鸡毒支原体的分离鉴定.pdf

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1、贵州畜牧兽医2014年第38卷第3期．15．鸡毒支原体的分离鉴定江礼捷，周会君，郝欣，钟学雨。张园园，姜成(1．吉林农业科技学院动物医学学院，吉林吉林132101；2．长春市绿园区动物疫病预防控制中心，吉林长春130062)中图分类号：$858．31文献标识码：A文章编号：1007—1474(2014)03—0015—02鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepticum，MG)会的培养基中连续传代3～5代后，取培养物0．2mL引发鸡的慢性呼吸道疾病(chronicrespiratorydis．接种支原体固体培养基中，放入铺有湿纱布的密封ease，CRD)。本研究从吉林经

2、济技术开发区鸡场烛缸中，37℃培养7～15d后，置于倒置显微镜低采集的疑似支原体感染病料中分离、培养获得一菌倍镜(10×10)下观察菌落形态，用灭菌注射器针株，经菌落形态观察、菌落红细胞吸附试验、生化特头挑取典型单菌落于2mL液体培养基中，进行传性测定及血清学鉴定等试验，证明该分离株为鸡毒代培养和鉴定。支原体(MG)，并命名为JL株。2．2菌落形态观察将分离纯化的菌株接种到不1试验材料含青霉素和醋酸铊的液体培养基中连续传代5次，然后将培养物接种到固体培养上，观察菌落形态。1．1待检材料从吉林经济技术开发区某鸡场采菌落形态观察：将分离纯化后的待检培养液0．2mL集疑似鸡毒支原体感染

3、病、死鸡的气囊、支气管、肺组织，放置于4℃冰箱中备用。接种于固体培养基中，置于密封烛缸中37℃培养1．2药品试剂猪血清、葡萄糖、1％醋酸铊、1％辅7～10d后，置于低倍镜下观察菌落形态J。酶A+半胱氨酸、青霉素、1％苯酚红、2％L一精氨2．3姬姆萨染色镜检将分离纯化后的待检培酸、糖发酵管等。养液5mL以3000r／min离心5min，收集沉淀1．3试验仪器高压蒸汽灭菌器、电热恒温干燥物。取沉淀物涂片，用甲醇固片2～5min，用箱、离心机、无菌超净工作台、气浴恒温培养箱、电子PBS(pH6．98)稀释10倍的姬姆萨染色液染色天平、水浴锅等。40min，镜检。1．4试验动物l0只3周

4、龄的健康肉仔鸡，购于2．4血清学检测平板凝集试验(SPA)：取纯培养吉林经济技术开发区某鸡场。物10mL以4000r／rain离心30min，弃上清，用生2试验方法理盐水0．5mL重悬菌体，作为抗原液。滴2滴抗原液于载玻片上，每滴抗原液依次加入等量的生理盐2．1病原菌的分离培养及纯化将所采病料组织用鸡毒支原体培养液清洗后，剪碎组织，按1：10加水、标准MG抗血清，充分混匀后，3rain内判定结入支原体液体培养基，37cc振荡培养数天，直到培果，液滴中出现明显的粗大颗粒者为阳性。并同时养基变成黄色。取少量变黄培养液进行杂菌污染检设标准的MG阳性对照¨3J。查，确定无杂菌生长时，将变

5、黄的可疑培养物在相同2．5生长抑制试验将生长良好的液体培养物0．1mL接种于固体培养基中，使其均匀铺于培养基收稿日期：2014—01—16基金项目：吉林农业科技学院大学生创新项目[合同号034]表面。待接种物被培养基稀释以后，将预先浸有作者简介：江礼捷(1992一)，男，在读本科，动植物检疫专业。通讯作者：姜成(1969一)，硕士研究生，高级实验师。0．02mL阳性血清的滤纸片置于接种区中心，同时·16·贵州畜牧兽医2014年第38卷第3期设不加阳性血清的滤纸片作对照，37℃培养48h。3．5生化特性测定见表1。抑菌环直径2mm以上者为阳性。表1分离菌株生化反应结果2．6菌落血细

6、胞吸附试验取0．5％鸡新鲜红细胞5mL加入长有菌落的琼脂平板上，37℃作用30rain，用生理盐水轻轻冲洗3次，然后在低倍镜下3．6致病性检验取菌株的肉汤培养物(0．2mL／只)观察菌落周边有无红细胞吸附。气囊接种的5只3周龄健康肉仔鸡，出现咳嗽、精神2．7生化特性测定进行糖发酵试验、精氨酸水解沉郁、食欲下降等症状，处死后剖检发现肺部、气囊、试验、四唑氮还原试验、NAD和固醇需要试验。法氏囊出现不同程度混浊病变。另外5只注射生理2．8致病性检验取菌株的肉汤培养物(0．2mL／只)盐水(0．2mL／只)的对照组则无发病症状。气囊接种5只3周龄的健康肉仔鸡，另外5只注射生理盐水(0．

7、2mL／只)作对照。逐日观察其有无呼4结论与讨论吸道症状，当出现呼吸道症状时，剖杀观察气囊、肺4．1从吉林经开地区疑似慢性呼吸道病(CRD)的部病变。鸡场分离到1株支原体菌株，经菌落形态观察、红3试验结果细胞吸附试验、生化特性测定及血清学鉴定，证明该分离株为鸡毒支原体(MG)，并命名为儿株。3．1菌落形态观察将固体培养基在低倍镜下观4．2支原体对培养基的pH值比较敏感，尤其在液察，菌落呈圆形，边缘整齐，透明，表面光滑，菌落中体培养基中，当颜色变为棕黄色或黄色时，应尽快转心色暗致密