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《肝纤维化大鼠肝星状细胞和肝细胞胶原表达特征的实验研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、94中西医结合肝病杂志2年增刊肝纤维化大鼠肝星状细胞和肝细胞胶原表达特征的实验研究张斌赵姻王灵台陈建杰,上海中医药大学附月.光医院(上海20021):、摘要目的探讨肝里状细地和肝细班在肝纤维化时过贵合成扦胜胶原的作用特征及中药杭纤t方减少胶原生成.。:,的作用机理方法以二甲基亚浦胺(DMN)复创大盆扦纤雄化动物棋型采用胶原睁消化法经门铃脉灌注005%W.,,型胶原璐灌流液消化扦胜分敬肝胜细她分别以18%(w八)Nycodenz和492%(V/V)琳巴细胞分离液为介质行,.密度样度离心分离正常大盆和造模大民肝胜星状细胞和肝
2、细施按TRIozl试刘盒提供的方法抽提大筑肝胜组帜和细,,,a:、a:、a:rerRNA以地高辛标记的(I)(互)(N)前Nothn饱总经甲醛史性凝胶电泳怜印至尼龙膜胶原探针行,、a:、a:a:.印连分于杂文检洲里状细厄奸细施和奸胜组奴(I)(一)和(N)贡胶原mRNA的表达特征对连模大,..:氛以杭纤i方药液灌可以秋水栖城治疗对服组大成治疗后再分离1状细地和肝细胞行胶原基因表达检洲结果正Q,、。:。:,常大成肝胜(I)(,)和(N)首胶原mRNA均有少全表达造模组大双肝胜前胶原mRNA表达全明显增,。:a:,a:。加(
3、I)与(I)前胶原mRNA表达全接近(N)谕胶原mRNA稍低正常组大民肝星状细施3种前胶原粉,,.mRNA少!表达I里和,里前胶原mRNA表达t接近柑型首胶原mRNA校少造模组大民!状细地3种前胶原,,,.、、mRNA表达姗加其中以I型mRNA表达稍多.型mRNA次之N里mRNA浪少正常姐大筑肝细地未见I,,。、N里首胶原mRNA阳性杂交信号造模组大友肝细艳别有少圣表达枕纤复方对奸细地星状细施和肝胜姐奴价、。.、。:,。(I)(I)(VI)贡胶原mRNA表达均有抑创其中I和VI型贡胶原mRNA的降低水平杖秋水仙城组明1结
4、:,,论正常肝细胞不表达胶原肝纤雄化时肝细地与星状细胞共月参与了肝胜胶原的生成过程杭纤复方同时影响肝胜间,。质细胞和实质细胞胶原基因的表达减少肝胜胶原的生成:关挂词肝如胞星状细地胶原基固挽纤复方,、、,肝纤维化的形成主要表现在胶原等细胞外荃质(ECM)合杭纤复方(由黄蔑丹参郁金等药物组成由曙光医院制荆,、,,a成过t和降解减少其中以胶原的过度合成沉积为主几乎室制成口服液每ml含29生药)和秋水仙喊(反vr公司产.。、,肝脏各种细胞都参与了胶原的生成过程星状细胞和肝细胞可品)治疗4周分别取肝组织或分离肝星状细胞肝细胞抽。,
5、n能是生成肝脏胶原的主要细胞我们从分子转录水平研究大良提肝组织或细胞总RI订A进行Norther印迹杂交检侧胶原基,。肝星状细胞和肝细胞胶原荃因表达的特征探讨抗纤复方抗肝因表达.。,纤维化的作用机理14大民肝星状细施的分离l1[大良麻醉后开腹行门静脉.,,1材料与方法擂管灌流005%VI皂胶原醉灌流液至肝脏软化后取下肝脏.ar,,,,、,11实脸动物Wist雄性大眼体重25。~3009由中科院剪碎肝组织用胶原辞消化液再次消化细胞悬液过滤离心。,v:,上海实脸动物中心提供以二甲基亚硝胶(DMN)造模按然后用18%(w/)N
6、ycen行密度梯度离心取界面细胞用od..ln,,a,nlogg体重的剂量腹腔注射。5%DMN每天1次每周连Hnk,s液悬浮4,C50097mi离心洗涤k/..,,.105W续3天共3周稼定1周后结束造模5大鼠肝细胞的分离大鼠经门静脉滋流0%型胶原.、rase、eenz、,,、,12主剂N型胶原醉PonENyDMN均醉灌流液消化肝脏分散肝细胞细胞悬液过旅离心洗涤后要试od.a.s、、,为iSgm公司产品限制性内切醉PtlEeoRIHindl为用492%(V/V)淋巴细胞分离液行密度梯度离心纯化肝细胞reaz,Pomg公司
7、产品,TRIol试剂盒为GIOBRL公司产品,顶冷的MEM培养液浸柔悬浮肝细胞4℃soorpm1min离心BCas-。QIAGEN质粒抽提试剂盒(QIAGENPlmidMidiKit)为Ql洗涤.AGEN公司产品,elExtraetionni16Northern。DNA探针柱式胶回收试荆盒(GMi印迹分于杂交检侧将含有前胶原;、,、.Kit)为华顺生物试剂公司产品地高辛高效标记DNA及检侧的重组质粒转化扩增经限制性内切醉醉切回收鉴定后.、s、、a:、a:、Q,试刘盒DIGEayHyb杂交液为3〕EHRINGER得到分别为
8、67obp7osbp26kb长度的(I)(I)。,,MANNHEIM公司产品(vI)前胶原探针用地高辛高效标记DNA试剂盒标记制备.。:、cDNA13动物分组处理随机将大成分为4组正常对照组造模前胶原探针肝组织或细胞TRzIol试荆盒方法抽提组、,,,,组抗纤复方和秋水仙碱治疗组造模组和2个治疗组大限制织或细胞总RN
