单酯型乌头类总生物碱的制备方法及其应用研究

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1、分类号：Ｏ６５单位代码：１０１８３研究生学号：２０１５３３２０６３密级：公开吉林大学硕士学位论文学术学位（）单酯型乌头类总生物碱的制备方法及其应用研究ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＭｏｎｏｅｓｔｅｒＡｃｏｎｉｔｉｕｍＴｏｔａｌＡｌｋａｌｏｉｄｓ作者姓名：姜奕甫专业：分析化学研究方向：药物分析指导教师：李绪文教授培养单位：化学学院２０１８年６月摘要单酯型乌头类总生物碱的制备方法及其应用研究乌头类生物碱是毛茛科乌头属植物（川乌、草乌等）的主要药效成分，

2、具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、强心等多种药理作用，同时也是毒性成分，其主要损害循环系统、心脏及中枢神经系统。乌头类生物碱属于二萜类生物碱，通常分为双酯型乌头碱和单酯型乌头碱。乌头属植物中最常见的三种双酯型是乌头碱、新乌头碱和次乌头碱，它们即是有效成分也是毒性成分。因此乌头属植物药材必须经过严格的炮制，使这三种双酯型乌头碱水解掉C-8位乙酰基而成为相应的单酯型乌头碱（苯甲酰乌头碱、苯甲酰新乌头碱和苯甲酰次乌头碱），或进一步水解掉C-14位苯甲酰基而成为相应的乌头原碱（乌头原碱、新乌头原碱和次原乌头碱）后使用。常用的炮制方法包括蒸制、煮制、砂烫法和加入辅料法等。国内外学者的研究表明，上述单酯

3、型乌头碱仍具有双酯型乌头碱的药理作用，因此单酯型乌头碱的制备方法与应用研究已引起人们的广泛关注。由于单酯型乌头碱在乌头属植物中含量极低，因此一般通过水解双酯型乌头碱的方法来制备单酯型乌头碱。本文首先研究了通过水解双酯型乌头类总生物碱来制备单酯型乌头类总生物碱的方法，并对双酯型乌头类总生物碱和单酯型乌头类总生物碱的急性毒性及抗肿瘤活性进行了对比研究，最后研究了以单酯型乌头类总生物碱为原料制备贴膏剂的方法并建立了其中苯甲酰新乌头碱和苯甲酰次乌头碱的HPLC测定方法。首先，本文采用乙酸乙酯-氨水作为提取液，从川乌药材中渗漉提取总生物碱。经各种影响因素的考察，最终确立的提取条件为：干燥的川

4、乌粉末先用乙酸乙酯（含氨水2%）浸渍5h后进行渗漉提取，用薄层色谱跟踪检测，直至提取液中检测不到生物碱。将提取液浓缩后用0.5%的稀盐酸酸化至pH=1～2，乙酸乙酯萃取，酸水层再用0.5%的氢氧化钠水溶液碱化至pH=11～12，再用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯，干燥，得双酯型乌头类总生物碱。接着，以苯甲酰新乌头碱（BM）和苯甲酰次乌头碱（BH）的转化率为考察指标，通过单因素考I察和正交试验确立了以上述乌头类总生物碱为原料制备单酯型乌头类总生物碱的降解条件。最佳降解条件为：使用体积比为55%的1,4-二氧六环水溶液为溶剂，液料比为16：1（v/w,mL/g），165℃加热回流6h。

5、在该条件下，苯甲酰新乌碱的转化率为68.9%，苯甲酰次乌头碱的转化率为58.5%。此方法具有简单，快捷，转化率较高的优点。其次，本文对双酯型乌头类总生物碱和单酯型乌头类总生物碱的急性毒性及抗肿瘤活性进行了对比研究。小鼠经口灌胃急性毒性实验结果显示，双酯型乌头类总生物碱的半数致死剂量（LD50）为26.2mg/kg，属于高毒性物质，而单酯型乌头类总生物碱半数致死剂量（LD50）为775.8mg/kg，属于低毒性物质，双酯型乌头碱降解为单酯型乌头碱后其毒性约降低至原来的三十分之一。利用CCK-8细胞毒活性试验，考察了双酯型乌头类总生物碱和单酯型乌头类总生物碱对肝癌HepG2细胞和肺癌A

6、549的增值抑制作用。实验结果表明乌头类总生物碱对肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549均有一定抑制作用，乌头类总生物碱对肝癌细胞HepG2的IC-1-150=14.5μg·mL，对肺癌细胞A549的IC50=45.0μg·mL。单酯型乌头类总生物碱在浓度50μg·mL-1时对肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549具有一定的抑制活性。单酯型乌头类总生物碱对肿瘤细胞HepG2，A549的抑制作用没有双酯型乌头类总生物碱强。文献表明单酯型乌头类生物碱具有较好的消炎镇痛的功效，据此本文利用得到的单酯型乌头类生物碱制备了一种消炎镇痛贴膏剂，探讨了其制备工艺并建立了其中有效成分的含量测定方法。贴

7、膏剂的制备方法为将水相（单酯型乌头类总生物碱乙醇溶液）和油相（甘油、聚丙酸钠、甘羟铝、EDTA-二钠盐、钛白粉及酒石酸）在真空状态下混合搅拌，再经涂布，切片即得。本文建立的贴剂中BM和BH的HPLC含量测定方法为：以二氯甲烷-氨水为提取溶剂，用加热回流法提取贴膏剂中的BM和BH，并利用高效液相色谱进行含量测定。高效液相色谱条件为：色谱柱AcchromTnature-C18（4.6mm×250mm，5μm）column，柱温35.0℃，流速1.0mL/min，检测波长2