山楂总黄酮的测定

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1、第30卷第5期南昌大学学报(理科版)Vol.30No.52006年10月JournalofNanchangUniversity(NaturalScience)Oct.2006文章编号:1006-0464(2006)05-0473-05山楂总黄酮的测定3黄优生,谢明勇,张中伟,董彩军,李昌(南昌大学食品科学教育部重点实验室,江西南昌330031)摘要:利用聚酰胺吸附与NaNO2-Al(NO3)3显色相结合测定山楂总黄酮,通过对比色条件的优化,获得快速测定山楂总黄酮含量的方法。结果表明,该测定方法基本上消除了杂质的干扰,精密度高,在30min内显色稳定,重现性

2、较好,平均加样回收率为99.9%,RSD=1.06%。关键词:比色法;山楂;总黄酮;聚酰胺中图分类号:O657.32文献标识码:A空泵(上海亚荣生化仪器厂),砂芯层析柱(φ=1山楂为蔷薇科植物(Rosaceae)山楂(Crataeguscm)。pinnatifidaBunge)、山里红(Crataeguspinnatifida山楂样品(上海全汉实业有限公司提供,产地Bungevar.MajorN.E.Br.)及野山楂(Crataegus山东莱芜,品种大金星);芦丁标准品(购于中国药[1]cuneataSiebetZucc.)的干燥成熟果实,是我国为品生物制

3、品检验所);聚酰胺:80～100目;无水乙数不多的既是食品又是药品的天然产物。近年来的醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠,以上试剂均为分临床和实验研究认为,山楂有降压、降血脂、舒张血析纯。[2-4]管、抗心率失常、抗氧化等作用,其中,黄酮类化112实验方法合物是其最主要的有效成分。1.2.1山楂总黄酮的提取山楂总黄酮的测定对其提取工艺优化和原料选新鲜山楂去核、切片,晒干,制成干山楂备用。择都具有重要意义。目前,植物提取物总黄酮含量准确称取5g干山楂置于圆底烧瓶中,加入100的测定一般采用比色法、紫外法和高效液相色谱mL80%乙醇水溶液(v/v),于70℃回流提

4、取1h,[5-6][7](HPLC)法等。据文献报道,色素对比色法重复1次,合并提取液,真空浓缩至无醇味(约20的测定结果影响较大,致使结果偏高。山楂含有大mL),加无水乙醇定容至50mL,摇匀,备用。量色素,用聚酰胺吸附和NaNO2-Al(NO3)3法相结1.2.2山楂总黄酮的纯化[8]合的方法能较好去除色素的干扰。本文采用改1.2.2.1洗脱剂的选择进后的聚酰胺吸附与NaNO2-Al(NO3)3比色法相准确吸取提取液1mL,加入装有1g聚酰胺粉结合测定了山楂总黄酮的含量,并且优化了显色剂的小层析柱中,吸附5min,先用40mL水把色素等加入后放置的时间

5、,获得了一种快速、准确的测定山杂质洗去,再用50mL一定浓度的乙醇洗脱,真空浓楂总黄酮含量的方法。缩后用60%乙醇水溶液定容至50mL,摇匀,得样品溶液。1材料与方法1.2.2.2洗脱剂用量的选择111实验仪器与材料准确吸取提取液1mL,加入装有1g聚酰胺粉TU-1900双光束紫外可见分光光度计(北京普的小层析柱中,吸附5min,先用40mL水把色素等析通用仪器有限公司),FA1104电子天平(上海精杂质洗去,再用一定量80%乙醇水溶液洗脱,真空天电子仪器厂),电子恒温不锈钢水浴锅(上海宏兴浓缩后用60%乙醇水溶液定容至50mL,摇匀,得样机械仪器实业制造

6、公司),旋转蒸发仪(上海申生科品溶液。技有限公司),DGG-9140B电热恒温鼓风干燥箱1.2.3最大吸收波长的确定(上海森信实验仪器有限公司),SHE-Ⅲ循环水真吸取一定量的标准溶液和样品溶液,分别置于收稿日期:2006-05-10作者简介:黄优生(1982-),男,硕士生;3通讯作者:谢明勇(1957-),男,博士,教授,博士生导师1E-mail:myxie@ncu.edu.cn·474·南昌大学学报(理科版)2006年两支10mL比色管中,加60%乙醇至5mL,按1.2.4.2方法显色,以等量的60%乙醇作空白,显色后,标准溶液和样品溶液分别于400

7、～600nm扫描,确定其最大吸收波长。1.2.4标准曲线的绘制1.2.4.1标准溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重芦丁标准品5mg,C/%加适量60%乙醇,置水浴中微热溶解,冷却后用图1不同浓度乙醇洗脱对吸光度的影响2.1.2洗脱剂用量的确定60%乙醇定容至50mL,摇匀,备用。分别用30、40、50、60和70mL80%乙醇洗脱,1.2.4.2标准曲线的绘制精确移取上述芦丁的标准溶液液0、1.0、2.0、结果显示,在洗脱剂用量大于40mL后,测得吸光度值不再随洗脱剂用量的增加而增大,结果见图2。3.0、4.0、5.0mL分别置于6只10mL比色管中,用

8、最终确定50mL80%的乙醇洗脱。60%乙醇补足5mL。加5%Na