂｗｉｔｈａＨＤＡＣ，［９，ｇ］ｎｈｆｅｃｈｔＪＬｕｎａｎｃｅｒｉｉｂｉｔｏｒｈａｓａｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｔｏｎｇｒｏｗｔａｒｒｅｓｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［］．ｇＣ，２０１２７６２：１７Ｍ７６．？（）－－２２ＺｈａｎＹＨｕａｎＳＵ－ｒｅｕｌａｔｏｎｏｆｍＲ１２５ｒｅｖｅｒｓｅｓｅｉｔｈｅｌａｌｍｅｓｅｎｃｈｍａ．ｉｉｂｉｌ［］，ｇｐｇｐｙｇｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｉｎａｃｌｉｔａｘｅｌ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｌｕｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＪ，ＢｉｏｌＣｈｅｍ２０１５．ｐｇ［］ｓ２３ＧｏｎＪＺｈａｎＪＰＬｉＢｅｔａＭｉｃｒＲＮＡ－１２５ｔｉｌａｔｉｌ．ｏｂｒｏｍｏｅｓａｏｔｏｓｓｂｒｅｕｎ［］５，？ｇｇｐｐｐｙｇｇ－－－３０７１－３０７９ｔｈｅｒｅｓｓｏｎｏｆ１ＢｃｌｗａｎｄＩＬ６Ｊｅｎｅ２０１３３２２５．ｅｘｐｉＭｃｌｎｃｏ：，Ｒ，Ｏｇ［］，，（）２４ＬｕＷＬｉＳＬｉｕＢｅｔａｌｉｎｔｔｉｓ－ｌＲＮＡｉｔｈｅ．Ｓｃｒｅｅｎｏｆｍｅａｓａｓｒｅａｔｅｄｍｉｃｒｏｓｎ［］３，，［ｇ－ｄｈｌａｒｇｅｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓｗｉｔｈｉｆｆｅｒｅｎｔｍｅｔａｓｔａｓｔｉｃｏｔｅｎｔｉａｌｓＪ．ＺｏｎｕｏＦｅｉｐ］［ｇｇ］－ＡｉＺａＺｈｉ２０１１１４１１：８３５８４０．，，（）－－－－＿－ｍ５ＪｉａｎｇＬＨｕａｎＺｈａｎＳｅｔａｌ．ＨｓａｍｉＲ１２５ａ３ａｎｄｈｓａｉＲ１２５ａ５ａｒｅＰ］，ｇＱ，ｇ，ｐｐｔ－ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｅｄｉｎｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒａｎｄｈａｖｅｉｎｖｅｒｓｅｅｆｅｃｔｓｏｎｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｒａｔｉｏｎｏｆｕｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓＪ．ＢＭＣＣａｎｃｅｒ２０１０１０：３１８ｇｌｇ．［］，，２６ＭａｔｔＳＳＷａｎＪＭｏｎｔｅｉｒｏＬＪｅｔａｌ．ＤｅｆｉｎｉｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｔｈａｔｒｅｒｅｓｓ［ｙ，ｇ５Ｓ］ｐｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅＦＯＸＯｌｉｎｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌｃａｎｃｅｒＪ．Ｃａｎｃｅｒ［］Ｒｅｓ２０－１０７０ｌ：３６７３７７．，，（）ＨＷｔ－－２７ＺｈａｎＬｕａｎａｎＳｅａｌ．ＭｉＲ１８３ｒｏｍｏｔｅｓｒｏｗｔｈｏｆｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌ［］ｇ９Ｑ，ｇ，ｐｇ－ｌｕｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｔｈｒｏｕｇｈＦｏｘＯｌｉａｈｉｂｉｔｉｏｎＪ．ＴｕｍｏｘｉｒＢｉｏｌ２０１５３６１０：８１２１８１２６．ｇ［］，？（）２８ｉｔｌＭ－ＳｈＬｈａｎＳｅａｉＲｉｔｉｉｔｉｉｔｕＨ．２００ｃｎｃｒｅａｓｅｓｈｅｒａｄｏｓｅｎｓｖｏｆ［］，，，ＺｇＷｙ－－ｃａｎｃｅｒｃｅｎｔＶＥＧＦ－ＶＥＧＦＲ２ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｌｌｌｉｅＡ５４９ｂａｒｅｔｉｎａｔｈｗａＪ，ｙｇｇｐｙ［］ＰＬｏＳＯｎｅ，２０１３，８１０：ｅ７８３４４．