DB33∕T 2183-2019 家蚕核型多角体病抗性鉴定方法.pdf

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1、ICS65.020.30B40DB33浙江省地方标准DB33/T2183—2019家蚕核型多角体病抗性鉴定方法Regulationofidentificationforsilkwormnuclearpolyhedrosisresistance2019-01-15发布2019-02-15实施浙江省市场监督管理局发布DB33/T2183-2019前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由浙江省农业农村厅提出。本标准由浙江省种植业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：浙江大学蚕蜂研究所、浙

2、江大学农业技术推广中心、浙江省农业技术推广中心、浙江省蚕种质量检验检疫站、浙江省农业科学院蚕桑研究所、桐乡市蚕业有限公司、浙江省种植业管理局。本部分主要起草人：鲁兴萌、周金钱、邵勇奇、楼霞、赵新华、谷利群、王永强、徐杰、张三妹、黄衍峰。IDB33/T2183-2019家蚕核型多角体病抗性鉴定方法1范围本标准规定了家蚕核型多角体病抗性鉴定的术语和定义，家蚕核型病毒多角体试验用悬浮液的制备、计数及保存，半数致死浓度测定，抗性鉴定评价。本标准适用于家蚕一代杂交种的核型多角体病抗性评价。2规范性引用文件下列文件

3、对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定DB33/T2019蚕种生产技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1家蚕核型多角体病病毒bombyxmorinuclearpolyhedrosisvirus为杆状病毒科、真杆状病毒亚科、核型多角体病毒属的一种。3.2家蚕核型多角体病病毒多角体bombyxmorinuclearpolyhedros

4、isvirusandinclusionbody家蚕核型多角体病病毒在家蚕体内繁殖后，形成包埋了大量病毒的多角体，在生物光学显微镜下呈六角形，并具有较强折光性。3.3家蚕核型多角体病silkwormnuclearpolyhedrosis核型多角体病病毒在家蚕体内大量繁殖，蚕体呈乳白色、体躯肿胀、狂躁爬行、体壁易破典型病征，或致死的病害。1DB33/T2183-20193.4半数致死浓度medianlethalconcentration（LC50）在规定时间内，通过添食攻毒感染，使2龄家蚕半数死亡所需的病毒

5、多角体浓度。3.5攻毒challengetest以人工添毒的方法，将病毒多角体悬浮液均匀涂抹于桑叶背面，喂饲家蚕使之感染。3.6抗性指数resistanceindex用于衡量参试蚕品种抗性的指数，以参照品种LC50平均值为100R。4家蚕饲养按DB33/T2019中简化催青的要求催青，常规饲养至2龄起蚕。5家蚕核型病毒多角体试验用悬浮液的制备、计数及保存5.1悬浮液的制备5.1.1添食6将纯化的病毒多角体，用蒸馏水配成1×10个/毫升浓度的攻毒液。取3片大小约10cm×10cm清洁桑叶，用脱脂小棉球蘸取

6、5ml，均匀涂抹在每片桑叶背面，喂饲100头4龄起蚕，基本食净后(约12h)，改用清洁桑叶喂饲。在24℃～25℃的温度下，饲养7d～10d备用。5.1.2制备从饲养的攻毒蚕中，选择有体色乳白和体躯肿胀典型病征，但尚未出现狂躁爬行病症和皮破之前，用剪刀从病蚕的腹足或尾角收集其体液，经2层脱脂纱布过滤，然后将滤液用3000r/min离心10min，弃上清；沉淀用无菌生理盐水充分悬浮后，再用3000r/min离心10min，弃上清；重复离心3次～5次，至沉淀呈较为均质的乳白色，再用少量无菌生理盐水充分悬浮，即

7、成病毒多角体悬浮液。5.2病毒多角体的计数9用血球计数板计数病毒多角体悬浮液中多角体的数量，并用无菌生理盐水调成1×10个/毫升的病毒多角体悬浮液母液，直接使用或置4℃冰箱内备用。5.3病毒多角体悬浮液的保存5.3.1保存方法2DB33/T2183-2019将病毒多角体悬浮液置4℃保存。5.3.2保存时间病毒多角体悬浮的有效保存时间为≤2年。6半数致死浓度测定6.1攻毒用多角体悬浮液的配制998将病毒多角体悬浮液母液（1×10个/毫升）用无菌生理盐水稀释成1×10个/毫升、1×10个/毫升、7651×1

8、0个/毫升、1×10个/毫升和1×10个/毫升的稀释病毒多角体悬浮液。也可采用类似的其它10倍梯度方法制作稀释病毒多角体悬浮液。病毒多角体悬浮液母液及梯度稀释液的有效保存时间为≤1个月。6.2攻毒对象和设区6.2.1攻毒对象测试蚕品种、对照蚕品种的2龄起蚕。6.2.2攻毒设区设5个10倍稀释浓度病毒多角体悬浮液，每个浓度设3个重复区，每个重复区30头蚕。同时设无菌生理盐水添食作对照区。6.3攻毒添食与饲养取1片清洁适龄桑叶，切成约5cm×5