根系测定方法

《根系测定方法》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、根系氧化还原力的测定根系氧化还原力与呼吸作用有着密切的关系，它是根系活力的重要表现。α-萘胺能被根系所氧化，当根系的氧化力增大时，有氧呼吸旺盛，吸收养分的能力也增强，所以对α-萘胺的氧化力可作为根系活力的重要指标。1．方法原理吸附在根表面的α-萘胺会被根系所氧化，生成红色的2-羟基-1-萘胺而沉淀于有氧化力的根的表面，使这部分根染成红色。据认为该反应是在过氧化物酶的催化下进行的，该酶的活力愈强，对α-萘胺的氧化力也愈强，染色也愈深。故可根据根表面染色的深浅，定性的判断根的活力。定量测定是根据α-萘胺与根系接触一定

2、时间后α-萘胺量的减少量来确定。α-萘胺在酸性环境中与对氨基苯磺酸和亚硝酸盐作用生成红色的偶氮燃料，就可以用比色法来测量α-萘胺含量。2．仪器药品分光光度计；天平（1/万）；烧杯（500ml）；移液管（10ml,2ml,1ml）；刻度试管（20ml）；试剂瓶（60ml或100ml）；试管架；容量瓶（100和1000ml）；量筒；三角瓶（100ml）；黑蜡光纸；滤纸；棕色瓶。1)40ppmα-萘胺：准确称取0.1gα-萘胺溶于50ml水，微微加热溶解后定容至100ml，成1000ppm母液贮于棕色瓶中暗处保存。用前

3、稀释25倍。2)1%对氨基苯磺酸溶液：称1g对氨基苯磺酸溶于100ml30%乙酸中。3)100ppm亚硝酸钠溶液：称0.1g亚硝酸钠溶于1000ml蒸馏水中。4)067mol.L-1的磷酸缓冲液（pH7）：称取分析纯磷酸氢二钠11.864g溶于1000ml蒸馏水中，为A液。称取磷酸二氢钾9.073g溶于1000ml蒸馏水中为B液，用时A液60ml,B液40ml混合而成。3．测定方法定性观察：取20ppmα-萘胺α-萘胺溶液500ml加入烧杯，把带有地上部的根（离体根染色程度降低）浸入其中，并在烧杯周围用黑纸包住，

4、在室温下静置24-26小时后观察染色程度。新根和稍老的侧根都能染成分红色。变黑根及烂根不染色。定量测定：（1）绘制α-萘胺标准曲线：用40ppmα-萘胺溶液配成5、10、20、30、40ppm的系列溶液，取6支20ml的刻度试管编号，1号加1ml水和1ml磷酸缓冲液为对照。2-6号分别加入不同浓度的α-萘胺溶液各1ml，磷酸缓冲液1ml。然后再向各管加入10ml蒸馏水、1%对氨基苯磺酸1ml和100ppm亚硝酸钠溶液1ml，混匀置室温（20-25℃）下5分钟使之显色。最后加蒸馏水使整个容积为20ml。摇匀后20-

5、60分钟内在510nm波长下测定光密度，以α-萘胺含量（ppm即ug.ml-1）为横坐标，以光密度为纵坐标，绘制标准曲线。（2）将待测根系洗净吸干附着水称取1g放入100ml三角瓶中，加40ppmα-萘胺溶液和磷酸缓冲液各25ml混匀。（3）静置5-10分钟后（根的迅速吸附已经完毕），从瓶中取出2ml溶液放入20ml刻度试管。将其余的溶液塞好瓶塞后，放在振荡器上，在25℃下振荡3-6小时（如无振荡器时要在反应期间，定时的摇动）。反应时间完毕后再取2 ml溶液放入另一刻度试管。因为α-萘胺溶液会自动氧化，同时要同时

6、做无限的同样操作的空白实验（根样最好是用整根；用切碎的根，α-萘胺的氧化量会意外增加）。（4）在上述两次及空白试验所吸取的2ml测定液中，各加入10ml蒸馏水，混匀后再加入1%对氨基苯磺酸1ml和100ppm的亚硝酸钠溶液1ml混匀，置于室温下5分钟使之显色，然后加入蒸馏水，使整个容积为20ml，在20-60分钟内用510nm波长下进行比色，读取光密度，由标准曲线查出α-萘胺含量。（5）结果计算根系对α-萘胺的生物氧化量Y（ug.g-1.hr-1）按下式进行计算Y=【（A-B）-（C-D）】×E/t.w式中：A-

7、-----第一次取液测定值（ug.ml-1），作为开始值，这是根表面氧化物质的氧化作用而不是根的酶促反应；B------第二次取液测定值，是根的酶促反应后（如3小时）剩余的α-萘胺浓度（ug.ml-1）。A-B---即α-萘胺氧化总量；C------第一次空白测定值（ug.ml-1）；D------第二次空白测定值；C-D---即α-萘胺自发氧化量；E------稀释倍数24（48÷2）；t-------3小时w------1g样品根系表面积的测定测定根系表面积的方法很多，可归纳为直接测量法和间接测量法两类。直接

8、测量法是测定大量的单根的平均直径以及测量每个样品的总根长，按s=∏RL（R：直径；L：总长）公式来估算根系表面积。此法工作量大，精度差。间接测量法有染色液蘸根法、重量法、滴定法和叶面积仪法。重量法是将洗净风干根浸入浓硝酸钙溶液中10秒钟后捞出，由浸根前后硝酸钙溶液的重量差做为相对值来表示根系的表面积。滴定法是将洗净风干的根系浸入3mol.L-1的HCl溶液中（500ml）