（）［２９］ＤｏｅｄｅｎｓＡＬＳＳｔｏｃｋｍａｎｎＣ，ＲｕｂｉｎｓｔｅｉｎＭＰ，ｅｔａｌ．Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｏｘ－－－ｔｕｍｙｐｉａｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ１ａｌｐｈａｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＴｃｅｌｌｆｕｎｃｔｉｏｎａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｓｏｒ－ｒｏｒｅｓｓｉｏｎＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０７０１９４６５７４７５：７．ｐｇ［］，，（）［３０］ＤｏｘｉｎｅｍＴ，ＦｅｎｔｏｎＣＱＬｏｎｖｉｋＫ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓｉｇｎａｔｕｒｅｓｉｎｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｒｅｌａｔｅｄｔｏａｎｉｏｅｎｅｓｉｓｉｎ－２９６７ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｎｃｅｒＪ．ＰＬｏＳＯｎｅ２０１２７ｌ：ｅ１．ｇｇｇ，，［］（）［３１］ＰｅｃｏｔＣＶ，ＲｕｐａｉｍｏｏｌｅＲ，ＹａｎｇＤ，ｅｔａｌ．Ｔｕｍｏｕｒａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｂｙｔｈｅ－ｍｉＲ２００ｆａｍｉｌＪ，ＮａｔＣｏｍｉｎｕｎ２０１３４：２４２７．ｙ［］，，３８ －血清中的表达及临床意义ＭｉｃｒｏＲＮＡ３６５６在肺癌患者－ｌｌ３２ＳｋｒｚｙｐｅｋＫＴｅｒｔｉｌＭｏｄａｔａ．Ｉｎｔｅｒｌａｂｅｔｗｅｅｎｈｅｍｅｏｘｅｎａｓｅ１ａｎｄｓ，ＧＳ，ｅｐｙｙｇ［］－－３７８ｓｍａｌｌｌｕｎｌｉｍｉＲａｆｆｅｃｔｓｎｏｎｌｃｅｌｃａｒｃｉｎｏｍａｒｏｗｔｈｖａｓｃｕａｒｚａｔｉｏｎａｎｄｇｇ，，－ｍｅｔａｓｔａｓｉｓＪ．ＡｎｔｉｏｘｉｄＲｅｄｏｘＳｉｇｎａｌ２０１３，１９７：６４４６６０．［］，（）３３Ｍｆａｔ－ＩｎｃｏｒｏｎａｔｏＧａｒｏｌｏＭＵｒｓｏＬｅａｌ．ｍｉＲ２１２ｉｎｃｒｅａｓｅｓｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓ［］，，，－－－ｆａｃｔｏｒｒｅｌａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｉｎｇｌｉａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｉｎｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｎｃｅｒｂｇｙｇｙｔａｒｅｔ－ｇｉｎｇｔｈｅａｎｔｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｒｏｔｅｉｎＰＥＤＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１０，７０９：３６３８３６４６．ｐ］［（）ＢＰＤＨｅｔａＴｈ－３４ＫｕｎｄｕＳＴｅｒｓＬＡｅｎｌ．ｅｍｉＲ２００ｆａｍｉｌａｎｄｔｈｅ［］，，ｙｓｙｇ－？？ｍｉＲ１８３９６１８２ｃｌｕｓｔｅｒｔｏｇｅｔＦｏｘＧｔｏｉｎｈｉｂｉｔｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｉｎｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｓＪ２０－．Ｏｎｃｏｅｎｅ１６３５２：３８６．ｇ，，（）１７１［］［３５］ＬａｗｒｉｅＣＨ，ＧａｌＳ５ＤｕｎｌｏｐＨＭ？