高效液相色谱法及其应用

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1、高效液相色谱法及其应用赵建军高效液相色谱法基本概念分离原理系统结构分析方法实际应用1903年俄罗斯植物学家Tsweet茨维特植物色素玻璃柱CaCO3石油醚淋洗石油醚色谱法（Chromatography）希腊语chroma(色)和graphos(谱)色谱分析法的定义色谱分析法是一种物理化学分离方法,其分离原理是：溶于流动相(石油醚)中的样品(植物色素)各组分经过固定相(CaCO3)时，其与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等相互作用，且其作用的大小、强弱不同，导致在固定相中滞留的时间也不同，从而先后从固定相中流出，实现了不同组分的分离。当分离后的组分由

2、流动相携带进入检测器时，就得到了一个一个的色谱峰。几个概念：相(Phase):——“相”是物理化学术语,特指在某一系统中,具有相同成分及相同物理、化学性质的均匀物质部分。各相之间有明显可分的界面固定相(StationaryPhase)：色谱柱内保持固定、起分离作用的填充物。流动相(MobilePhase)：流经固定相空隙或表面的液体或气体。色谱柱：进行色谱分离用的细长管柱。色谱分离理论分离过程：组分赛跑同时起跑先后到达终点这取决于色谱过程的热力学性质、动力学性质。慢中等快Temporalcourse流动相各组分的理化特性不同吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等

3、相互作用的大小、强弱各不相同分离原理：两相分配气相色谱法超临界流体色谱法纸色谱法薄层色谱法液相色谱法特别适用于分离沸点高和热稳定性差的物质色谱分析类方法是分析化学的主流液相色谱类方法是色谱中的主流高效液相色谱法(HPLC)HighPerformanceLiquidChromatographyHighPerssureLiquidChromatographyHighSpeedLiquidChromatography特点：高高压：一般可以达到150~300kg/cm2高效：分离效能很高,操作简便易行。高速：一般可达l—10mL／min，分析一个试样中的几个组分

4、一般只要几到几十分钟。高灵敏度：紫外检测器的最小检测量可达0.01ng。高效液相色谱的高灵敏度还表现在所需试样很少，微升数量级的样品就足以进行全分析。适用面广：有多种分离模式可供选择，可分析80%有机化合物。操作自动化价格高：仪器设备相对较贵，操作费用较高。高效液相色谱仪溶剂传输系统：心脏高压泵样品引入系统：进样器样品分离系统：关键色谱柱信号检测系统：检测器数据处理系统：工作站泵液进样分离检测记录高压输液泵往复型泵工作原理图单向阀/红宝石球泵体材料耐腐蚀泵腔的体积要小，以便快速更换溶剂能在高压下连续工作,耐压40-50MPa/cm2压力平稳，无脉冲高压输液泵

5、输出流量稳定，重复性高,输出流量范围宽手动进样器-六通阀/定量环六通阀/定量环通废液口定量环进柱开始分析废液样品淋洗液至分离柱进样阀样品装样废液淋洗液至分离柱（ＬＯＡＤ）（ＩＮＪＥＣＴ）样品环因HPLC柱压高，需先将试样注入到色谱仪进样阀的采样环中，然后切换进样阀，将一定体积的试样注入到色谱柱的柱头。进样系统取样时，流动相直接进柱，进样口与定量环连接，样品充满定量环后，多余样品流出。进样时，泵将流动相压入定量环，将样品全部携带进入色谱柱分析。色谱柱（固定相、填料）色谱柱是色谱仪的心脏（起分离作用），其核心是优质的固定相（填料）。进行色谱分离的首要工作是选择性

6、能良好和适宜的色谱柱，即在确定的分离条件下分离效率高和分析时间短的色谱柱。色谱柱的选择应考虑：固定相类型的选择,主要取决于样品及其分离模式；柱填料的结构,主要指颗粒的形状大小、均匀性、比表面、平均孔径和孔容等；柱规格指柱内径、柱长度和填料粒度色谱柱的分离效率（简称柱效），可定量地用理论塔板数N来表示。理论塔板数N柱效检测次序：尿嘧啶/苯酚/4-氯硝基苯/甲苯AgilentXDB-C8柱：4.6×150mm,5µm高效液相色谱检测器近几年出现的蒸发激光散射检测器（ELSD）有望成为高效液相色谱全新的通用灵敏的质量检测器。可变波长的紫外吸收检测器检测器(dete

7、ctor)的主要性能要求：灵敏度（sensitivity）高（检测限低）噪音（noise）低线性范围（linearrange）宽重复性（repeatability）好适用范围广（通用型、专属型）峰的检测切线色谱峰的判断最小面积色谱工作站：把模拟信号转换成数字信号,然后采用色谱软件处理，给出色谱图等信息。进样器高压泵流动相色谱柱检测器数据处理互动控制功能建立高效液相色谱分析方法①根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法。②选择一根适用的色谱柱，确定柱的规格（柱内径及柱长）和选用固定相（粒径及孔径）。③选择适当的或优化的分离操作条件，确定

8、流动相的组成、流速及洗脱方式。④由获得的色谱图进行定