紫外-可见分光光度法

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1、第九章紫外-可见分光光度法◆学习目的⊙◆知识要求⊙◆能力要求⊙◆进入章节学习请点这里第1节第2节1◆学习目的通过学习光谱分析法概论、紫外-可见分光光度法的基本原理、分光光度计的基本构造、降低测量误差的方法、常用的定性、定量方法等知识，了解光学分析法的知识体系，熟悉紫外-可见分光光度法的实际应用，会用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度，并对有关物质进行定性定量分析，为学习红外分光光度法、荧光分光光度法、核磁共振波谱法及药物分析课中有关药品的定性鉴别、杂质检查和含量测定方法奠定基础。2◆知识要求1．掌握朗伯-比尔定律概念、表示及条件，吸光系数和吸收光谱的意义、表示，常用的定量分析方法原理和应用

2、。2．熟悉紫外-可见吸收光谱的产生机制、分光光度计的基本结构、偏离朗伯-比尔定律的主要因素。3．了解光谱分析法的分类、测量条件的选择、定性分析的依据和方法。3◆能力要求1.能够用朗伯-比尔定律解决定量计算问题。2.能够绘制吸收光谱曲线，找出被测物质的最大吸收波长。3.能够制备标准曲线，并能应用标准曲线对样品进行定量分析。4.会使用常见的紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度。4第一节光谱分析法概论第一节光谱分析法概论一、电磁辐射与电磁波谱电磁辐射：电磁辐射，也叫电磁波，具有波粒二象性。c＝λυE＝hυ电磁波谱：把电磁辐射按照波长大小顺序排列起来，就称为电磁波谱。紫外光区和可见光区仅是电磁波谱中

3、的一小部分。5表9-1电磁波谱分区表电磁辐射区段波长范围能级跃迁的类型射线10-3~0.1nm原子核能级X射线0.1~10nm内层电子能级远紫外辐射10~200nm内层电子能级紫外辐射200~400nm价电子或成键电子能级可见光区400~760nm价电子或成键电子能级近红外辐射0.76~2.5μm涉及氢原子的振动能级中红外辐射2.5~50μm原子或分子的振动能级远红外辐射50~500μm分子的转动能级微波区0.3mm~1m分子的转动能级无线电波区1~1000m磁场诱导核自旋能级第一节光谱分析法概论6第一节光谱分析法概论二、光谱分析法的分类发射光谱法：物质的原子、分子或离子在一定条件下，由低能

4、态（基态）跃迁至高能态（激发态），再由高能态跃迁至低能态，同时产生电磁辐射，根据这种光谱而建立的分析方法称为发射光谱法。吸收光谱法：利用物质对电磁辐射的选择性吸收而建立的分析方法称为吸收光谱法。紫外-可见分光光度法是其中重要的一种方法。7第一节光谱分析法概论三、紫外-可见分光光度的特点1.灵敏度高2.准确度高3.精密度好4.选择性好5.仪器设备简单，价格低廉，易于普及；操作简便，测定快速6.应用范围广泛8第二节紫外-可见分光光度法第二节紫外-可见分光光度法一、紫外-可见吸收光谱的产生当分子（或离子）受到光照射时，能够吸收具有一定能量的光量子，由能量较低的基态能级E1跃迁到能量较高的激发态能级

5、E2，即物质对光具有选择性吸收。紫外-可见光的能量(h)与分子（或离子）发生电子能级跃迁前后的能量差（E2-E1）恰好相等，电磁辐射与被测物发生能量交换，产生紫外-可见吸收光谱。9课堂互动1．紫外-可见光的波长范围是A．200~400nmB．400~760nmC．200~760nmD．360~800nm2．下列叙述错误的是A．光的能量与其波长成反比B．有色溶液越浓，对光的吸收也越强烈C．物质对光的吸收有选择性D．光的能量与其频率成反比第二节紫外-可见分光光度法10课堂互动3．紫外-可见分光光度法属于A．原子发射光谱法B．原子吸收光谱法C．分子发射光谱法D．分子吸收光谱法4．分子吸收可见-紫

6、外光后，可发生哪种类型的分子能级跃迁A．转动能级跃迁B．振动能级跃迁C．电子能级跃迁D．以上都能发生第二节紫外-可见分光光度法11第二节紫外-可见分光光度法二、透光率与吸光度I0＝Ia+It+IrI0＝Ia+It透射光强度It与入射光强度I0的比值称为透光率或透光度T。12对透光率的倒数取对数，称为吸光度即：第二节紫外-可见分光光度法13第二节紫外-可见分光光度法三、朗伯-比尔定律当一束平行的单色光通过均匀、无散射的含有吸光性物质的溶液时，在入射光的波长、强度及溶液的温度等条件不变的情况下，该溶液的吸光度A与溶液的浓度c及液层厚度L的乘积成正比，即A＝K·L·c。朗伯-比尔定律是定量分析的理

7、论依据。14朗伯-比尔定律不仅适用于可见光，而且也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀、无散射的溶液，而且也适用于均匀、无散射的固体和气体。实验证明：溶液对光的吸光度具有加和性。如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质，则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac第二节紫外-可见分光光度法15课堂互动您能说出朗伯-比尔定律的意义及应用条件吗？第二节紫外-