辣椒素对肝星状细胞增殖活化的抑制作用.pdf

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1、中华肝胆外科杂志2014年4月第20卷第4期ChinJHepatobiliarySurg，April2014，Vo1．2oINo．4·论著摘要·辣椒素对肝星状细胞增殖活化的抑制作用吕天昊符均惠段文彪张启瑜俞富祥肝纤维化是各类慢性肝病共同的病理学基础，(tissueinhibitorsofmetalloproteinase1，TIMP．1)及肝星状细胞(hepaticstellatecells，HSCs)的活化与增内参GAPDH的引物。利用实时PCR技术，分别测殖是肝纤维化发生发展的中心环节¨。辣椒素是定各组细胞中上述基因的mRNA表达情况。辣椒中的主要辛辣

2、成分，具有多种生理活性，本研究6．流式细胞仪检测辣椒素对HSCs凋亡的影探讨了辣椒素对HSCs活性和纤维化相关基因表达响：按前述方法在6孔板中根据不同辣椒素浓度分的影响组，作用24h后，收集细胞，根据凋亡试剂盒的说明操作。材料与方法7．蛋白印迹法检测辣椒素调节HSCs凋亡通路1．材料及试剂：HSCs．T6细胞系购自中科院上相关蛋白的表达：按前述方法在6孔板中根据不同海细胞库。辣椒素购自美国Sigma公司。CCK一8购辣椒素浓度分组，培养24h后，提取各培养体系自日本同仁化学公司。bc1．2、bax、cyt．e一抗购自美HSCs的蛋白，按蛋白印迹法检测相关目

3、标蛋白的表国CST公司。达。2．DCFH．DA法检测辣椒素对HSCs中活性氧8．统计学处理：采用SPSS13．0统计学软件。产生的影响：在96孔板中培养HSCs，每孔含细胞所有数据以均数±标准差(x±S)表示。两样本均数5×10个。加入辣椒素(终浓度分别为0、50、100、间比较用t检验。多个样本均数间的比较用方差分150、200I~mol／L)培养24h。然后，加入DCFH-DA析。P<0．05为差异有统计学意义。溶液，置孵箱孵育0．5h。荧光显微镜下观察荧光亮结果度。3．CCK．8比色法检测辣椒素对HSCs增殖的影1．辣椒素抑制HSCs中活性氧的产生：

4、与对照响：按前述方法分组加入不同浓度辣椒素，每个浓度组比较，随着培养液中的辣椒素浓度的增加，HSCs设5个复孔。以辣椒素浓度为0mg／L的HSCs为中活性氧的产生呈明显递减趋势。空白对照组，培养24h后，根据CCK．8试剂盒说明2．辣椒素抑制了HSCs的增殖：与对照组比较，操作。随着培养液中辣椒素浓度增加，HSCs增殖度明显下4．蛋白印迹法检测辣椒素对HSCs活化的影降。差异具有统计学意义(P<0．05)。详见表1。响：按前述方法分组加入不同浓度辣椒素。培养表1各培养体系中HSCs的细胞增殖程度比较48h后，在各培养体系HSCs中加入细胞裂解液。组别吸光度

5、分别经离心、定量、电泳、转膜、封闭、仅．SMA抗体0Ixmol／L1．35士O．08(1：100)孵育后，化学显影、定影。用凝胶图像处理50wmoL／L1．13±0．14系统分析目标带的灰值。100b~mol／L1．044-0．07150txmol／L0．844-0．185．实时PCR法检测辣椒素对HSCs纤维化相200~moUL0．38±O．03关基因表达的影响：按前述方法根据不同辣椒素浓度分组。设计大鼠基质金属蛋白酶(matrixmetallo—3．辣椒素抑制HSCs中01．SMA的表达：与对照proteinase1，MMP一1)、基质金属蛋白酶组织抑

6、制物组相比较，随着培养液中辣椒素浓度增加，HSCs中DOI：10．3760／cma．j．issn．1007—8118．2014．04．020仅．SMA表达水平明显下降，差异具有统计学意义基金项目：浙江省重中之重外科学组资助(浙教高科2008—255)(P<0．05)。作者单位：325000浙江省温州医科大学附属第一医院肝胆胰4．辣椒素调节HSCs中MMP-1及TIMP-外科通信作者：俞富祥，电子信箱：yfxbmu@163．com1mRNA的表达：与对照组比较，随着培养液中辣椒中华肝胆外科杂志2014年4月第2O卷第4期ChinJHepatobiliaryS

7、urg，April2014，Vo1．20，No．4·3l3·素浓度增加，HSCs中MMP一1mRNA表达未见明显变HSCs经刺激后激活并增殖，激活的HSCs分泌过量化(P>0．05)，但TIMP一1mRNA／MMPmRNA的比值的细胞外基质导致肝纤维化的形成。由此可见，针却呈降低趋势，差异具有统计学意义(P<0．05，对HSCs的治疗是预防和治疗肝纤维化的关键环图1)。节。5．辣椒素促进了HSCs的凋亡：随着辣椒素浓辣椒素是辣椒中的主要辛辣成分。辣椒素具有度的升高，HSCs形态明显皱缩变小，细胞数目减少，多种生理功能，如抗炎、抗氧化、抗肿瘤等的作凋亡坏死明

8、显增加。流式细胞仪检测显示，随着培用J。辣椒素的抗氧化特性，使它具