Red体内同源重组介导的egfp、kan基因融合和重组质粒构建

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2、)*%8，!88!8"吴洋，李山虎，施庆国，刘党生，周建光8，!，KXHA=>OY,8，HYXZ1>EO[,’8，KXV4=>EOHA/>E!8"UVW=>E=>3Y]V+1=>O[,=>E8军事医学科学院生物工程研究所，北京8$$N^$!沈阳药科大学，沈阳88$$8^83$&/#/)/%(-.#(/%0"$(,(12，40+5%62(-7#,#/+*27%5#0+,80#%$0%&，.%#9#$18$$N^$，!"#$+!8"%$2+$1:"+*6+0%)/#0+,;$#<%*&#/2，8"%

3、$2+$188$$8^，!"#$+摘要重组工程是近年来建立的一种基于高效率体内同源重组的新型遗传工程技术，可应用于靶4*:序列的敲入、敲除和基因克隆等。在应用重组工程技术进行基因亚克隆时发现，体外重叠JL.法难以获得高质量的目的4*:打靶片段，严重影响重组效率。为了解决上述问题，根据./3重组酶介导的体内同源重组工作原理进行了技术改进。先用JL.方法合成%1-=和>+$两条末端互补的线性4*:片段，然后将其电击共转化进入携带./3重组酶和;04*:"_8载体4*:的大肠杆菌4W""8菌株内，经体内

4、同源重组直接产生的;04*:")8O%1-=O>+$环状重组质粒4*:分子可通过抗生素标记筛选获得，阳性率可达到#^‘，瞬时转染;04*:"_8O%1-=O>+$可获得绿色荧光蛋白在!?"细胞中的表达。关键词重组工程，./3重组酶，基因体内融合，重组质粒构建中图分类号ZN8!文献标识码:文章编号8$$$O"$9（8!$$%）$#O$^?NO$#9/(04,-0./0’561>//71>E，=>/CE/>/<10/>E1>//71>E’(’E-6=B/3’>A1EA/FF101/>0-#$

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6、A’5’(’E’,B7/0’561>=<1’>C=BB/2/7/(-1>’(’E-15;7’2/5/>/B<=6(1BA/36=B/3’>01;(/’F./37/0’561>=B/B)@A/JL.4*:F7=E5/>3>+$E/>/BC1<=7-B/a,/>0/B’>3’F/=0AF7=E5/><7’3,0/31><’

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