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时间:2019-11-25
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1、RNAiorsiRNATransfection以24孔板为例,其余规格的转染见表11中板,细胞密度为30-50%适宜。注意:根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度,如果转染后需要长时间后检测,则细胞中板密度适当降低,已避免细胞过度生长导致存活降低。2第二天(24-36小时后)每个孔转染方式如下:A将20pmolsiRNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。B将1ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中,混匀室温放置5min。C将AB两管混合,放置20min。3转染期间,将24孔板培养基换成无血清培养基,每孔400ul。将C管mix加入24孔板对
2、应孔中,4-6小时候换成有血清培养基。PlasmidDNATransfectionDNA(ug):lipo2000(ul)=1:2-3转染时细胞密度越高,转染效率,表达效率也越高,并且可以降低细胞毒性。1中板。贴壁细胞:0.5-2X105cells/well,第二天待细胞密度达到90%以上时转染悬浮细胞:4-8X105cells/well,中板后随即转染。2转染。A将0.8ugDNA溶于50ulOpti-mem无血清培养基中。B将2ullipo2000溶于50ulOpti-mem无血清培养基中,混匀室温放置5min。C将AB两管混合,放置20min。转染期间,将24孔板培养基换
3、成无血清培养基,每孔400ul。将C管mix加入24孔板对应孔中,4-6小时候换成有血清培养基。Table1.CultureSharedreagentsDNAtransfectionRNAitransfection中板密度*CultureSurf.Vol.ofVol.ofDNALipofectaminevesselareaplatingdilution™2000permediummediumwell96-well0.3cm2100ul2X25ul0.2ug0.5ulcell/well0.5-2X10524-well2cm2500ul2X50ul0.8ug2.0ulcell/we
4、ll1-3X10512-well4cm21ml2X100ul1.6ug4.0ulcell/well2-3X1056-well10cm22ml2X250ul4.0ug**10ulcell/well(35mm)8-10X10560mm20cm24ml2X0.5ml8.0ug***20ulcell/dish2-3X10610cm60cm215ml2X1.5ml24ug60ulcell/dish*:中板密度根据不同细胞不同实验有所不同,这里仅提的数据仅供参考**:6孔板细胞质粒转染量1-2ug足以。***:6cmdish细胞质粒转染量4-6ug足以。
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