基于锚定PCR技术对10种重要农业害虫微卫星DNA位点的筛选及其特征分析-论文.pdf

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1、生物安全学报2014，23(1)：60—65JOURNALOFBIOSAFETYhttp：ffwww．bscn．orgDOI：10．3969／j．issn．2095—1787．2014．o1．012基于锚定PCR技术对10种重要农业害虫微卫星DNA位点的筛选及其特征分析李慧，郎坤玲，沈长朋，李洁，陶云荔，褚栋青岛农业大学农学与植物保护学院，山东省植物病虫害综合防控重点实验室，山东青岛266109摘要：【背景】微卫星DNA广泛存在于真核和原核生物的基因组中，具有多态性丰富、易于检测等特点，在遗传图谱的构建、动植物遗传学育

2、种等方面被广泛应用。【方法】利用5锚定PCR技术对桃小食心虫、桃蛀螟、玉米螟、二点委夜蛾、花蓟马、黄胸蓟马、棕榈蓟马、斑翅果蝇、稻水象甲、扶桑绵粉蚧10种重要农业害虫进行微卫星DNA筛选，并分析各个物种的微卫星DNA的特点。【结果】不同物种的阳性克隆率、微卫星比率、克隆效率和冗余率存在不同程度的差异；在核苷酸碱基数目上，主要为二核苷酸重复序列，占重复位点总数的93．2％～100％，三、四核苷酸重复位点较少。在二核苷酸重复位点中，CA／TG重复位点最为丰富，占重复位点总数的89．2％～100％。这与使用的锚定引物密切相关

3、；10种害虫的微卫星DNA平均重复次数为6．7～8．9次，其中玉米螟具有最高的微卫星DNA重复次数(34次)；在序列类型上，完全型序列占上述害虫序列总数的91．0％～100％。【结论与意义】5锚定PCR技术能够快速挖掘害虫的微卫星DNA位点，本研究结果为这些害虫微卫星位点的进一步利用奠定了基础。关键词：农业害虫；微卫星；5锚定PCR技术；克隆；特征分析IsolationandCharaCterizatiOnofmicrosatelliteDNAlocifrOmtenimportantagriculturalpestin

4、sectsusinganchoredPCRmethodHuiLI，Kun-lingLANG，Chang—pengSHEN，JieLI，Yun—liTAO，DongCHUKeyLaboratoryofIntegratedCropPestManagementofShandongProvince，CollegeofAgronomyandPlantProtection，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao，Shandong266109，ChinaAbstract：【Background】M

5、icrosatelliteDNAconsistsofbothprokatryoticandeukaryoticgenomes．Thecharacteristicsincluderichpolymorphismandeasydetection．Thetechniquehasbeenappliedinanimalandplantgeneticsandbreeding，fortheconstructionforgeneticmaps．【Method】Usingthe5anchoredPCRmethod，microsatcll

6、iteDNAfrom10importantagriculturalpestswereisola—tedandanalyzed，includingCarposinasasakii(Lepidoptera：Carposinidae)，Conogethespunctralis(Lepidoptera：Pyralidae)，Ostrinianubilalis(Lepidoptera：Pyralidae)，Proxenuslepigone(Lepidoptera：Noctuidae)，Frankliniellaintonsa(T

7、hysanoptera：Thripidae)，Thripshamaiiensis(Thysanoptera：Thripidae)，Thripspalmi(Thysanoptera：Thripidae)，Drosophilasuzukii(Diptera：Drosophilidae)，Lissorhoptrusoryzophilus(Coleoptera：Curculionidae)andPhenacoccussolenopsis(Hemiptera：Pseudococcidae)．Thecharacteristicso

8、fmicrosatelliteDNAintheseinsectswereanalyzed．【Result】Thepositiveclonerates，microsatelliterates，clo-ningeficiencyandredundancyratesofmicrosatelliteDNAamongthespecieswe