71无菌检查法

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1、<71>无菌检查（USP29-NF24）♦这个章节的人部分内容都和欧洲药典或FI本药典相应检测部分保持一致。有一些不一致的地方已用特殊标记（♦♦）注明。♦下述步骤被用于检查药典中规定要求无菌的是否满足其&论中相应的无菌要求。供试品的性状允许时，可以采丿IJ供试品的无菌检查中的濛舷磁來检测。如果薄膜过滤方法不能使用，则采用供试品的无菌检查'11的直接接莎法进行检测。所有的器具，除了标明的无菌器皿外，都采用苣接渎禅法进行检测°重新检测的规定条款见给翩观辭別冗因为无菌检测是一项非常严格的操作过程（必须保证无菌操作才能得到一个准确的检测结果），所以对操作人员进行

2、相关的培训和鉴定是非常重耍的。无菌检查即在无菌状态下实行。为了达到这个状态，检测的环境必须适合无菌操作。要防止检验过程中暴銅的微生物受污染。耍对无菌检验的操作坏境进行适当地取样检测和合适的控制來监控。不仅仅通过这些药典中的步骤就能确保一批产站无菌或已经灭菌。确认在无菌状态下操作或按无菌操作步骤操作则是首先需要的。当用药典中合适的药典方法检测产品中出现了微生物污染，其结果宣判该无菌检测所需方法无效，甚至是更换了操作步骤得到了不同的结果。♦额外的无菌检测信息，参见V1211培养基按以下处方制备培养基，或使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基，其能满足需气菌，

3、厌气菌，霉菌的增殖培养。培养基采用有效的程序灭菌。下面培养基适合用于无菌检查。硫乙醇酸盐流体培养基主耍用于厌气菌的培养。还用于需气菌的培养。大豆於腸蛋白汐化物侈弄基适合霉菌和需气菌的培养。硫乙醇酸盐流体培养基L-光胺酸2.5g氯化钠5.5g/5.0g葡萄糖(C6Hl2O6.H2O)0.75g琼脂，颗粒状（含水量不低于15%）5.0g酵母浸出物（可溶于水）15.0g酪蛋白胰酶消化物0.5g疏基乙酸钠或疏基乙酸酯0.3ml刃天青钠溶液（1：1000）,现配1.0ml纯水1000ml取L-光胺酸，氯化钠，葡萄糖，酵母浸出物和酪蛋白胰卿消化物混合，加热直到培养棊

4、被活化。加入疏棊乙酸钠或疏基乙酸酯，如冇必要，加1N氢氧化钠，调节PH值使灭菌后为7.1±0.2。如盂过滤，加热培养基不需要煮沸，热时滤过滤纸。加入刃天青钠溶液，混合，马上分装至合适容器中，这样在培养期间最多培养上层基颜色发生变化。配制后采用有效的程序灭菌，培养基放于无菌密闭容器中，2°〜25°储存，如果上层超过三分之一的培养基变粉红色，培养基需水浴或蒸汽加热直到粉红色消失，迅速冷却，注意防止没有灭菌的空气传入容器屮。硫乙醇酸盐流体培养基歌32.5。±2.5°培养。•选择性硫乙醇酸盐培养基配制与昴N翦酸盘漩体舞养基相同纽分的培养基，但不加琼脂和刃犬青钠溶

5、液，灭菌同上，冷却。灭菌后PH7」土0.2。在厌氧条件下培养。选择性硫乙醇酸盐培养釘.32.5。±2.5°培养。■大豆粉•酪蛋白消化物培养基酪蛋白胰酶消化物17.0g大豆粉木瓜蛋白酶消化物3.0g氯化钠5.0g磷酸氢二钾2.5g葡萄糖(C6H12O6.H2O)2.5/2.3g纯水1000ml在纯水屮溶解固体，微温加热活化培养基。培养基冷至室温，加1N氢氧化钠调PH,调节PH值使灭菌后为7.3±().2。滤清，然示分装入合适的容器，，除非需要马上使用，放于无菌密闭容器中，2°〜25°储存。•青霉素和头苞菌素在这无菌检测培养基被用于供试品的无菌检査、直接接种

6、法,唸氐硫乙醇酸盐流体培养基和大豆務弱蛋白消化细养基的配制如下°无菌状态下在每个培养基容器中接种足够数量的B-内酰胺卿以抑制供试品中大量抗生素的活性，首先通过检验产品中含青霉素或头抱菌素的抑菌活力以测定所需要的抑制抗牛•素活性的B■内酰胺酶数量。［笔记一充足的B■内酰胺酶培养基也可用于薄膜过滤测试。］在一个与无菌检测完全隔离的区域，确定合适数暈的B■内酰胺酶合并接种至培养基屮,选择下面殓证试殓中任一种方法，用不到lOOcfu的金黄色葡萄球菌J参见表格H做为挑战。必须可清楚观察到被接种的培养基中有典型的微生物生长，用以确定B-内酰胺酶的含量是合适的。♦表格

7、1.增殖检测和验证试验中适合使用的微生物菌株♦2用籐黄微球菌〈)帰生抱梭菌6ATCC9341)好氧菌金黄色葡萄菌,■ATCC653&CIP4.83,NCTC10788,NCIMB9518人肠菌群ATCC6633,CIP52.62,NCIMB8054铜绿假单胞菌*2■ATCC9027,NCTC1078&CIP82.118厌氧菌牛•砲梭菌■ATCC19404,CIP79.3,NCTC532或ATCC11437莓菌假丝酵母ATCC10231,IP48.72,NCPF3179黑館霉ATCC16404JP1431.83,IMI1490071用人肠埃希菌匕弋替金黄色

8、萄葡球菌(ATCC6633)用不产他子的代替铜绿假单胞菌J0CC84&L)［笔记