海洋细菌分离筛选方法分析【文献综述】

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1、毕业设计文献综述生物科学海洋细菌分离筛选方法分析[摘要]探讨海洋细菌分离与筛选理想的方法，得到目的菌的纯培养物。通过对细菌分离筛选的几种常用方法对细菌进行分离筛选。由于每一种细菌对营养要求不同，因此每种细菌的分离筛选方法也会不同。通过比较各种分离培养方法，得出每一种海洋细菌理想的分离筛选方法。[关键词]海洋细菌；分离筛选；培养方法一直以来陆生微生物发酵产物一直是制药工业的重要资源之一，然而近年来由于在该领域内研究历史久远，以及研究方法的落后和筛选模型的陈旧,寻找新的种属的微生物或筛选出新的活性代谢产物的难度越来越大，因而使新药的开发面临挑战[1]。由于海洋微生物独特的生存环境（如高压

2、、高渗、高温等）及海洋物种间的生态作用，因此具有不同的活性[2]。从海洋微生物的次级代谢产物中寻找开发有别于陆栖微生物产生的生理活性物质，已成为当前微生物学研究的一个重要方向[3]。1947年Rosenfeld等对58株海洋细菌进行了研究，发现其中7对一般非海洋型细菌有强大的抗菌作用，并指出这7株多属球菌及芽孢杆菌[4]。1966年Bamm等从341株海洋细菌中筛选出60株具有抗菌活性，其中58株对沙门氏菌有较强抗菌活性[5]。同年,Burkho1der等分离到一种名为食溴假单胞杆菌能产生一种多溴化合物(C10H4NOBr5),对革兰氏阳性菌有强大抑制作用【6】。海洋中有细菌生长已成

3、为微生物工作者的共识，但海洋中存在何种细菌，以及在细菌浓度较低的情况下如何有效地分离海洋细菌并获取有价值的研究信息，越来越引起研究者的关注。而从海洋微生物中筛选有益菌株是一项重要的基础研究工作。我国位于太平洋西岸，地理条件差异大，温度相差悬殊，海洋微生物资源极其丰富【7】。对于黄海、渤海、南海海域的微生物资源利用已进行相关的研究，但关于东海海域微生物资源的情况报道较少[8]。已知我国海域弧菌为优势菌，弧菌主要为溶藻弧菌、河流弧菌、副溶血弧菌、霍利斯弧菌、麦氏弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌等。弧菌以外的其他细菌主要为不动杆菌、肠杆菌、假单胞菌、黄杆菌、腐败希瓦菌、巴斯德菌、啮氏艾肯菌和肠球菌

4、等细菌。酵母菌主要为红酵母菌、近平滑念珠菌、无名假丝酵母菌、奥默毕赤酵母菌、季也蒙念珠菌和热带假丝酵母菌[9]。本文主要介绍并分析海洋的优势菌弧菌，普通细菌，真菌的分离筛选方法。1弧菌分离筛选1.1弧菌的增菌培养海洋中的弧菌主要包括主要为溶藻弧菌、河流弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌和霍乱弧菌、麦氏弧菌及弧菌科的气单胞菌和邻单胞菌。碱性蛋白胨水与嗜盐菌增菌液对海水弧菌具有良好的增菌效果，因此用碱性蛋白胨水与嗜盐菌增菌液进行增菌。取5mlL碱性蛋白胨水、5mL嗜盐菌增菌液对海水细菌增菌培养6～12h[10]。1.2弧菌的分离筛选弧菌在TCBS平板上显现不同颜色。霍乱弧菌、溶藻弧菌呈黄色；副溶

5、血弧菌、海鱼弧菌、创伤弧菌呈绿色，副溶血弧菌是嗜盐菌,在血平板上有α溶血或不溶血，通过菌落颜色进行初步判断[11]。2普通细菌分离筛选2.1普通细菌的培养海洋中的普通细菌包括革兰阴性杆菌：不动杆菌、肠杆菌、克雷伯菌、枸橼酸杆菌、假单胞菌、变形杆菌、爱德华菌、黄杆菌、腐败希瓦菌、巴斯德菌和啮氏艾肯菌；革兰阳性球菌：肠球菌和微球菌。营养肉汤培养基适用于普通海洋细菌的培养。用营养肉汤培养基35℃增菌48～72h[12]。2.2普通细菌的分离筛选大肠杆菌作为粪便污染的指示菌已有近百年历史[13]。现以大肠杆菌为例，来说明普通细菌的分离方法。用伊红美蓝鉴别培养基对大肠杆菌进行鉴定筛选，其原理为

6、伊红美蓝（EMB）培养基中的伊红和美蓝有几个方面的作用。首先是鉴别染色，伊红Y是一种红色酸性染料，美蓝是一种蓝色碱性染料。大肠杆菌能强烈分解乳糖产生大量有机酸，结果与两种染料结合形成深紫色菌落。由于伊红还发出略呈绿色的荧光。因此在反射光下可以看到深紫色菌落表面有绿色金属闪光[14]。伊红和美蓝还起着抑制某些细菌（革兰氏阳性细菌与一些难以培养的革兰氏阴性细菌）生长的作用，此外，这两种染料在PH值低时结合形成沉淀，可起产酸指示剂的作用[15]。3真菌分离筛选3.1真菌的培养海洋中的真菌包括主要为胶红酵母菌、近平滑念珠菌、奥默毕赤酵母菌、无名假丝酵母菌、隐球菌、季也蒙念珠菌和热带假丝酵母菌

7、。液体沙氏增菌液对真菌有增菌作用，因此用液体沙氏增菌液来培养海洋中的真菌。在液体沙氏增菌液分传沙氏与酵母菌显色平板，35℃孵育24～72h，如未见真菌生长放置168h[16]。3.2真菌的分离筛选真菌一般可在马丁(Martin)培养基、查氏培养基、马铃薯培养基和孟加拉红培养基等上生长[17]。纯化分离的方法大致可以分为2种：在菌落水平上的纯化；细胞水平的纯化[18]。在细胞水平上，Zengler等将海水和土壤样品中的微生物先进行类似稀释培养法的稀释过程，之