ｅｔａｌ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｅｌｅｖａｔｅｄｌｅｖｅｌｓｏｆ－－ｔｕｍｏｕｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｓｅｒｕｍｏｆａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｄｉｆｕｓｅｌａｒｇｅＢｃｅｌｌｐ－ｌｈｏｍａＪ．ＢｒＪＨａｅｍａｔｏｌ２００８１４１５：６７２６７５ｙｍ．．ｐ［］，（）３６ＶｏｓａＭｅｔａ－ｍＵＶｏｏｄｅｒＴＫｏｌｄｅＲｅｔａａｎａｓｉｓｏｆｃｒｏＲＮＡｅｘｒｅｓｓｉｏｎｉｎｕｎ［］，，？ｌ．ｌｙｉｐｌｇ－ｃａｎｃｅｒＪ．ＩｎｔＪＣａｎｃｅｒ２０１３１３２１２：２８８４２８９３．，，［］（）［３７］ＣｕｉＥＨ，ＬｉＨＪ，ＨｕａＦ，ｅｔａｌ．ＳｅｒｕｍｍｉｃｒｏＲＮＡ１２５ｂａｓａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｏｒｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ－ｂｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒａｄｖａｎｃｅｄＮＳＣＬＣｐａｔｉｅｎｔｓｒｅｃｅｉｖｉｎｇｃｉｓｌａｔｉｎｂａｓｅｄｃｈｅｍｏｔｈｅｒａＪ．ｐｐｙ［］Ａｃ－ｔａＰｈａｒｍａｃｏｌＳｉｎ２０１３３４２：３０９３１３．，，（）３８ＳｏｌｏｍｉｄｅｓＣＣＥｖａｎｓＢＪＮａｖｅｎｏｔＪＭｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｒｏｆｉｌｉｎｉｎｌｕｎｃａｎｃｅｒ［］，？，ｐｇｇｒｅｓＡｃ－ｖｅａｌｎｅｗｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｄｉａｇｎｏｓｉｓＪ．ｔａＣｙｔｏｌ２０１２，５６６：６４５６５４．［］，（）３９ＴａｎＤ，ＳｈｅｎＹ，ＷａｎＭ，ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｌａｓｍａｍｉｃｒｏＲＮＡｓａｓｎｏｖｅｌ［］ｇｇｐｎｏｎｉｎｖａｓｉｖｅｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｅａｒｌｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＪ．ＥｕｒＪＣａｎｃｅｒＰｒｅｖ［］，２０－１３：５４８，２２６５４０．（）［４０］ＷａｎｇＰ，ＹａｎｇＤ，ＺｈａｎｇＨ，ｅｔａｌ．ＥａｒｌｙＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｕｎｇＣａｎｃｅｒｉｎＳｅｒｕｍｂｙａＰａ－ｎｅｌｏｆＭｉｃｒｏＲＮＡＢｉｏｍａｒｋｅｒｓＪＬｕｎａｎｃｅｒ２０１５１４：３１３３１９ｅｌ．Ｃｌｉｎ６．．，，［］ｇＣ（）－４ＷａｎｖＹＨ－１ＧｏｎＹＨｅｔａｌ．ＤｏｕｂｌｅｓｔｒａｎｄｅｄＬｅｔ７ｍｉｍｉｃｓｏｔｅｎｔｉａｌ［ｇＱＺ，Ｌ，ｇ，，ｐ］ｉｄｔｆｅｎｅ－ｃａｎｄａｅｓｏｘｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａＪ．ＪＰｈｙｓｉｏｌＢｉｏｃｈｅｍ２０１２６８１：１０７１１９．ｇｐｙ［］，，（）４２－ＬｉｕＸＳｅｍｐｅｒｅＬＦＧａｌｉｍｂｅｒｔｉＦｅｔａｌ．Ｕｎｃｏｖｅｒｉｎｇｇｒｏｗｔｈｓｕｒｅｓｓｉｖｅ［］，９？ｐｐＣｌｉｎＣ４－１１８３ｃａｎｃｅｒＪ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓｉｎｌｕｎ．ａｎｃｅｒＲｅｓ２００９１５：１１７７ｇ，ｓ（）［］３９ 硕士学位论文４３ＣｈｅｎＺＺｅｎＧｕｏＹｅ－－Ｈｔａｌ．ｍｉＲＮＡ１４５ｉｎｈｉｂｉｔｓｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｎｃｅｒ，ｓ［］５ｇｇ－ＭｃｅｌｌｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｔａｒｅｔｉｎｃｃＪ．ＪＥｘｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０２９：１５１．，，ｐｙｇｇｙ［］ｐＣ４４ＸＹＣｈｅｎＪＸＺｈａｎＺｔａ－Ｈｅｅｌ．Ｔｈｅｌｅｔ７ａｍｉｃｒｏＲＮＡｒｏｔｅｃｔｓｆｒｏｍｒｏｗｔｈｏｆ［］，ｇ，ｐｇ，－－ｌｕｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａｂｓｕｒｅｓｓｉｏｎｏｆｋＲａｓａｎｄｃＭｃｉｎｎｕｄｅＪＣａｎｃｅｒｙｐｐｙＣ－ｌｉｎＯｎｃｏｌ２０１０１３６７：１０２３１０２８．，？（）４ＬＭｔ－５ＭｅｎＦＨｅｎｓｏｎＲａｎｅａｌ．ＩｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｈｕｍａｎｍｉｃｒｏＲＮＡｉｎｒｏｗｔｈｇ，，ｇ，ｇ［］ａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙｉｎｈｕｍａｎｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅｓＪ．［］ａｓｔｒｏｅｎ１３０－Ｇｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００６，７：２１１３２１２９．（）－４６ＦＢＲＣｈＬＢ－ｅｎＷａｎｅｎ．ＭｉＲ１００ｒｅｓｅｎｓｉｔｉｚｅｓｄｏｃｅｔａｘｅｌｒｅｓｉｓｔａｎｔｈｕｍａｎｌｕｎ［］，，ｇｇｇ－ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓＳＰＣＡ１ｔｏｄｏｃｅｔａｘｅｌｂｔａｒｅｔｉｎＰｌｋｌＪ．ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔ（）ｙｇｇ］，［２０１２３１７２１８４－１９１．：，（）４７ＷｅｉｄｈａａｓＪＢＢａｂａｒＩＮａｌｌｕｒＭｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｓａｓｏｔｅｎｔｉａｌａｅｎｔｓｔｏａｌｔｅｒ，，Ｓ，ｐｇ［］－ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏｃｔｏｔｏｘｉｃａｎｔｉｃａｎｃｅｒｔｈｅｒａｐＪＣａｎｃｅｒＲｅｓ２００７６７２３ｌｌｌ１１１１１１．．：６ｙｙ［］，ｓ（）－４８ＥｌｍｅｎＪＬｉｎｄｏｗＭＳｃｈｉｉｔｚＳｅｔａｌ．ＬＮＡｍｅｄｉａｔｅｄｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｌｅｎｃｉｎｉｎｓ［］，，ｇ－－ｈｕｍａｎｒｉｍａｔｅｓＪ．Ｎａｔｕｒｅ２００８４５２７１８９８９６８９９．ｎｏｎ：，？ｐ［］（）４９ＹＷ－ｉｎＳｉｍＸＦＹａｎｅｔａｌ．ＩｎｃｒｅａｓｅｄｅｘｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡ１５０ｉｓ［］Ｑ？，ｇＧＴ，ｐｔｉ－ａｓｓｏｃｉａｅｄｗｉｔｈｐｏｏｒｒｏｎｏｓｓｉｎｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｎｃｅｒＪ．ＩｎｔＪＣｌｉｎＥｘＰａｔｈｏｌｐｇｇ［］ｐ，－２０１５８ｌ：８４２８４６．ｓ（）［５０］ＶｏｏｒｔｍａｎＪ，ＧｏｔｏＡ？ＭｅｎｄｉｂｏｕｒｅＪｓｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｏｕｔｃｏｍｅｓｉｎａｔｉｅｎｔｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈａｄｕｖａｎｔｃｈｅｍｏｔｈｅｒａａｆｔｅｒｃｏｍｌｅｔｅｒｅｓｅｃｔｉｏｎｏｆｐｊｐｙｐ－－ｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｃａｒｃｉｎｏｍａＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１０７０２１：８２８８８２９８．