大鼠脑组织石蜡切片免疫组化的体会

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1、山西医科大学学报，2013年4月，第44卷第4期·311·大鼠脑组织石蜡切片免疫组化的体会**郭林芝，李灵敏(山西医科大学病理教研室，太原030001;通讯作者，E-mail:lilingminppm@163．com)摘要:目的探讨一种大鼠脑组织石蜡切片免疫组化切实可行的技术方案，并得到满意的实验结果。方法改进石蜡切片制作过程，以大鼠海马神经元caspase－3染色为例，按SABC法进行免疫组化染色。结果组织切片完整均匀，海马区组织、细胞形态正常，未见扩张的毛细血管，可清晰见到细胞质和/或核呈棕黄色的阳性细胞，细胞核呈紫蓝色的正常细胞，背景染色少。结论通过

2、对大鼠脑组织取材、脱水、以及采用合理抗原修复液等方面的改进，可以较好解决大鼠脑组织免疫组化染色中出现的问题，提高免疫组化染色质量。关键词:脑组织;石蜡切片;免疫组化中图分类号:R－331文献标志码:A文章编号:1007－6611(2013)04－0311－02DOI:10．3969/J．ISSN．1007－6611．2013．04．019Experienceofimmunohistochemicalstainingonparaffinsectionsofbraintissuesinrats**GUOLinzhi，LILingmin(DeptofPathol

3、ogy，ShanxiMedicalUniversity，Taiyuan030001，China;Correspondingauthor，E-mail:lilingminppm@163．com)Abstract:ObjectiveToexploreapracticaltechnicalprocessofimmunohistochemistryontheparaffinsectionsofratbraintissuesforobtainingthesatisfactoryresults．MethodsThecaspase-3staininginrathippo

4、campalneuronswasdoneaccordingtoSABCmethodafterimprovingthesection-preparingprocess．ResultsTissuesectionswerecompleteanduniform，thehippocampustissueandcellmorphologywerenormal．Theexpansionofthecapillarieswasnotseen．Thepositivecellsthatcytoplasmand/ornuclearbrownareyellowandthenorma

5、lcellsthatnucleiarepurpleandbluewereclearlyseen，andthebackgroundstainingwasless．ConclusionTheimprovementonratbraintissueselected，dehydration，andreasonableantigenretrievalsolutionintheexperimentscouldimprovethequalityofimmunohistochemicalstaining．Keywords:braintissue;paraffinsectio

6、ns;immunohistochemistry随着神经科学的不断发展和深入研究，脑组织1．3方法石蜡切片免疫组化越来越多的被作为神经学研究的1．3．1取材与固定与以往多采用直接处死大鼠主要方法之一。但是由于脑组织本身比较柔软，含取脑固定不同，我们采用大鼠心脏灌注固定取［1］水量大等特点，脑组织石蜡切片的免疫组化染色结脑，10%的水合氯醛大鼠腹腔麻醉，剪开胸腔暴果，易出现切片染色不清楚，脱片、假阳性，假阴性出露心脏，将灌流针从心尖插入经左心室直至主动脉，现。因此要想得到一张理想的脑组织石蜡切片，并同时剪开右心耳，快速注入生理盐水约200ml，看到且能通过免疫

7、组化染色达到清晰的特异性蛋白表达肝脏变白，然后缓慢注入4%中性甲醛600ml，整个图片一直是许多研究者的难点，本实验室通过长期灌注固定时间大约持续3h。随后断头取脑，于视交试验探索出一套大鼠脑组织石蜡切片免疫组化的方叉后4mm处即海马平面取脑组织，大小约1．5cm案，并将其体会介绍给同行。×1cm×0．5cm，放入4%的中性甲醛后固定6h。1材料1．3．2脱水、包埋、切片脱水是脑组织制片最关1．1实验动物键、最容易失败的过程，本实验室经过多次脱水条件健康雄性SD大鼠，6－8周，体重200－250g的探索，最后梯度乙醇脱水过程为75%乙醇过夜，(山西医科大学

8、实验动物中心)。85%乙醇3h，95%乙醇Ⅰ1．5h，95%乙醇Ⅱ