染色体培养染色步骤

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1、接种接种后放入37°C恒温培养箱中72小时↓加入秋水仙素2-8滴，放入37°C恒温培养箱中1.5小时。(秋水仙素：100ml0.85%生理盐水加入1mg秋水仙素原液)↓低渗去上清液加kcl溶液低渗，然后放入37°C恒温培养箱中30-40分钟。（低渗液0.075kcl溶液由5.587gkcl+1000ml蒸馏水室温保存，用之前半小时放置水浴箱37度温浴。）↓预固定加入1ml固定液混匀后，离心（2000转，10分钟）弃上清↓固定液固定加入固定液6-8ml（甲醇：冰醋酸=3;1），混匀，离心弃上清。重复2次，留0.5ml细胞悬液。重

2、复两次。↓染色体扩散滴片冰玻片滴片，快速，置75°C烤片3小时，室温下放置冷却。玻片提前半小时放置冰箱。↓显带染片胰酶显带15-55s，生理盐水漂洗，吉姆萨染色5分钟。试片，条件符合后，分批染色。胰酶：2.5g+0.85%生理盐水1000ml溶解56度除菌三次↓核型分析缓冲液1缸1.80.8mlNa2HPO4+19.2mlKH2PO4混匀后加入适量胰酶（0.5ml）再用NaOH用ph试纸调节到7.2-7.4之间。2.40.4mlNa2HPO4+9.6mlKH2PO4混匀后加入适量胰酶,调节ph到7.2-7.4之间漂洗液2缸0.

3、85%氯化钠溶液染液1缸蒸馏水50ml+1管吉姆萨染液大约2ml混匀Na2HPO4=4.75g粉末+500ml蒸馏水KH2PO4=4.535g粉末+500ml蒸馏水NaCL=4.25g粉末+500ml蒸馏水洗涤液配制弱酸：重铬酸钾50g+蒸馏水1000ml加温溶化冷却后缓缓注入浓硫酸90ml强酸：重铬酸钾120g+蒸馏水1000ml加温溶化冷却后缓缓注入浓硫酸160ml一定要用塑料盆配制。吉姆萨染液配制吉姆萨粉末1g+甘油（丙三醇）66ml研磨混匀，然后放置55-60℃水浴2h，冷却后加入甲醇66ml混匀，过滤后棕瓶分装计算：

4、大研钵粉6g+甘油400ml+甲醇400ml小研钵粉3g+甘油200ml+甲醇200ml低渗液配制低渗液0.075Mkcl溶液由5.587gkcl+1000ml蒸馏水室温保存，用之前半小时放置水浴箱37度温浴秋水仙素配制100ml0.85%生理盐水加入1mg秋水仙素原液，避光冷藏。固定液甲醇：冰醋酸=3;1pHM/15磷酸氢二钠（Na2HPO4）（9.47克/升）M/15磷酸二氢钾（KH2PO4）（9.08克/升）5.88.092.05.99.990.16.012.287.86.115.384.76.218.681.46.32

5、2.477.66.426.773.36.531.868.26.637.562.56.743.556.56.849.650.46.955.444.67.061.138.97.166.633.47.272.028.07.376.823.27.480.819.27.584.115.97.687.013.07.789.410.67.891.58.57.993.26.88.094.75.38.195.84.28.297.03.0