ｇ［］５，（）－５１ＺｈａｏＷＺｈａｏＪＪＺｈａｎＬｅｔａ．ＳｅｒｕｍｍＲ２１ｅｖｅｌ：ａｏｔｅｎｔａａｎｏｓｔｃａｎ，，ｇｌｉｌｉｌｄｉｉｄ［］，ｐｇ－ＭｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｂｉｏｍａｒｋｅｒｆｏｒｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒＪ．ＩｎｔＪＣｌｉｎＥｘｅｄ［］ｐ，－２０１５８９．：１４７５９１４７６３，（）Ｓｈｅｎｅ－－－－５２ＺｈａｎＨＭａｏＦＴｔａｌ．ＰｌａｓｍａｍｉＲ１４５ｍｉＲ２０ａｍｉＲ２１ａｎｄｍｉＲ２２３［ｇ，，，，］，－－ｕｎａｓｎｏｖｅｌｂｉｏｍａｒｋｅｒｓｆｏｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｅａｒｌｙｓｔａｇｅｎｏｎｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｇｃａｎｃｅｒＪ．Ｏｎｃｏｌ［］ｔｔ２０－Ｌｅ１７１３２：６６９６７６．，，（）４０ ＭｃｒｏＲＮＡ－３６５６ｉ在肺癌患者血清中的表达及临床意义［５３］ＬａｎｄｉＭＴ，ＺｈａｏＹ，ＲｏｔｕｎｎｏＭ，ｅｔａｌ．ＭｉｃｒｏＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｓｈｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄｐｒｅｄｉｃｔｓｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ，２０１０２３０＊４４１１６：４．，（）［５４］ＫｉｔａｎｏＫ，ＷａｔａｎａｂｅＫ？ＥｍｏｔｏＮ，ｅｔａｌ．ＣＧｉｓｌａｎｄｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎｏｆｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉｓｐ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｈｕｍｏｒｓｉｚｅａｎｄｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆｎｏｎ－ｌｌｃｅｌｌｕｃａｎｃｅｒａｎｃｅｒｔｔｓｍａｌｎｇ［Ｊ］．Ｃ１１１２２２６－２１３１Ｓｃｉ２０１０２．：１，，（）５５ＬｅｅＷＫＬｅｅＥＢｅ－ＫｉｍＹＨｔａｌ．ｏｍｂｉｎｅｄＥｆｆｅｃｔｏｆｅｔａｓｔａｓｉｓＲｅｌａｔｅｄ，ＣＭ［］？，－ｍｉ３４ａｎｄｍ－１２ｔｈｌＭｉｃｒｏＲＮＡＲｉＲ４ＦａｍｉｌｅａｔｉｏｎｏｎＰｒｏｎｏｓｉｓｏｆ，ｙ，ＭｙｇＮｏｎ－Ｓｍａ－ｅｒ３－ｌｌＣｅｌｌＬｕｎＣａｎｃＪ．ＣｌｉｎＬｕｎＣａｎｃｅｒ２０１７１８ｌ：ｅｌ１３ｅ２０．ｇ［］ｇ，，（）［５６］ＭｉｚｕｎｏＫ，ＭａｔａｋｉＨ，ＡｒａｉＴ５ｅｔａｌ．ＴｈｅｍｉｃｒｏＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｉｇｎａｔｕｒｅｏｆｓｍａｌｌ－－－ｌｌｔｕｍｏｒ２７ａ－５３４ｂ３ｈｉｔｅｃｅｌｕｎｇｃａｎｃｅｒ：ｓｕｒｅｓｓｏｒｓｏｆｍｉＲａｎｄｍｉＲａｎｄｔｅｒｔａｒｅｄｐｐｐｐｇｏｎｃｏｅｎｅｓＪ胃＿ＪＨｕｍＧｅｎｅｔ２０１７６２７：６７１６７８ｇ．［］，，（）４１ 硕士学位论文主要缩写词表ＡＢＢＲＥＶＩＡＴＩＯＮＳ（）英文缩写英文全称中文名称ｃＤＮＡＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ互补脱氧核糖核酸ｈｈｏｕｒ小时Ｍｍｏｌ／Ｌ摩尔每升ｍｉｃｒｏＲＮＡｍＲＮＡｉｃｒｏ微小核糖核酸ｍｉｎｍｉｎｕｔｅ分钟ｍｌｍｉｌｌｉｌｉｔｅｒ毫升ｍＭｍｍｏｌ／Ｌ毫摩尔每升ｍＲＮＡｍｅｓｓｅｎｇｅｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ信使核糖核酸ｏｎ－ｓｍａ－ＮＳＣＬＣＮｌｌｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａ非小细胞肺癌ＰＣＲｐｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ聚合酶链式反应ｐＨｐｏｗｅｒｏｆｈｙｄｒｏｇｅｎ酸碱度－ｒｅｍｃｒｏＲＮｒｅｃｕｒｓｏｒ－ｍｉｃｒｏＲＮＡｐｉＡｐ微小核糖核酸前体－ｒｉｍ－ｉｐｉｃｒｏＲＮＡｐｒｉｍａｒｙｍｃｒｏＲＮＡ微小核糖核酸初始转录体－ＲＴＰＣＲｕａｎｉｔ－ｔｑｑｔａｔｉｖｅｒｅａｌｉｍｅＰＣＲ定时定量多聚酶联反应ＲＮＡＲｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄ核糖核酸ｒｐｍｒｏｔａｔｅｅｒｍｉｎｕｔｅ每分钟转数ｐｓｅｃｓｅｃｏｎｄ秒ｐｉｍｉｃｒｏｌｉｔｒｅ微升ｉＭｍｍｏｌ／Ｌ微摩尔每升ｊｐ４２ ＭｒｏＲＮＡ－ｉｃ３６５６在肺癌患者血清中的表达及临床意义致谢光阴似箭，日月如梭，三年的研宄生生活即将结束，回首这三年的求学历程，一！我很庆幸庆幸的是我来到了个学术氛围很好的大家庭，遇到了很多良师益友，他们不计回报地引导我！、帮助我、激励我，是我能够顺利的完成学业在此向他们表示最衷心的感谢！首先最深的谢意献给我最尊敬的导师雷明盛教授！感谢雷明盛老师在学习、生活与工作上的关心与悉心指导，正是老师的严格要求与耐心指导，才使我顺利完成了研究生期间的科研和临床工作。感谢雷老师在学术上为我指引了方向，生活上给予我温暖，教会了我严谨、细心的工作态度，如何将临床实践与理论基础密切结合的工作方法，以及如何和患者沟通交流。、建立良好的医患关系同时感谢雷明盛老师给我机会参加各种学术活动，开拓了我的视野，活跃我的思维，让我更多的了解呼吸内科专业新的研宄成果和进展，三年的研宄生学习过程中，雷明盛老师教导我学会了独立的思考、有效的学习、更好的总结。在导师身上，我看到了作为一名医学教授所具备的高尚的医德、渊博的知识、精湛的医术、严谨的治学态度、敏锐而缜密的科学思维、孜孜不倦、兢兢业业的工作态度，让我深深地敬仰！导师在百忙之余仍然读书不綴，不断探求；为，率先垂范人师表；传道授业，呕心沥血更是我们学习的楷模和追求的目标。在此，谨向雷老师表达我衷心的感谢和深深的敬意！衷心感谢龚桂姿老师、张全老师、尹志鹏老师、林浪老师以及张家界市人民医院呼吸内科全体医护人员对我的关心、帮助与鼓励。衷心感谢刘志光老师以及湖南省人民医院呼吸内科全体医护人员对我的关心、帮助与鼓励。衷心感谢科研科各位老师，临床轮科时我的各位带教老师对我的细心指导和无私帮助。衷心感谢我的师弟向珂华的无私帮助和通力合作。４３ 硕士学位论文衷心感谢湘雅二医院肿瘤中心胡春宏教授、马进安教授及各位老师提供的帮助。衷心感谢南华大学肿瘤研宄所左建宏教授及各位老师提供的帮助。衷心感谢南华大学南华医院体检科各位老师提供的帮助。衷心感谢寝室的姐妹及各位同学的帮助与陪伴。一直以来对我学习和生活的全力支持感谢我的家人和朋友、鼓励、理解与无私的奉献。最后，向所有帮助过我的老师、同学、同事、工作人员，以及本文的审阅专！家、莅临我论文答辩的各位老师表示感谢，谢谢你们４４ ＭｉＲＮＡ－ｃｒｏ３６５６在肺癌患者血淸中的表达及临床意义湖南师范大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的。研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。么学位论文作者签名：月曰＾ｆ湖南师范大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，研宄生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属湖南师范大学。同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权湖南师范大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于１、保密□，在解密后适用本授权书。年２、不保密“”（请在以上相应方框内打Ｖ）洗＾作者签名：押日期年（月Ｂｈ７导师签名：曰期月曰么＾４５