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《青石斑鱼微卫星标记的筛选及群体多态性分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第卷第期水产学报年月一一一文章编号·研究简报·青石斑鱼微卫星标记的筛选及群体多态性分析,,,,董秋芬刘楚吾郭星篙刘丽徐田军广东海洋大学水产学院,广东湛江关键词青石斑鱼基因组又库法微卫星标记遗传多样性中图分类号文献标识码一,一,一,,一,口,,“、‘。己谙,,,以乙了饰而一,一,,,,功,,,豁而,,,,、劝,,,,,,一、‘,,功,一收稿日期戒资助项目厂‘东省重大科技兴海项湛江市科技攻关项目一一作者简介策秋芬一,男,硕卡研究一从事水产经济动物繁殖生物学和种质资源研究通讯作者刘楚吾,一,一水产学报卷如印二,。微卫星又称短串联重复序列或购自北京华美生物工程公司简单序列重复,是广泛
2、存在于真核生物基一载体产物克隆试剂盒、引物,,,因组中的简单重复片段一般每个重复单重复序列和通用引物购自上海生工生物工程位仅一个碱,重复数为次,技术服务有限公司。基其中动物大肠杆菌为本实验室’。。。体中以双核昔酸刀最为常见根据保存的菌种实验所用的其他试剂均为分析纯微卫星核心序列两端的保守序列设计引物青石斑鱼部分基因组文库的构建扩增基因组便可以找到相应的微卫星标按文献〕的方法从血液样品中提取基因组。。记微卫星标记已广泛应用于人类和动植物遗传经限制性内切酶和双酶切、、、后,通过反应在酶切产物末端加,育种遗传图谱绘制数量性状位点定位标记辅上碱基、。一助选择遗传多样性评估等方面的研究
3、将反应产物抽提纯化后在℃下与载体连接,,、二青石斑鱼饰。属妒形目妒总连接后转人大肠杆菌感受态细胞涂,、一,科蛋科石斑鱼属主要分布于北太平洋西部我国布于已添加的氨节青霉素平板上。,。,南海及东海南部青石斑鱼营养价值高价格昂℃培养过夜用无菌的牙签挑取白色单菌落接,·一,,,人的离心管以’℃于恒贵市场需求量大是重要的经济鱼类但目前养。、,一殖和常规捕捞量有限青石斑鱼的栖息分散性温振荡器中振荡培养过夜后℃超低温保藏性别比、。不平衡性世代间隔性和产卵集会型等特备用。〕点使青石斑鱼易受到过度捕捞的威胁同时法快速筛选含微卫星序列的阳性克隆、,,、海区的污染生态条件恶化和海水水质的变差造以菌
4、液为模板用通用引物和微卫星核成有些地区出现石斑鱼种数量减少的现象在心序列双核营酸引物进行扩增,《年世界自然保护联盟受威胁种群红色目反应体积为林,其中含‘〕,,·一’,‘录》中青石斑鱼被列为研究数据缺乏的物种林林·一,·一’’‘’如果在对青石斑鱼展开全面的研究与调查后数据林的和端引,,,,仍然不全面那么青石斑鱼则要被归类为受到威物各林酶林模板菌液林。、。胁的物种目前除了养殖技术病害免疫和繁殖无菌水协反应程序为℃预变性一」,,,培育等方面外对青石斑鱼的分子水平上的研后进人循环体系℃变性℃退火一一“一下。,,,究报道并不多本研究通过构建青石斑鱼部而℃延伸个循环最后℃延一,’。〕。,
5、分基因组文库筛选青石斑鱼本身的微卫伸的琼脂糖凝胶电泳检测后用,一,星序列为青石斑鱼的遗传多样性分析找到更多型凝胶成像系统拍照保存待分,。的分子标记在探讨中国南海海域的青石斑鱼群析体遗传背景和现状的同时为青石斑鱼群体遗传结阳性克隆的序列测定及结果分析构的分析、遗传资源的保护利用、连锁图谱的构建挑取结果为阳性的克隆菌液委托上海。,和分子标记辅助育种等打下基础生工生物工程技术服务有限公司测序然后用软件寻找测序结果中所含的微卫材料与方法,星核心序列和两端的保守序列分析微卫材料。星特征并将微卫星序列提交至青石斑鱼样品采自中国南海湛江海域,鉴微卫星引物的设计定困后从尾静脉取血液于抗凝剂根
6、据微卫星序列两端足够长的侧翼序列用·一,·一‘’,,右旋葡萄糖柠檬酸软件设计引物引物长度为左·一,。‘柠檬酸钠中抗凝一℃保存右,为一,值为一℃,、,一实验所用的限制性内切酶和产物长度帅委托上海生工生物工程技、、、。聚合酶乙叼户术服务有限公司合成期董秋芬,等青石斑鱼微卫星标记的筛选及群体多态性分析‘’一’」。微卫星位点的多态性扩增算利用合成的引物对青石斑鱼基因组进一尸二尸尸,,艺卜艺艺对行扩增分析反应体积为巧林其中,·一‘含林,一尸从凡私林,‘·一’林,·一’艺‘尸林,林,尸和只分别为第和第了个等位基因在群体中的的和端引物各酶模板,〔卜,无菌水林反应程序为℃频率为等位基因数预变
7、性而后进人循环体系,叽℃变性,肠结果与分析℃退火,℃延伸,个循环,最后法筛选含微卫星的阳性克隆℃延伸扩增产物用非变性聚丙烯,酸胺凝胶电泳检测,硝酸银染色,拍照保存本实验共得到了个重组阳性克隆以,。通用引物和微卫星核心序列引物对其数据统计指标进行次扩增,共得到个可能含有微卫根据每个个体产生的条带的位置确定基因型,和用处理数据,计算等星序列的阳性克隆图为第一次筛。、,位基因数、观测杂合度鱿,和期望杂合度。,选电泳图由图可知泳道和出现了一,、并进行多态性信息含量尸、群体平均杂合度条小于泳道的条带说明和号克隆可
