实验三血清总胆固醇的测定

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1、实验三血清总胆固醇的测定目的要求了解并掌握胆固醇测定的原理和方法。实验原理血清胆固醇(chol)测定是动脉粥样硬化性疾病防治、临床诊断和营养研究的重要指标。正常人血清胆固醇含量范围为100~250mg/mL。胆固醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素D等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在550nm波长处有最大吸收。因此，可用比色

2、法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在400mg/100mL以内时，与光吸收值呈良好线性关系。本法不必离心，颜色产物也比较稳定。试剂和器材一、试剂邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛50mg，以无水乙醇溶至50mL冷藏，有效期为一个半月。混合酸：冰乙酸100mL与浓硫酸100mL混合。标准胆固醇贮存液（1mg/mL）：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。标准胆固醇工作液（0.1mg/mL）：将上述贮存液以冰乙酸稀释10倍，即取10mL用冰乙酸稀释至100mL。二、测试样品0.1mL人血清以冰乙酸稀释至4.00mL。三、器材试管1.5×15cm（×11

3、）；移液枪，量筒50mL分光光度计。操作方法一、制作标准曲线取9支试管编号后，按下表顺序加入试剂：管号012345678标准胆固醇工作液(mL)00.050.100.150.200.250.300.350.40冰乙酸(mL)0.400.350.300.250.200.150.100.050邻苯二甲醛试剂(mL)0.200.200.200.200.200.200.200.200.20混合酸(mL)4.004.004.004.004.004.004.004.004.00相当于未知血清中总胆固醇量(mg%)050100150200250300350400A550加毕，温

4、和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm波长处测定光吸收值。以总胆固醇量（mg%）为横坐标，光吸收值为纵坐标做出标准曲线。二、样品测定取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：管号对照样品①样品②稀释的未知血清样品(mL)00.400.40邻苯二甲醛试剂(mL)0.200.200.20冰乙酸(mL)0.400　0混合酸(mL)4.004.00　4.00A550　　　加毕，温和混匀，20～37℃下静置10分钟，在550nm下测定光吸收值。然后，从标准曲线上可查出样品中总胆固醇的含量。注意事项1.本法在20～37℃条件下显色。2.混合酸粘度比较

5、大，颜色容易分层，比色前一定要混匀。思考题1.本实验操作中特别需要注意些什么？为什么？2.酯类难溶于水，将它们均匀分散在水中则形成乳浊液，为什么正常人血浆和血清中含有酯类虽多，但却清澈透明？