观察肺炎链球菌性肺炎的病因.doc

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1、观察肺炎链球菌性肺炎的病因…肺炎链球菌■■■研究目的：用透射电镜观察肺炎链球菌的超微结构肺炎链球菌简称肺炎球菌。1881年首次由巴斯徳及GM.Sternberg分别在法国及美国从患者痰液屮分离出。为革兰染色阳性,菌体似矛头状，成双或成短链状排列的双球菌，有毒株菌体外侑化学成分为多糖的荚膜。5%〜10%正常人上呼吸道屮携带此菌。有毒株是引起人类疾病的重要病原菌。透射电镜的工作原理透射电镜的成彖原理是由照明部分提供的有一定孔径角和强度的电了束平行地投影到处于物镜物平面处的样品上，通过样品和物镜的电子朿在物镜后焦面上形成衍射振幅极大值,即笫一幅衍射谱。这些衍射束在物镜的彖平面上相互干

2、涉形成第一幅反映试样为微区特征的电了图象。通过聚焦（调节物镜激磁电流），使物镜的象平面与屮间镜的物平面相一致，中间镜的象平面与投影镜的物平面相一致，投影镜的象平面与荧光屏相一致，这样在荧光屏上就察观到一幅经物镜、屮间镜和投影镜放大后有一定衬度和放大倍数的电了图象。由于试样各微区的厚度、原子序数、晶体结构或晶体取向不同，通过试样和物镜的电子朿强度产生茅异，因而在荧光屏上显现出rh暗亮差别所反映岀的试样微区特征的显微电了图彖。电了•图彖的放大倍数为物镜、屮间镜和投影镜的放大倍数之乘积，即皿=1/1。・Mr.Mp.磷磚酸悬滴法负染色技术负染色又称阴性染色，是相对于普通染色（称正染色

3、）而言的。负染色首先由Hall在1955年提出。Hall在病毒研究屮川磷餌酸染色示，发现图像的背呆很暗，而病毒彖一个亮晶的“空洞“被清楚地显不出来。在超薄切片的染色屮，染色麻的样品电了密度因染色而被加强，在图像屮呈现黑色。而背景因未被染色而呈光亮，这种染色称为正染色。而负染色则相反,由于染液屮某些电了密度高的物质（如重金属盐等广包埋“低电了密度的样品，结果在图像屮背景是黑暗的，而样品像”透明哋光亮。两者2间的反茅正好相反，故称为负染色。染色液的制备磷钙酸、磷钙酸钠、磷饵酸钾溶液通常用双蒸水或磷酸缓冲液配制成1%〜3%的溶液，使用时M用1mol/LM氧化钠溶液将负染色液的pH值调

4、至6.4〜7.0或实验所需的值。染色方法悬滴法用一根细滴吸管吸一滴样品悬液滴在有膜的铜网上，滴样时要防止铜网被液体吸到管上来或翻转而被污染。如果用Formvar膜时，在制好膜后，可以直接在粘于滤纸上的铜网进行负染色操作。如果用碳膜时，要用辍了夹着铜网，滴液麻静置数分钟，然后用滤纸从铜网边缘吸去多余的液体，滴上负染色液，染色1〜2分钟川滤纸吸去负染色液，再川蒸催水滴在铜网上洗1〜2次，用滤纸吸去水，待干后可用于电镜观察。干燥时，由于表面张力的作用，某些敏感的材料可能受到损伤，可用戊二醛或四氧化饿预同定。预网定在滴样Z麻进行。肺炎链球菌的超微结构染色革兰染色阳性，菌体呈矛头或瓜籽仁

5、状，直径约lum,常以钝端相对、尖端向外成双排列，无鞭毛，无芽砲。在机体内或含血清的培养基上有较厚的荚膜，人工培养后荚膜逐渐消失。革兰染色时荚膜不肴色，表现为菌体周围透明环。菌体衰老时，或由于白溶酶的产生将细菌裂解后，可呈革兰染色阴性。需氧或兼性厌氧。营养要求较高，最适温度为37°C,最适pH7.4-7.8,在血液或血清的培养基屮才能生长，形成细小圆形、隆起、表面光滑、灰白色、湿润并有草绿色溶血环的菌落，与甲型溶血性链球菌很相似。抗原构造与分型1、荚膜多糖抗原：存在于肺炎链球菌荚膜屮。根据荚膜多糖抗原性的不同，可将肺炎链球菌分为84个血清型，分别以1、2、3、4等表示Z,个别型

6、还可分成不同的亚型，如7A、7B、7C和7D亚型。其屮有20多个型别可引起疾病，以1・3型致病力较强2、菌体抗原(1)多糖：存在于肺炎链球菌细胞壁屮，为备型菌株所共有，具有种特异性。C多糖可被血清屮C-反应蛋口沉淀。在C°2+存在时，C多糖可与血清中一种称为C反应蛋白(CRP)结合，激活补体，促进吞噬细胞的吞噬功能。正常人血清屮CRP含量极微。当急性炎症时含量剧增，故用C多糖来检测CRP对活动性风湿病及急性炎症性疾病的诊断有一定意义。(2)M蛋白：具有型特异性，类似A群链球菌的M蛋白，但与菌的毒力无关致病物质1、荚膜：是肺炎链球菌主要的致病因素。有荚膜的肺炎球菌可抵抗吞噬细胞的

7、吞噬，有利于细菌在宿主体内定居并繁殖。2、肺炎链球菌溶血素：高浓度时对实验动物有致死性。对人的致病机制尚待确定。3、紫瘢形成因了:注入家兔皮内，可产生紫瘢及出血点并伴有内脏出血。紫瘢形成因了与人类肺炎球菌感染间的关系尚不明确。4、神经氨酸酶:在新分离株屮发现，能分解细胞膜糖蛋白和糖脂的N-乙酰神经短酸，与肺炎链球菌在鼻咽部和支气管黏膜上定植、繁殖和扩散有关。