HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究-论文.pdf

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1、甲国痢原生彳刁_子芾心2013年9月_弟卺帚IU期JournalofPathogenBiologyOctober2013，Vo1．8，No．10·869··论著·HepG2细胞表达蛋白HCVC体外活化肝星状细胞的研究*孙英梅，李文杰，陶剑平～(1．青岛市妇女儿童医院新筛实验室，山东青岛266034；2．中山大学中山医学院，广东广州510080)【摘要】目的舰察HCV核心蛋白对肝星状细胞活化及合成细胞外基质的影响，为进一步研究HCV核心蛋白的致肝纤维化机制提供实验依据。方法采用双抗体夹心ElISA检测HepG2一HCVC细胞株培养液中TGFq31的

2、表达。用HepG2一HCV—C和HepG2两株细胞培养5d的上清液培养人肝星状细胞系Ix2细胞，同时用DMEM培养IX一2细胞作对照，分别制备细胞爬片，采用免疫细胞化学染色(ICC)法检测IX～2细胞中人平滑肌肌动蛋白(a—SMA)、IV型胶原(ColⅣ)、结缔组织生长冈子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)的表达；采用双抗体夹心EIISA检测I一2细胞1～6d培养上清液中人ColⅣ、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层粘连蛋白(LN)的表达。所有数据采用SPSS11．0统计软件进行统计分析。结果双抗体夹心EIISA检测HepG2一HC

3、V—c细胞1～6d培养液中的TGFH1量为(11O．O0±l11．45)pg／ml～(935．O0±2I．36)pg／ml，HepG2细胞为0～(124．16±11．81)pg／ml，差异有统计学意义(F一21984．81，P

4、epG2)组和Ix一2(DMEM)组(均P

5、ntheactivationofhepaticstellatecellsinvitrobyHepG2cellsexpressingHCVcoreproteinSUNYing—mei，LIWen—jie，TAOJian—ping(1．QingdⅡ0WomennndChildre”sHo￡n￡，Qingdn0266034，China；2．ZhongshanSchoolofMedicine，SunYatsenUniversity，Guangzhou510080，China)[Abstract]ObjectivesToobservetheimpactof

6、HCVcoreproteinontheactivationofhepaticstellatece11s(HSCs)andsynthesisofextracellularmatrix(ECM)inordertoprovideanexperimentalbasisforfurtherstudyofthemechanismoffi—brogenesisinducedbyHCVcoreprotein．MethodsTheexpressionofTGFB1byculturedHepG2一HCVCandHepG2cellswasdeterminedusing

7、doubleantibodysandwichElISA．Inaddition，thesupernatantofthetwoce11lineswasusedtocultivateLX～2cells．LX2cellsculturedwithDMEMservedasacontro1．Immunocytochemistry(ICC)wasusedtode—tecttheexpressionofa～SMA，ColⅣ，CTGF，andFNinIX一2cellsculturedfromthetwocellslinesandcontrolIX一2cellscul

8、turedwithDMEM．DoubleantibodysandwichELISAwasusedtodetecttheexpressio