金银花中产绿原酸内生真菌的分离与鉴定.pdf

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1、河南农业科学，2014，43(7)：107—111JournalofHenanAgriculturalSciences金银花中产绿原酸内生真菌的分离与鉴定冷慕婵，董诚明，乔毅琳，叶海东(河南中医学院药学院，河南郑州450000)摘要：以不同产区金银花的不同部位为材料，采用组织块法对金银花内生真菌进行分离鉴定，并结合TIc法和HPIC法对菌株发酵液进行定性分析。结果表明，共分离得到内生真菌8O株，分属于5目、5科、1O属，筛选出3株产绿原酸的菌株，均属于链格孢属。金银花中存在着丰富的内生真菌，不同产区及不同部位间内生真菌的种类和数量均存在差异，河南新密产绿原酸活性菌株较多。关键词：金银花；内生真

2、菌；绿原酸；链格孢属中图分类号：$567．79文献标志码：A文章编号：1004—3268(2014)07—0107—05IsolationandIdentificationofEndophyticFungiProducingChlorogenicAcidfromLonicerajaponicaLENGMu—chan，DONGCheng—ming，QIAoYi—lin，YEHai—dong(CollegeofMedicine，HenanUniversityofTCM，Zhengzhou450000，China)Abstract：TheendophytiCfungifromdifferentpar

3、tsofLonicerajaponicafromdifferentregionswereisolatedandidentifiedbytissueexplantmethod，andthefermentationbrothswereanalyzedbyTICandHPLCmethod．Theresultsshowedthat80endophyticfungiwerefound，whichbelongedtofiveorders，fivefamilies，tengenera，andthenthreeendophyticfungiproducingchlorogenicacidwerescreene

4、dout，whichbelongedtoAlternaria．TheendophyticfungiwererichinLonicerajaponica，thereweredifferencesintheamountandvarietybetweenthedifferentregionsanddifferentpartsofLonicerajaponica，andmorebacterialstrainswhichcouldproducechlorogenicacidwerefromXinmiinHenanprovince．Keywords：Lonicerajaponica；endophyticf

5、ungi；chlorogenicacid；Alernaria金银花(LonicerajaponicaThunb)为忍冬科多或细胞间隙，对植物不引起可见病症的真菌或细年生落叶或半常绿藤本植物，以干燥花蕾或带初菌]。相关研究表明，植物内生真。菌可以产生与开的花[1]为药用，具有清热解毒、散风消肿等功宿主植物相同或相似的活性成分，如从红豆杉、长效，为我国常用大宗中药材之一，含有丰富的天然春花、银杏等植物中分离出产活性成分的内生真活性成分，以挥发油、有机酸和黄酮类为主，其中菌[3]。另外，李瑾等从金银花中分离出具有抑绿原酸为金银花的主要有效成分。目前获取绿原菌活性的细菌菌株，但是关于金银花内生真菌的酸

6、的主要途径是从金银花花蕾中分离提取，但含研究较少，鉴于此，从不同产地金银花的不同部位量较低。植物内生菌是指在其生活史的一定阶段中分离纯化内生真菌，旨在筛选出产活性成或全部阶段生活于健康植物各种组织和器官内部分——绿原酸的菌株。收稿日期：2O14一O3—20基金项目：郑州市科技攻关项目(0910SGYS33391—6)作者简介：冷慕婵(1988一)，女，湖北大悟人，在读硕士研究生，研究方向：地黄内生真菌及其次生代谢产物。E—mail：lengmuchan915@163．corn*通讯作者：董诚明(1963一)，男，内蒙古四子王旗人，教授，主要从事药用植物学及中药材规范化种植研究。E—mail：d

7、cm663@sina．corn108河南农业科学第43卷接至装液量为5OmL的150mI三角瓶中，28℃、1材料和方法120r／min培养5～7d，备用。将发酵好的内生真1．1材料菌发酵液10000r／min离心10min，过滤菌丝，菌内生真菌分离所用金银花，分别采自河南新密丝超声破碎，滤液及菌丝用乙酸乙酯萃取，萃取液加市、封丘县，山东平邑县、河北巨鹿县，具体采样时间热浓缩至干，甲醇溶解。及地点见