现代色谱分析hplc1.ppt

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1、高效液相色谱法高效液相色谱法的特点高效液相色谱法与经典液相色谱法原理相同，无本质区别。1.新型高效输液泵，使分析时间缩短2.高效固定相，分离效能高，选择性好3.高灵敏度检测器高效液相色谱法的应用范围1.高沸点、热不稳定、分子量大、不同极性的有机物；2.生物活性物质、天然产物；3.合成与天然高分子涉及石油化工、食品、药品、生物化工、环境等领域。80％的化合物可用HPLC分析。HPLC的局限性1.溶剂消耗大，成本高于GC,梯度洗脱的操作也比GC的程序升温复杂。2.缺少通用型检测器。近年来ELSD应用日益增多，有望成为通用型检测器，但稳定性尚需提高。3.HPLC不能代替GC

2、，对于柱效要求高的分析，仍需GC，如石油产品。4.HPLC不能代替中、低压色谱，如受压易分解变性的具有生物活性的生化样品。高效液相色谱仪高效液相色谱进样口检测器色谱图色谱柱溶剂泵混合器(HPLC)流动相及贮液瓶1.贮液瓶应耐腐蚀，用玻璃、不锈钢、氟塑料或特种塑料。2.溶剂使用前必须经过0.45μm滤膜过滤，过滤用液相色谱专用滤膜或4号微孔玻璃漏斗。流动相的脱气1.氦脱气法2.加热回流3.抽真空4.超声脱气5.在线脱气HP1100on-linedegasser12mlSolenoidvalve高压输液泵要求：1.泵体材料耐腐蚀。优质耐酸不锈钢，聚醚醚酮（PEEK)2.耐

3、高压。40～50MPa3.输出流量范围宽。填充柱:0.1~10ml/min(分析型），1～100ml/min;微径柱：10~1000μl/min4.输出流量稳定，重现性好。恒流泵－注射螺杆泵注射螺杆泵的优缺点优点：流量稳定，无脉动缺点：（1）液缸体积有限，约100～150ml,不利于连续工作。（2）不能用于梯度洗脱。恒流泵－往复泵单元泵工作原理AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)DamperPurgevalveSealPistonBallScrewDriveMotorwithEncoderGea

4、rOutletBallValveActiveInletValve往复泵的优缺点1.可在高压下连续输液2.液缸容积小（几十～几百微升），适合于梯度洗脱3.存在脉动4.柱塞与流动相直接接触，易造成污染恒压泵又称气动放大泵过滤器脉动阻尼器梯度洗脱－低压梯度四元泵工作原理AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired)VacuumChamberMCGVAIVOBVDamperPurgeValveWastetoinjectiondevicefromsolventbottlesMCGV比例阀AIV主动阀OBV单向阀梯度

5、洗脱－高压梯度梯度曲线进样装置－停流进样ToWasteSampleLoop(FixedVolume)FromToColumnSampleSyringeLoadInjectToColumnPumpFromPumpToWaste手动进样器－六通阀进样装置－六通阀进样进样装置－自动进样器Agilent1100系列自动进样器Precision102550100色谱柱1.柱材料内壁抛光、钝化的不锈钢管2.规格a.内径4.6或3.9mm，柱长10～30cm,5~10μm填料,柱效5000~10000/mb.内径4.6或3.9mm，柱长5～10cm,3～5μm填料c.内径0.5~2

6、mm微填充柱d.内径30～50μm的毛细管柱湿法装柱紫外检测器－固定波长检测器紫外检测器－可变波长检测器紫外检测器－光二极管阵列检测器DAD三维色谱图折光指数检测器电导检测器荧光检测器蒸发激光散射检测器电化学检测器利用氧化还原反应的检测器氧化、还原反应氧化还原AB+e-QuinoneOOOHOH+2H++2e-Hydroquinone库仑阵列检测器高效液相色谱的一种检测器属于电化学一类由数个多孔石墨电极串连组成在一次试验中，可同时提供多个氧化还原反应电势库仑阵列电池示意图Channel1Channel2Channel3Channel4CounterReferenceF

7、ritOutletInletChromatographicandVoltammetricResolution12.012.513.013.514.014.515.00.000.501.001.502.00Retentiontime(minutes)Response(µA)CHLOROGENICACIDCATECHIN4HPACVANILLICACIDCAFFEICACIDSYRINGICACID色谱工作站ChemStation(Agilent1100)Empower(Waters)CLASSVP(Shimadzu)杭州英谱N-2000千谱ZD－1（本