中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定-论文.pdf

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1、黑龙江农业科学2014(9)：100～103HeilongjiangAgriculturalSciences中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定殷东林，孙伟，王锐丽(信阳农林学院，河南信阳464000)摘要：为了开发生产紫杉醇的新途径，以中国红豆杉根、茎、叶为试验材料，对其中产紫杉醇的内生真菌进行分离和鉴定。结果表明：从中国红豆杉中共分离出10株内生真菌，在PDA液体培养基中发酵后经薄层层析法检测，出2株能够产生紫杉醇，对产紫杉醇的菌株进行形态学鉴定表明，其中一株为青霉属，另一株为芽枝霉属。关键词：中国红豆杉；紫杉醇；内生真菌；薄层层析；鉴定中图分类号：Q949．3

2、2；$791．49文献标识码：A文章编号：1002—2767(2014)09—0100—04紫杉醇(paclitaxel，PTX)最早是由wani国红豆杉，取其根、茎和叶作为试验材料。等口从短叶红豆杉(Taxusbrewfolia)的树皮中1．1．2器材手术剪、手术刀、接种针、酒精灯、分离得到的，其具有天然抗癌活性。XFS一30CA电热式压力蒸汽灭菌器(浙江新丰医目前紫杉醇的主要来源仍是从天然红豆杉属疗器械有限公司)、SW—CJ一2F型超净工作台(苏植物组织中提取。由于紫杉醇在该属植物的树皮州净化设备有限工司)、FA2004型电子天平(上中含量极低，而且红豆杉又是国家保

3、护级的濒危海越平科学仪器有限公司)、DNP一9052型恒温培物种，靠从红豆杉组织提取紫杉醇不能满足市场养箱(宁波东南仪器有限公司)、RE52—86A型旋需求，为了解决紫杉醇药源紧缺现状，国内外学者转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、KDC一140HR型高速冷冻离心机(安徽中科中佳科学仪器有限在紫杉醇的化学合成和红豆杉的组织细胞培养等公司)、JY92一lI型超声波细胞粉碎机(宁波新芝生方面进行了许多研究，并取得了一定的成果，但是物科技股份有限公司)、层析缸、SHB—B95A型循生产的紫杉醇成本昂贵，目前还没有工业化生产环水式真空泵(郑州长城科lT贸有限公司)、布氏的价值。漏斗

4、和UB100i型显微镜(重庆奥浦光电技术有Stierle与Stroble_2首次报道了从太平洋紫限公司)。杉树中分离出可产紫杉醇的内生真菌(Taxomy—1．1．3试剂PDA培养基、无菌水、0．1升汞cesandreanae)，提供了一个可能生产紫杉醇的新溶液、葡萄糖、75酒精、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、途径。利用微生物发酵生产紫杉醇具有内生真菌GF254型硅胶、三氯甲烷、乙腈、浓硫酸、香草醛生长迅速、易于培养、可以在发酵罐中进行工业化和紫杉醇标准品J$90177—20mg(纯度为98)。生产，且所用的培养基成本较低等诸多优点。因1．2方法此，筛选产紫杉醇内生真菌，用微生物

5、发酵的方法1．2．1中国红豆杉内生真菌的分离与纯化(1)生产紫杉醇，是解决药源问题的有效途径。研究外植体的处理。将采集来的中国红豆杉的根、茎、从信阳地区的中国红豆杉植物组织中分离得到2叶先放到洗衣粉溶液中浸泡3Orain，并用细毛刷株产紫杉醇的内生真菌，并对其进行鉴定。刷去表面污垢，然后在自来水中冲洗20min。冲1材料与方法洗完成后转移至超净工作台上，用无菌滤纸吸干，1．1材料然后用75乙醇消毒30S，用无菌水冲洗2～31．1．1树种信阳本地生长的六年生以上的中次，再用0．1升汞溶液消毒8min，再用无菌水冲洗3～5次，用手术刀将消毒后的根、茎、叶切成收稿日期：201

6、4-04—240．5cm的小段，并从中间剖开备用。(2)接种。第一作者简介：殷东林(1983一)，男，河南省潢JI『县人，硕士将处理好的中国红豆杉的根、茎、叶接种于PDA讲师，从事生物技术的研究。Email：yd1669@126．corn。固体培养基平板中，于28℃的恒温培养3～5d，1OO9期殷东林等：中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定谍中豸●改蛾表1产紫杉醇内生真菌菌株鉴定结果枝霉属。芽枝霉属的菌株在改良的CPDA液体Table1Identificationresultsofendophyticfungi培养基中生长较快，产率稳定，有利于通过驯化、诱变育种及优

7、化发酵条件来提高紫杉醇的含量，以达到工业化生产的要求。参考文献：[1]WaniMC，TaylorHL，MonrocF，eta1．Plantantitumora—gentVI：TheIsolationandstructureoftaxol，anovelantile—ukemicandantitumoragentfromTaxusbrebi3结论与讨论．／olia[J]．J．Am．Chem．Soc．，1971，93：23252327．目前国内外学者已经从红豆杉中分离出了多E2]StierleA，StrobelG，StierleD．Taxola